基于RGSE模式的本科免疫学实践教学改革的初探

教育部在＂十一五＂教育规划纲要中明确提出,高等医学教学的主要目的是培养基础理论扎实、实践操作熟练和创新意识突出的复合型人才。这需要相关教学理论、教学模式和内容的不断改革和创新,以适应当前社会对医学人才的需求[1]。

空肠弯曲菌pcDNA3.1(-)-peb1A诱导的T细胞活化增殖研究

目的探讨空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,CJ)pcDNA3.1(-)-peb1A疫苗免疫昆明种小鼠后T细胞活化增殖状态。方法重组质粒CJ pcDNA3.1(-)-peb1A免疫昆明种小鼠后,取其脾淋巴细胞,应用ELISA法检测其膜表面分子CD3、CD4、CD8、CD25和CD28。结果检测结果显示:CD3检测,佐剂DNA组高于裸DNA组,在第10天有显著性差异(P<0.05);CD8检测,佐剂DNA组高于裸DNA组,在第10、20天均有显著性差异(P<0.05),裸DNA组也高于两对照组,但仅在第20天有显著性差异(P<0.05);CD25检测,裸DNA组高于NS组,但仅在第10天有显著性差异(P<0.05),佐剂DNA组高于裸DNA组,也仅在第20天有显著性差异(P<0.05);CD4及CD28检测,佐剂DNA组高于裸DNA组,在第10、20天均有显著性差异(P<0.05);在第10、20天各脾淋巴细胞膜表面分子检测,佐剂DNA组高于两对照组,有显著性差异(P<0.05)。结论 CJ pcDNA3.1(-)-peb1A疫苗能够有效地诱导T细胞活化增殖。

过氧化物酶1在乳腺癌中的研究进展

过氧化物酶1(PRDX1)是新近发现的非硒依赖过氧化物酶家族的重要成员,广泛存在于生物体内,参与调控活性氧相关的多种信号通路,从而调控机体的多种生理功能,如细胞生长、细胞凋亡、免疫应答及细胞内环境稳定等。越来越多的证据表明PRDX1与多种恶性肿瘤的发生发展、侵袭和转移密切相关。近年研究发现PRDX1在乳腺癌中具有抑癌和促癌双重作用并与雌激素受体的表达和功能有关,对乳腺癌的诊治有潜在价值。本文对PRDX1的结构功能、作用机制及在乳腺癌中的研究进展作一综述。

αβT细胞TCR偏向取用与SLE的研究概况

系统性红斑狼疮（Systemic Lupus Erythematosus,SLE）是一种以淋巴细胞异常、自身反应性T细胞活化、多种自身抗体产生、补体活化、免疫复合物沉积而导致多系统和多器官损伤为特征的自身免疫性疾病。

LMTK3在ERα阳性乳腺癌中的研究进展

LMTK3是最新发现的在乳腺癌中调控雌激素受体α(estrogen receptor-α,ERα)最有效的转录因子。LMTK3通过多种信号通路发挥生物学功能,不仅可以促进肿瘤细胞的增殖、侵袭及转移,而且与患者的临床分期、预后及耐药息息相关。虽然,目前对LMTK3的研究不多,但已展示出其在雌激素靶器官肿瘤的发生与治疗中的主要地位。本综述主要针对LMTK3在ERα阳性乳腺癌治疗中介导的效应以及机制的研究进行总结。

乳腺癌小鼠模型常用品系在药物研究中的应用

近几年,国内外学者建立了一系列乳腺癌小鼠模型用于乳腺癌的发病机制、侵袭转移、药物治疗效应等研究,常用的乳腺癌小鼠模型有自发、诱导、移植或转基因等几种,这些乳腺癌小鼠模型在一定程度上模拟了乳腺癌在体内发生、侵袭、转移等过程,可为乳腺癌的研究提供基础。本文就乳腺癌小鼠模型常用品系以及在乳腺癌药物治疗研究中应用作简要概述。

