家兔“风门”穴肌膜神经末梢感受器通路的实验

目的:观察家兔“风门”穴肌膜神经末梢感受器通路与皮肤末梢感受器通路的关系。方法:实验于2004-10/11在徐州医学院附属连云港医院肿瘤生物实验室完成。在4只雄性家兔经“风门”穴的肌膜注射神经追踪剂荧光素核黄,成活18～24h,分别取C2～L5背根神经节、颈、胸交感神经节、肠系膜下神经节、大脑、小脑、丘脑、脑干、脊髓、胃、小肠、心肌、肺、骶部骶棘肌、肝、膀胱、脾、腹主动脉、肠系膜下动脉、腹腔淋巴节、牵涉区部位的皮、骶部的皮及耳,冰冻连续切片,分别做成两套,一套蒸馏水贴片,直接在OlympusZX-004荧光显微镜下观察,另一套苏木精-伊红染色后在荧光显微镜下观察。观察其是否与皮内感受器通路相关。结果:4只家兔均成功地进行了风门穴肌膜注射荧光素核黄,共获得胶片288张。①在C3～L3脊神经节发现标记细胞,以T3～T12标记细胞较多;在颈、胸交感神经节及肠系膜下神经节发现标记细胞;在胃黏膜下标记到副交感神经元;在小肠黏膜及黏膜下标记到大量的节细胞;在大脑的侧脑室壁标记到大量带状排列的小细胞;下丘脑的四脑室底部标记到部分多角细胞。②在脊髓前、后角、小脑、骶棘肌、背阔肌、膈肌的肌膜、心肌的内、外膜,胃、膀胱壁、肺支气管壁、肝管壁、胆囊壁的外膜和黏膜、肩关节滑膜、腹主动脉、肠系膜动脉壁的内、外膜、以及牵涉区和骶部及耳皮内毛细血管袢发现有荧光密集区。结论:家兔“风门”穴肌膜神经末梢感受器通路网络由大脑和下丘脑高位中枢的部分神经细胞、脊神经节、交感神经节及节后神经元、副交感神经元等四大神经网络组成,较皮肤末梢感受器通路网络更为广大。

家兔胃外膜神经末梢感受器通路与皮部经络的相关实验

目的:观察内脏的感觉感受器通路网络,探讨家兔胃外膜的神经末梢感受器通路与皮部经络的关系。方法:实验于2004-10/11在连云港市第一人民医院肿瘤生物实验室完成。将4只家兔分别经胃体、胃底、贲门、幽门处的胃外膜注射神经追踪剂荧光素核黄逆行神经追踪,成活18～24h和30～36h后,分别取C2～L5脊神经节、颈、胸交感神经结、肠系膜下神经节、大脑、小脑、丘脑、脑干、脊髓、胃、小肠、心肌、肺、骶部骶脊肌、肝、膀胱、脾、腹主动脉、肠系膜下动脉、腹腔淋巴结、牵涉区部位的皮、骶部的皮及耳,冰冻连续切片,分别做成两套,一套蒸馏水贴片,直接在OlympusZX-004荧光显微镜下观察,另一套苏木精-伊红染色后在荧光显微镜下观察其是否与皮内感受器通路相关。结果:4只家兔均成功取材,共获得胶片288张。①追踪18～24h在C3～L3脊神经节发现标记细胞,以T3～T12标记细胞较多;在颈、胸交感神经节及肠系膜下神经节发现标记细胞;在胃黏膜下标记到副交感神经元;在小肠黏膜及黏膜下标记到大量的节细胞;在脊髓前、后角、骶脊肌的肌膜、胃、膀胱壁的外膜和黏膜、心肌的内、外膜,腹主动脉、肠系膜动脉壁的内、外膜以及皮内毛细血管袢发现有荧光密集区。大脑、小脑、丘脑、脑干没有见到明显的荧光密集区。②追踪30～36hC3～T2脊神经节标记细胞大部分消失,T3～T10仍较多,在颈、胸交感神经节及肠系膜下神经节发现的标记细胞与追踪18～24h相似,荧光密集区的部位同追踪18～24h。结论:家兔胃外膜神经末梢感受器通路网络主要在脊髓及脊髓前,与高位中枢关系不大。胃外膜的神经末梢感受器通路网络与胃牵涉区皮肤末梢感受器通路网络在脊神经节、交感神经节及节后神经元相互重叠,其末梢感受器上、下行通路网络在脊髓前、后角、骶脊肌的肌膜、胃、膀胱壁的外膜和黏膜、心肌的内、外膜,腹主动脉、肠系膜动脉壁的内、外膜以及皮内毛细血管袢等部位的相互重叠,为皮部经络学说提供了又一形态学资料。

