竹节香附素A对HepG2细胞缺氧诱导因子-1α基因和蛋白表达的影响

目的:探讨竹节香附素A对缺氧条件下人肝癌细胞株(HepG2)细胞缺氧诱导因子-1α(hypoxiainducible factor-1α,HIF-1α)基因和蛋白表达的影响。方法:取体外低氧环境下HepG2细胞进行不同干预:特定浓度(10μg/ml)竹节香附素A不同作用时间(0 h、6 h、12 h、24 h);不同浓度(0、5、10、20μg/ml)竹节香附素A特定作用时间(24 h)处理,通过半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测HepG2细胞HIF-1αmRNA和蛋白的表达变化情况。结果:体外低氧环境下HepG2细胞可见HIF-1αmRNA和蛋白强表达,特定浓度(10μg/ml)竹节香附素A可显著抑制HIF-1αmRNA和蛋白的表达水平,药物作用0 h、6 h、12 h、24 h时HIF-1αmRNA条带灰度值(A/A_0)分别为0.73±0.08、0.44±0.12、0.24±0.09、0.07±0.03,差异具有统计学意义(P<0.01);HIF-1α蛋白A/A_0比值分别为2.31±0.33、1.70±0.17、1.30±0.96、0.09±0.13,差异具有统计学意义(P<0.01)。不同浓度竹节香附素A特定作用时间(24 h)处理可显著抑制HIF-1αmRNA和蛋白的表达水平,药物浓度0、5、10、20μg/ml处理,HIF-1αmRNA A/A_0比值分别为0.65±0.07、0.43±0.08、0.19±0.03、0.08±0.02,差异具有统计学意义(P<0.01);HIF-1α蛋白A/A_0比值分别为0.84±0.08、0.39±0.06、0.28±0.04、0.08±0.03,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:竹节香附素A对缺氧条件下肝癌HepG2细胞HIF-1αmRNA和蛋白的表达具有抑制作用,并存在时间-剂量依赖性效应。

竹节香附素A对人肝癌HepG_2细胞VEGF基因表达的影响

目的观察竹节香附素A对人肝癌细胞株HepG_2细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法体外培养HepG_2细胞,将不同浓度的竹节香附素A与HepG_2细胞共培养,采用酶联免疫吸附(ELISA)方法检测不同浓度竹节香附素A处理HepG_2细胞24 h后细胞培养上清液中VEGF蛋白含量的变化;半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和蛋白免疫印迹(Western blot)法分别检测竹节香附素A对HepG_2细胞VEGF mRNA和蛋白相对表达水平(阳性条带灰度值/β-actin带灰度值)的影响。结果 (1)不同浓度(5、10、20μg/ml)竹节香附素A处理HepG_2细胞24 h后,细胞培养上清液中VEGF水平呈剂量依赖性降低(P=0.000)。(2)竹节香附素A对HepG_2细胞VEGF mRNA表达的影响:(1)不同浓度竹节香附素A(0、5、10、20μg/ml)处理HepG_2细胞24 h后,VEGF mRNA的相对表达量呈剂量依赖性减少(0.96±0.07、0.75±0.09、0.55±0.10、0.32±0.11,P=0.000)。(2)10μg/ml竹节香附素A分别处理HepG_2细胞0、6、12、24 h后,VEGF mRNA的相对表达水平呈时间依赖性下降(0.77±0.05、0.53±0.09、0.32±0.12、0.15±0.04,P=0.000)。(3)竹节香附素A抑制HepG_2细胞VEGF蛋白的表达:(1)不同浓度竹节香附素A(0、5、10、20μg/ml)处理HepG_2细胞24 h后,VEGF蛋白相对表达水平呈剂量依赖性下降(2.08±0.28、1.43±0.22、0.72±0.15、0.17±0.10,P=0.000)。(2)10μg/ml竹节香附素A分别处理HepG_2细胞0、6、12、24 h后VEGF蛋白相对表达水平呈时间依赖性减少(2.47±0.05、1.36±0.02、0.30±0.02、0.07±0.02,P=0.000)。结论竹节香附素A能够下调HepG_2细胞VEGF表达,这可能是其抑制肝癌细胞生长增殖的重要机制之一。