支架蛋白Gab2与肿瘤关系的研究进展

Gab2是Gabs家族蛋白中一种至关重要的信号中介分子,该家族蛋白通过接受多种生长因子、细胞因子及抗原等胞外刺激,参与信号转导的放大及整合。Gab2蛋白被蛋白酪氨酸激酶磷酸化激活后,招募富含SH2结构域的信号效应蛋白如SHP2、PI3K的p85亚基、Crk和GC-GAP,主要介导SHP2/RAS/ERK和PI3K/AKT两条经典的信号通路,在多种生理学及病理学过程中发挥重要作用。近年研究发现,异常的Gab2及其信号与乳腺癌、白血病及黑色素瘤等其他人类肿瘤密切相关。本文就Gab2蛋白的结构、信号调控及在肿瘤中的研究进展进行综述。

重组hIL-10在毕赤酵母X-33的表达及其生物活性鉴定

目的:用毕赤酵母表达hIL-10并探索合适的表达条件,为IL-10生物制品研发及临床应用奠定基础。方法:以0.5%甲醇诱导酵母X-33表达rhIL-10,用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定rhIL-10,比较不同温度、不同pH值和有无PMSF条件下rhIL-10的表达水平。用ELISA法测定培养液rhIL-10含量,用Bradford法测定培养液总蛋白含量,计算rhIL-10占总蛋白的比例。以淋巴细胞转化试验分析rhIL-10的生物学活性。结果:SDS-PAGE后可见42 kD左右蛋白条带;Western blot也检测到42kD左右特异性蛋白质条带。pH值为6.0、温度在28℃并加入抑制剂时rhIL-10表达量最高值为20 mg/L,同时段培养液中总蛋白质含量为50 mg/L,rhIL-10占总蛋白比例为40%。在外周血淋巴细胞转化试验中,rhIL-10抑制了淋巴细胞的增殖。结论:hIL-10能在毕赤酵母高效表达,表达产物有较好生物活性;发酵条件对rhIL-10的表达水平影响大,改善发酵条件能促进rhIL-10的表达。

结核性胸膜炎患者胸水和外周血Treg细胞及DC细胞亚群的检测

目的:探讨CD4+CD25+CD127-调节性T细胞及DC细胞亚群在结核性胸膜炎患者外周血及胸腔积液中的表达变化及其临床意义。方法:采集30例健康正常者的外周血以及30例结核性胸膜炎患者的外周血和胸水,应用流式细胞术检测各标本中DC1、DC2亚群、CD4+CD25+CD127-调节性T细胞数量的变化。结果:患者外周血的DC1/PBMC、DC2/PBMC明显低于健康正常外周血(P<0.05);患者胸水中检测到DC细胞,与患者外周血间具有正相关(r=0.503及0.437,P<0.05);患者PBMC中的Treg细胞值明显高于健康正常PBMC(P<0.05);患者胸水中检测到Treg细胞,与患者外周血间具有正相关(r=0.672,P<0.05)。结论:结核性胸膜炎患者外周血中树突状细胞数量比正常对照组低,而Treg的数量较正常对照组高,与正常对照组相比存在显著性差异,表明CD4+CD25+CD127-调节性T细胞和DC细胞亚群可能在结核性胸膜炎中发挥着重要的作用。

TGF-β1诱导结肠癌细胞SW480发生上皮-间质转化及对Twist1表达的影响

目的探讨TGF-β1诱导结肠癌细胞SW480发生上皮-间质转化(EMT)及对Twist1表达的影响。方法采用10 ng/ml的TGF-β1作用结肠癌细胞SW480 72 h,倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化;细胞划痕实验检测细胞体外迁移能力;细胞免疫荧光、Western blot和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测E-cadherin、Vimentin及Twist1的蛋白和mRNA表达。结果经TGF-β1诱导72 h后,SW480细胞呈典型间质型细胞形态,且细胞的迁移能力明显增强(P<0.05);E-cadherin蛋白及mRNA表达显著下降,Vimentin、Twist1蛋白及mRNA表达水平均明显增加(P<0.05)。结论 TGF-β1诱导结肠癌细胞SW480发生上皮间质转化时可促进Twist1的表达。