影像学检查和血清肿瘤标志物检测对肺癌诊断及病理分型的价值

目的 探讨几种常用肿瘤标记物CEA、NSE、LTA检测与影像学诊断对肺癌的检查及病理分型相关研究。资料与方法 选择 190例肺部病变的患者 ,均摄胸部X线平片和CT扫描及肿瘤标记物CEA、NSE、LTA外周血清检测。结果 (1)CT诊断鳞癌 5 0例、腺癌 4 6例、小细胞性未分化癌 14例、良性病变 2 0例、未定型 6 0例。 (2 )三项肿瘤标记物检测水平及敏感性鳞癌LTA为 85 .3% ,腺癌CEA为 86 .9% ,小细胞未分化癌NSE为 93.3%。 (3)影像学诊断与肿瘤标记物相结合 ,定性诊断及病理分型上升率鳞癌为 14 .7% ,腺癌 11.5 % ,小细胞未分化癌为 4 6 .7%。结论 影像学检查与几种常见肿瘤标记物检测结合在肺癌的诊断、病理分型及良恶性病变的鉴别起着重要的作用 。

梯度离心法在肿瘤药物敏感性试验中的应用研究

目的 研究梯度离心法在肿瘤细胞药物敏感性试验中的应用。方法 采用淋巴细胞分离液梯度离心法分离纯化癌细胞 ,MTT比色法测定 4 5例体外原代癌细胞对 8种常用化疗药物的敏感性。结果 采用梯度离心法收集纯化癌细胞 ,癌细胞获得百分率为 94 .6 5± 2 8.4 7,药敏阳性率为 71.11% ,与传统方法相比 ,差异有非常显著性 (P<0 .0 1)。结论 梯度离心法 MTT肿瘤体外药敏试验是一种良好的实验方法 。

梯度离心法在肿瘤药敏试验中的应用及临床相关性研究

目的 研究梯度离心法在肿瘤药敏试验中的应用及肿瘤药敏试验与临床个体化化疗的相关性。方法 取 4 6例肿瘤患者新鲜癌细胞 ,梯度离心后用MTT法检测癌细胞对 8种常用抗癌药的敏感性 ;根据药敏结果对患者进行化疗 ,无敏感药物者按经验方案化疗 ,观察实验与临床疗效的相关性。结果 改良法癌细胞获得百分率为 94 6 5± 2 8 4 7,与传统方法比较差异有显著性 (P <0 0 1) ;药敏试验阳性者 2 5例 ,阴性者2 1例。实验提示敏感药物化疗者的有效率为 76 % (19/ 2 5 ) ;耐药者按经验方案化疗 ,有效率为 2 8 6 % (6 /2 1)。P <0 0 1,差异有显著性 ;实验与临床符合率达 73 9% (34/ 4 6 )。结论 梯度离心MTT法体外癌细胞药敏试验能更好的指导临床个体化治疗 ,具有预见癌症患者临床个体化化疗疗效的重要价值。

