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稳定表达T-钙粘蛋白黑素瘤细胞株建立及鉴定
1
作者
曹娜
牛艳东
+6 位作者
白秀会
李娜
邬新春
陆洁
孙立新
胡晓梅
段昕所
《生物技术》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第5期63-66,共4页
目的:研究T-钙粘蛋白在黑素瘤中的作用,因此首先建立稳定表达T-钙粘蛋白基因的黑素瘤细胞株。方法:应用脂质体将重组质粒pEGFP-N1/T-cadherin转染到黑素瘤细胞株中,以梯度浓度的G418进行筛选,获得稳定表达克隆;采用荧光显微镜、RT-PCR、...
目的:研究T-钙粘蛋白在黑素瘤中的作用,因此首先建立稳定表达T-钙粘蛋白基因的黑素瘤细胞株。方法:应用脂质体将重组质粒pEGFP-N1/T-cadherin转染到黑素瘤细胞株中,以梯度浓度的G418进行筛选,获得稳定表达克隆;采用荧光显微镜、RT-PCR、Western-blot和免疫细胞化学鉴定。结果:G418筛选14d后,800μg/ml为最佳筛选浓度,600μg/ml为最佳维持培养浓度。筛选后形成抗性细胞克隆,成功转染的细胞在荧光显微镜下观察发出绿色荧光;RT-PCR扩增出T-钙粘蛋白RNA预期的片段;Western-blot、免疫细胞化学证实转染的细胞有T-钙粘蛋白的表达;未转染的细胞则不表达。结论:pEGFPN1/T-cadherin成功转染至黑素瘤细胞株并稳定表达。
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关键词
T-钙粘蛋白
黑素瘤细胞
pEGFP—N1
脂质体2000
G418
原文传递
题名
稳定表达T-钙粘蛋白黑素瘤细胞株建立及鉴定
1
作者
曹娜
牛艳东
白秀会
李娜
邬新春
陆洁
孙立新
胡晓梅
段昕所
机构
承德医学院
承德医学院附属
医院
皮肤
科
承德医学院附属
医院
中心实验室
迁西县医院内分泌科
出处
《生物技术》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第5期63-66,共4页
基金
河北省科技支撑计划项目("T-钙粘蛋白在恶性黑素瘤中表达及基因转染研究"
09276101D-14)资助
文摘
目的:研究T-钙粘蛋白在黑素瘤中的作用,因此首先建立稳定表达T-钙粘蛋白基因的黑素瘤细胞株。方法:应用脂质体将重组质粒pEGFP-N1/T-cadherin转染到黑素瘤细胞株中,以梯度浓度的G418进行筛选,获得稳定表达克隆;采用荧光显微镜、RT-PCR、Western-blot和免疫细胞化学鉴定。结果:G418筛选14d后,800μg/ml为最佳筛选浓度,600μg/ml为最佳维持培养浓度。筛选后形成抗性细胞克隆,成功转染的细胞在荧光显微镜下观察发出绿色荧光;RT-PCR扩增出T-钙粘蛋白RNA预期的片段;Western-blot、免疫细胞化学证实转染的细胞有T-钙粘蛋白的表达;未转染的细胞则不表达。结论:pEGFPN1/T-cadherin成功转染至黑素瘤细胞株并稳定表达。
关键词
T-钙粘蛋白
黑素瘤细胞
pEGFP—N1
脂质体2000
G418
Keywords
T - cadherin
Melanoma
pEGFP - N1
Lipofectamine2000
G418
分类号
Q812 [生物学—生物工程]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
稳定表达T-钙粘蛋白黑素瘤细胞株建立及鉴定
曹娜
牛艳东
白秀会
李娜
邬新春
陆洁
孙立新
胡晓梅
段昕所
《生物技术》
CAS
CSCD
北大核心
2013
0
原文传递
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参考文献
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