PRSS23在蛋鸡卵泡颗粒细胞的表达及其与卵泡液孕激素含量的关系研究

为研究丝氨酸蛋白酶23(PRSS23)在蛋鸡卵泡中的表达部位及其mRNA在颗粒细胞中的表达与孕激素(P4)分泌的关系,选取直径为3~5 mm的大白卵泡(LWF)和直径为6~8 mm的小黄卵泡(SYF),应用免疫组织化学技术对PRSS23进行组织定位;分别选取小白卵泡(SWF)、LWF、SYF、大黄卵泡(LYF),用1 mL注射器抽取卵泡液,测定不同大小等级前卵泡卵泡液中P4的含量;刮取位于卵泡内膜上的颗粒细胞,利用实时荧光定量PCR技术检测PRSS23基因mRNA在蛋鸡不同大小等级前卵泡颗粒细胞中的表达情况。结果显示,PRSS23在蛋鸡卵泡颗粒细胞层、膜细胞层和卵丘细胞均有表达,在SYF颗粒细胞层表达量最高;PRSS23基因mRNA在SYF中的含量显著高于其他卵泡(P<0.05);P4在SYF卵泡液中的含量显著高于其他卵泡卵泡液(P<0.05)。以上结果表明,PRSS23在SYF中可能会通过促进颗粒细胞分泌P4来影响卵泡的选择。

CPXM1在蛋鸡卵泡中的表达及其对孕激素分泌的影响

为确定蛋鸡CPXM1在卵泡颗粒细胞中的表达及其在卵泡中的定位,同时研究CPXM1表达与P4分泌的关系。选取5只母鸡,收集SWF(小白卵泡)、LWF(大白卵泡)、SYF(小黄卵泡)和LYF(大黄卵泡),分别刮取颗粒细胞,通过QRTPCR检测CPXM1 mRNA在不同发育阶段卵泡颗粒细胞中的表达;运用免疫组化定位CPXM1蛋白在LWF和SYF中的表达;抽取卵泡液,测定各发育阶段卵泡液中P4的浓度。结果发现,CPXM1 mRNA在LWF中的含量显著高于其它卵泡(P<0.05);蛋鸡卵泡膜细胞层、颗粒细胞层和卵丘细胞中均检测到CPXM1蛋白的表达,且在LWF颗粒细胞层中的表达量明显高于其它细胞,同时,在LWF中的表达量也要高于SYF;LYF卵泡液中P4的浓度极显著地高于其它卵泡(P<0.01)。推测CPXM1可能在颗粒细胞中发挥抑制卵泡发育的功能。