乳腺癌患者外周血T淋巴细胞及NK细胞的检测及其临床意义

目的:探讨乳腺癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞活性的临床意义。方法:采用流式细胞仪测定乳腺癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的活性,以正常人作对照。结果:乳腺癌患者外周血CD3+,CD4+,NK细胞数量及CD4+/CD8+比值较正常对照组均明显下降(P<0.05),而CD8+细胞水平显著升高。外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞数量的改变与乳腺癌临床病理指标有关,分期越晚,CD3+细胞、CD4+细胞、CD4+/CD8+细胞比值及NK细胞数量越低,CD8+细胞水平越高;I、II期乳腺癌患者与III、IV期患者之间有显著差异(P<0.05)。结论:乳腺癌患者细胞免疫功能低下,且临床病理分期越晚,其免疫功能越低,检测T淋巴细胞亚群、NK细胞可用于乳腺癌患者的免疫监测。

胃癌患者外周血T淋巴细胞及NK细胞检测的临床意义

目的:探讨胃癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的活性检测的临床意义。方法:采用流式细胞仪测定胃癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的活性,以正常人作对照分析。结果:胃癌患者外周血CD3+、CD4+、NK细胞数量及CD4+/CD8+比值较正常对照组均明显下降(P<0.05),而CD8+细胞水平显著升高。外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞数量的改变与胃癌临床病理分期有关,分期越晚,CD3+、CD4+及NK细胞数量CD4+/CD8+细胞比值越低,CD8+细胞水平越高;Ⅰ、Ⅱ期胃癌患者与Ⅲ、Ⅳ期患者之间有显著差异(P<0.05)。结论:检测T淋巴细胞亚群、NK细胞可用于胃癌患者的免疫状态监测。

家兔“风门”穴皮内神经末梢感受器通路的研究

目的:探讨家兔“风门”穴皮内神经末梢感受器通路与皮肤末梢感受器通路的关系,为中医皮部经络学说提供形态学依据。方法:实验于2005-10/11在连云港市第一人民医院肿瘤生物实验室进行。①选取雄性家兔4只,随机数字表法分为神经逆行追踪18～24h组、神经逆行追踪30～36h组,每组2只。②两组兔以乌拉坦1.5g/kg麻醉后,经双侧“风门”穴皮内注射荧光素核黄(Sigma,批号74681-68-8)1g/L(含核黄500μL)逆行神经追踪,神经逆行追踪18～24h组和神经逆行追踪30～36h组兔分别成活18～24h,30～36h后处死。③分别取C2～L5脊神经节、颈、胸交感神经节、肠系膜下神经节、大脑、小脑、丘脑、脑干、脊髓、胃、小肠、心肌、肺、肾、骶脊肌、背阔肌、膈肌、肠系膜下动脉、牵涉区部位的皮、骶部、“足三里”穴部的皮及耳,冰冻连续切片,分别做成两套,一套蒸馏水贴片,直接在Olympus ZX-004荧光显微镜下寻找各组织荧光标记的神经细胞、荧光标记密集的神经末梢部位;另一套行苏木精-伊红染色后再置于荧光显微镜下,观察有无新的发现。结果:4只兔均进入结果分析。①神经逆行追踪18～24h组:在C3～L3脊神经节发现标记细胞,以T3～12标记细胞较多;在颈、胸交感神经节及肠系膜下神经节发现标记细胞;在小肠黏膜及黏膜下标记到大量的节细胞;在脊髓后角、下丘脑的橄榄核、骶脊肌、背阔肌、膈肌的肌膜、心肌的内、外膜,胃、膀胱壁、肺支气管壁、肝管壁、胆囊壁的外膜和黏膜、肩关节滑膜、腹主动脉、肠系膜动脉壁的内、外膜、肾小管以及胃牵涉区、足三里穴的皮和骶部及耳的皮内毛细血管袢发现有荧光密集区。②神经逆行追踪30～36h组:C3～T2脊神经节核黄标记细胞大部分消失,T3～10仍较多,在颈、胸交感神经节、肠系膜下神经节及小肠节细胞的标记细胞与神经逆行追踪18～24h组相似,荧光密集区的部位同神经逆行追踪18～24h组,但更密集。结论:家兔“风门”穴皮内神经末梢感受器通路网络由脊神经节、交感神经节及节后神经元和小肠节细胞等神经网络组成,与皮肤末梢感受器通路网络基本相同。

