DNA甲基转移酶1对前列腺癌细胞增殖和迁移侵袭的影响

目的:探究DNA甲基转移酶1(DNMT1)对前列腺癌细胞增殖和迁移侵袭的影响。方法:采用小干扰RNA(siRNA)沉默前列腺癌细胞株(PC3和DU145)中DNMT1表达,通过定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测沉默效率。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞的体外增殖能力;TransWell检测细胞体外迁移和侵袭能力;Western blot检测si-DNMT1细胞后上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白表达。组间比较采用t检验。结果:qPCR和Western blot实验结果显示DNMT1在前列腺癌细胞中高表达,并成功构建siDNMT1 PC3和DU145细胞系。4 d后,CCK-8结果显示,siDNMT1细胞增殖能力低于相应对照组[PC3:1.27±0.71和1.44±0.48比1.66±0.58,t=7.268、5.108,P<0.01;DU145:1.43±0.12和1.27±0.10比1.80±0.06,t=4.841、7.493、P<0.01]。Transwell显示,与对照组细胞比较,siDNMT1细胞迁移和侵袭能力降低(P<0.05)。Western blot结果显示,沉默DNMT1后E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达升高,而N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平下降。结论:DNMT1在前列腺癌中高表达,沉默DNMT1后可有效抑制前列腺癌细胞增殖和侵袭迁移能力。

双调控DD3-ZD55条件增殖腺病毒荷载核基质结合区结合蛋白1短发卡RNA联合化疗对激素敏感性前列腺癌LNcap细胞的杀伤作用

目的观察DD3启动子、E1B55KD缺失双调控并荷载核基质结合区结合蛋白1(SATB1)短发卡RNA(shRNA)的条件增殖腺病毒DD3-ZD55-SATB1联合多西他赛(Docetaxel, DTX)对激素敏感性前列腺癌LNcap细胞的杀伤效果并探讨作用机制。方法 LNcap细胞来源于上海中科院细胞库。将LNcap细胞分为4组进行干预, 分别为联合组(DD3-ZD55-SATB1+DTX, 5 MOI+1 ng/ml)、病毒治疗组(DD3-ZD55-SATB1, 10 MOI)、多西他赛组(DTX, 2 ng/ml)、磷酸盐缓液组(PBS)。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移和侵袭;Hoechst-33258检测细胞凋亡;蛋白质印迹法(Western blot)检测SATB1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、Caspase-3与Caspase-8的表达。采用单因素方差分析进行多组件比较。结果 CCK-8结果, 联合组吸光度值为1.95±0.12、DD3-ZD55-SATB1组为2.33±0.03(t=5.43, P<0.01)、DTX组为2.68±0.09(t=8.42, P<0.01), PBS组为3.49±0.04(t=21.71, P<0.01), 联合组的吸光度值显著低于单一治疗组。Transwell结果:联合组穿透小室膜的细胞数为49.25±6.24、DD3-ZD55-SATB1组为79.25±7.41(t=6.19, P<0.05)、DTX组为80.75±4.57(t=8.15, P<0.05), PBS组为118.75±5.38(t=16.88, P<0.01), 联合组小室底膜细胞数较单一治疗组明显减小。Hoechst-33258显示:联合组凋亡率分别为(55.54±5.43)%, DD3-ZD55-SATB1组为(41.23±3.28)%(t=5.29, P<0.01), DTX组为(35.15±2.47)%(t=8.19, P<0.01), PBS组为(9.62±2.69)%(t=17.49, P<0.01), 联合组与病毒或化疗药物单一治疗组比较, 细胞凋亡更加明显。Western blot结果, 以PBS组内的蛋白表达为标准计算为1.00, 联合组、DD3-ZD55-SATB1组和DTX组内, SATB1相对表达量分别为0.48±0.04、0.63±0.05和0.79±0.04, 联合组内SATB1表达较单一治疗组下调更为显著, 差异有统计学意义(t=4.06、10.38, P<0.01)。E-cadherin、Vimentin和MMP-2蛋白在联合组、DD3-ZD55-SATB1组和DTX组内相对表达量分别为2.25±0.14、0.48±0.07、0.45±0.04, 1.83±0.12、0.69±0.07、0.65±0.05和1.60±0.06、0.79±0.04、0.76±0.05。与PBS组比较, 治疗组内E-cadherin表达上调, Vimentin和MMP-2的表达下调, 联合组内E-cadherin的上调与Vimentin和MMP-2的下调更为显著, 与单一治疗组比较, 差异有统计学意义(t=3.94、3.79、5.48, P<0.05;t=7.43、6.99、8.88, P<0.01)。凋亡相关蛋白Caspase-8和Caspase-3的相对表达量分别为2.38±0.14、2.44±0.16, 1.84±0.07、1.90±0.05和1.70±0.13、1.67±0.07。各治疗组内Caspase-8和Caspase-3的表达较PBS组明显上调。联合组内Caspase-3和Caspase-8的上调更为显著, 与单一治疗组比较, 差异有统计学意义(t=5.89、5.75, P<0.01;t=6.26、7.91, P<0.01)。结论 DD3-ZD55-SATB1联合DTX在体外可有效抑制LNcap细胞的增殖、迁移和侵袭, 并诱导肿瘤细胞凋亡, 且优于单独使用DD3-ZD55-SATB1或DTX, 其作用机制为抑制上皮-间充质转化进程和上调Caspase-8和Caspase-3诱导肿瘤凋亡有关。