皮内注射利多卡因示踪剂观察神经末梢感受器通路的逆行神经追踪

目的:观察皮内注射利多卡因是否能通过皮内神经末梢感受器通路,在神经系统形成高药物浓度,并与静脉注射相比较。方法:实验于2004-10/11在连云港市第一人民医院肿瘤生物实验室进行。将12只雄性家兔随机分为皮内注射组和静脉注射组两组,每组6只,两组又分为给药后18,22,26h3个亚组,每亚组2只。皮内注射组在家兔肩胛区脊柱T3～4棘突两旁1cm的皮肤皮内注射10g/L利多卡因4mg/kg,分两三点注入,使之呈苍白桔皮样皮丘;静脉注射组经静脉缓慢推注10g/L利多卡因4mg/kg。在给药后相应时间点处死兔,取脊神经节、肠系膜下神经节、脊髓、下丘脑和肌肉,分别匀浆测定利多卡因含量。每组3个时间点所取组织作为一组,取平均值进行比较。结果:12只兔进入结果分析。①组间比较:皮下注射组脊神经节、肠系膜下神经节、下丘脑和肌肉的利多卡因含量显著高于静脉注射组[(248.1±8.6),(164.1±4.7),(15.7±1.0),(23.7±2.6)ng/g;(29.8±2.4),(55.7±2.8),(0.98±0.26),(1.98±0.3)ng/g,P<0.01];脊髓利多卡因含量显著低于静脉注射组[(20.7±2.7),(24.8±2.3)ng/g,P<0.05]。②组内相比:皮下注射组脊神经节利多卡因含量显著高于肠系膜下神经节(P<0.01);脊神经节、肠系膜下神经节显著高于脊髓、下丘脑和肌肉(P<0.01)。结论:皮内注射利多卡因,能通过皮内神经末梢感受器通路在脊神经节和肠系膜下神经节形成高药物含量,还能到达下丘脑,高于静脉给药途径。皮内注药主要作用部位是脊神经节和肠系膜下神经节。

家兔血管神经末梢感受器通路与皮肤末梢感受器通路的关系

目的:为进一步明确血管神经末梢感受器通路与皮肤末梢感受器通路的关系,从家兔血管入手,用形态学方法来观察分析血管的感受器通路网络。方法:实验于2004-10/11在连云港市第一人民医院肿瘤生物实验室进行。①选取雄性家兔4只,随机数字表法分为神经逆行追踪18～24h组、神经逆行追踪30～36h组,2只/组。②两组兔以乌拉坦1.5g/kg麻醉后,经耳缘静脉注射1g/L荧光素核黄(Sigma,批号74681-68-8)500μL逆行神经追踪,神经逆行追踪18～24h组规定兔成活18～24h,神经逆行追踪30～36h组规定兔成活30～36h。③分别取C2～L5脊神经节、颈、胸交感神经节、肠系膜下神经节、大脑、小脑、丘脑、脑干、脊髓、胃、小肠、心肌、肺、肾、骶脊肌、肠系膜下动脉、牵涉区部位的皮、骶部的皮及耳,冰冻连续切片,分别做成两套,一套蒸馏水贴片,直接在OlympusZX-004荧光显微镜下寻找各组织荧光标记的神经细胞、荧光标记密集的神经末梢部位;另一套行苏木精-伊红染色后再置于荧光显微镜下,观察有无新的发现。结果:4只兔均进入结果分析。①神经逆行追踪18～24h组:在颈、胸交感神经节及肠系膜下神经节发现标记细胞;在胃黏膜下标记到副交感神经元;在小肠黏膜及黏膜下标记到大量的节细胞;在C2～L5脊神经节未发现标记细胞,但在神经节外膜上可见密集的荧光;在脊髓前、后角未见到标记细胞及明显的荧光密集区,但有较弥散的荧光;在下丘脑、大脑及小脑未发现标记细胞及明显的荧光密集区,骶脊肌膜、气管内外膜、心肌的内外膜、肾小球、皮内毛细血管袢发现较明显的荧光密集区;肠系膜动脉壁发现密集荧光。苏木精-伊红染色后,肠系膜下神经节有标记细胞,细胞核为金黄色,细胞质为蓝黑色,在胃黏膜下标记到副交感神经元。②神经逆行追踪30～36h组:在C2～L5脊神经节未发现核黄标记细胞,在颈、胸交感神经节及肠系膜下神经节发现的标记细胞与神经逆行追踪18～24h组相似,荧光密集区的部位亦相同。结论:家兔血管内膜的神经末梢感受器通路网络主要由交感神经节及节后纤维、副交感神经元等神经网络组成,上行通路网络可达脊神经节和脊髓,下行通路网络可达骶脊肌膜、气管内外膜、心肌的内外膜、肾小球、皮内毛细血管袢、动脉壁等组织。与胃牵涉区皮肤末梢感受器通路网络在交感神经节、节后纤维及其上、下行通路网络相互重叠。

NES及TSGF、SA联检在肺癌诊断中的价值

肺癌是一种恶性程度高，病程发展快的癌症。如果肺癌患者能够及时确诊并加以治疗，那么其病情将会控制，存活率可望提高，因此肺癌的早期诊断意义重大。神经元特异性烯醇化酶（ＮＳＥ）被认为是诊断小细胞肺癌较灵敏的肿瘤标志物之一，但单项检测ＮＳＥ往往具有一定的局限...

MTT法原代癌细胞培养药物敏感性试验及其影响因素的研究

目的 研究MTT法原代癌细胞药物敏感性试验及影响因素。方法 采用MTT比色法 ,测定 45例 (胃癌 15例 ,肺癌 10例 ,大肠癌 12例 ,乳癌 8例 )体外原代癌细胞对 8种常用化疗药物的敏感性。结果 4种肿瘤细胞对 8种化疗药物的敏感性不同。采用30分钟消化时间、10 0 %～ 6 0 %密度梯度淋巴细胞分离液以及标本离体后即刻实验 ,活细胞百分率为 94 6 5± 2 8 47,与其它实验条件相比差异显著 (P <0 0 1)。结论 MTT法是一种简便、快捷的肿瘤体外药敏试验方法 ,为临床实验个体化化疗提供了实验依据。消化时间、淋巴细胞分离液密度梯度。

MTT法癌细胞体外药敏试验的改良及其指导下胃、肠癌的预见性化疗

目的 研究 MTT法体外药敏试验的改良方法及其指导下胃肠癌的预见性化疗。方法 取 2 7例新鲜胃肠癌标本经梯度离心后行体外 MTT法药物敏感试验 ,设为 MTT试验组 ;2 7例同期胃肠癌患者作经验对照组。试验组按药敏试验结果化疗 ,耐药者按临床经验化疗 ;对照组按临床经验化疗。结果 2 7例药敏试验完成实验 ,药敏阳性者胃癌 8例 ,肠癌 5例 ;阴性者胃癌 7例 ,肠癌 7例。临床化疗结果 :试验组中对药物敏感者化疗有效率76 .9% ,耐药者中有效率 14 .3% ,差异有非常显著性 ,(χ2 =10 .7,P<0 .0 1) ,试验组总有效率为 4 4 .4 % ,经验对照组化疗后有效率为 2 5 .9% ,两组疗效差异有非常显著性 (χ2 =9.5 ,P<0 .0 1)。 MTT实验结果与临床化疗结果的符合率 :81.4 8%。结论 改良 MTT法癌细胞体外药物敏感性试验可以预见胃、肠癌的化疗。

联合检测TSGF、NSE和CA_(125)对肺癌诊断价值的探讨

目的 探讨恶性肿瘤生长因子 (TSGF)、神经元特异性烯醇化酶 (NSE)及血清糖链抗原 12 5 (CA1 2 5)等三项指标联合检测对肺癌的诊断价值。方法 TSGF采用分光光度比色法 ,NSE及 CA1 2 5采用酶联免疫法。结果 肺癌组 (n=6 5 )三项指标均明显高于肺良性病变组 (n=6 7)和健康对照组 (n=73) (P<0 .0 1)。TSGF对肺癌诊断的敏感性为 86 .9% ,特异性为 91.11% ;NSE敏感性为 46 .17% ,特异性为 93.2 3% ;CA1 2 5敏感性为 5 6 .43%、特异性为 84.72 %。三项指标中如以三项阳性作为肺癌诊断依据 ,则阳性率为 41.35 % ,对照组无 1例阳性。结论 TSGF、 NSE、 CA1 2 5三项指标对肺癌的诊断有一定价值 ,三者联合检测有明显的互补性 。

NSE及TSGF,SA联检对肺癌的诊断价值

肺癌是一种恶性程度高、病程进展快的癌症。如果肺癌患者能够及时得到正确诊断治疗 ,那么其病情将得到有效的控制 ,存活率可望提高。因此 ,肺癌的正确诊断意义重要。神经元特异性烯醇化酶 (NSE)被认为是诊断小细胞肺癌的较灵敏肿瘤标志物之一 ,但单项检测 NSE往往具有一定的局限性。我们利用恶性肿瘤特异性生长因子 (TSGF)、唾液酸 (SA)与NSE联合检测 ,探讨其对肺癌的诊断价值。1 材料和方法1.1 标本来源 :31例肺癌标本均来自我院住院病人 ,其中男2 7例 ,女 4例 ;年龄 45～ 6 8岁 ,平均 5 5岁。全部病例均经病理确诊。正常对照组 10 0例 ,来自本市机关干部体检者 ,

高通量靶向基因测序技术探查食管癌放射敏感性相关基因

目的通过高通量靶向基因检测（TPS）技术探查与食管癌放射敏感性相关的基因。 方法收集22例单纯放疗的食管癌患者外周血，提取DNA，利用Haloplex方法对356种已知恶性肿瘤相关基因进行文库捕获，基于Illumina MiSeq技术平台进行TPS，测序数据进行单核苷酸多态性/插入缺失标记（SNP/InDel）位点数据库注释和通路富集分析。将22例患者根据放疗近期疗效分为放射敏感组（CR＋PR）和放射抗拒组（PD＋SD），对其中的非同义突变位点进行统计分析，筛选与食管癌放射敏感性相关基因。 结果22例患者的测序数据中，97%以上的reads与人类基因组序列相匹配，数据相当可靠。SNP/InDel数据库注释结果显示，22例患者的突变位点主要分布在外显子区域，其对应的功能分布主要为错义与同义单核苷酸变异（SNV）。进一步筛选出与食管癌相关的高频突变基因有23个。IPA通路富集结果显示，与食管癌发生发展相关的通路有3条，分别为BRCA1基因相关的DNA修复通路、DNA双链断裂修复的非同源末端连接修复通路和ATM信号通路。根据放疗疗效筛选出与食管癌放射敏感性相关的基因分别为错配修复基因蛋白1（PMS1）、纤维连接蛋白1（FN1）、MLH1、鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1（BRAF）、人类同源的果蝇片段基因1（PTCH1）和CYP2C19。进一步统计分析显示，PTCH1在22例患者中均有突变，其中rs199476092和rs202111971突变位点仅见于放射抗拒组。 结论PTCH1基因编码区内rs199476092和rs202111971突变位点与食管癌患者的放射敏感性密切相关。