KIM-1和CysC在重症急性胰腺炎合并急性肾损伤中的早期诊断价值

目的：探讨尿液中肾损伤分子-1（KIM-1）和胱抑素C（CysC）在急性重症胰腺炎（SAP）合并急性肾损伤（AKI）患者中的早期诊断价值。方法收集15例健康体检者作为正常对照，将161例急性胰腺炎（AP）患者分为轻度（MAP）、中度（MSAP）、重度（SAP）3组，其中SAP组又分为AKI和非AKI亚组。采用酶联免疫分析法（ELISA法）测定正常对照组及AP患者发病后12～24 h的尿液KIM-1、CysC水平。结果 SAP组中AKI 亚组的KIM-1和CysC水平明显高于非AKI 亚组（P＜0．01）。结论尿KIM-1和CysC可以作为检测SAP合并AKI的早期生物标记物。

Th17细胞及其相关因子在银屑病发病中的作用及其分子机制

银屑病是一种自身免疫性疾病,表现为以T细胞为主的免疫功能紊乱。Th17细胞是一种能分泌白细胞介素17(IL-17)的T细胞亚群,参与多种自身免疫性疾病的免疫调节。研究发现银屑病患者外周血中存在IL-23和Th17类细胞因子的显著升高,IL-23/Th17细胞轴在银屑病发病机制中有重要作用。除Th17细胞本身,在银屑病患者皮损处,IL-17、IL-22、IL-21等Th17相关细胞因子亦发生改变。调节性B细胞在银屑病的发病过程中有可能通过产生IL-10发挥负向免疫调节功能。本文主要从Th17细胞及其相关因子与银屑病,调节性B细胞和Th17细胞在银屑病发病机制中的拮抗作用几个方面进行综述。

结核性胸膜炎患者外周血和胸水γδT和Th17细胞的频率变化及其意义

目的通过检测结核性胸膜炎患者抗结核治疗前后胸水和外周血中γδT细胞和Th17细胞的比例,探讨2群细胞在该病的发生及治疗过程中的变化及意义。方法选取结核性胸膜炎患者30例,分别采集患者抗结核治疗前和治疗后(7～10 d)的胸水及外周血,分离单个核细胞,采用流式细胞术检测γδT和Th17细胞的比例,同时设立健康对照组。结果与健康对照组相比,抗结核治疗前结核性胸膜炎患者外周血中CD3+T细胞比例显著降低(P<0.05),而γδT细胞的比例显著升高(P<0.05),表达IFN-γ的CD3+T和γδT细胞比例均显著升高(P<0.01);患者胸水中的CD3+T和γδT细胞比例显著高于患者外周血(P<0.05),胞内IFN-γ水平与2群细胞变化一致。抗结核治疗后患者外周血和胸水中CD3+T细胞比例较治疗前升高而γδT细胞比例下降,胞内IFN-γ的水平较治疗前显著降低(P<0.05)。抗结核治疗前结核性胸膜炎患者外周血中CD4+T细胞比例较健康对照组显著降低(P<0.01)而Th17细胞比例显著升高(P<0.01);患者胸水中CD4+T细胞显著高于外周血(P<0.05)而Th17细胞比例显著降低(P<0.05)。抗结核治疗后患者胸水中CD4+T和Th17细胞比例较治疗前升高但无显著性差异;IL-17+T与Th17细胞之间无显著相关性,而CD4+RORγt+T与Th17细胞之间存在显著相关性(r=0.564,P<0.05)。结论γδT和Th17细胞在抗结核治疗前后具有显著差异提示2群细胞可能在结核性胸膜炎的发病和治疗中发挥重要作用。

B细胞BCR CDR3受体库的高通量测序分析概况

B细胞是介导机体体液免疫应答的主要细胞群,其识别、结合抗原主要依赖互补决定区（CDR）,它决定着抗体的特异性,而互补决定区3（CDR3）比CDR1、CDR2更具多样性,通过观察机体B细胞BCR CDR3受体库的多样性、重叠率的大小、

过表达miRNA-7对乳腺癌4T1细胞体外生长的影响

目的探讨过表达miRNA-7(miR-7)对乳腺癌4T1细胞体外生长的影响。方法将真核表达载体pcDNA3.1-miR-7(p-miR-7)体外瞬时转染乳腺癌4T1细胞后,Real-time PCR探针法检测细胞中miR-7的表达;CCK-8法及克隆形成实验观察细胞的增殖和克隆形成情况;划痕法观察细胞体外迁移能力的变化;Western blot检测细胞Akt与p-Akt蛋白表达的变化。结果与对照组比较,p-miR-7载体转染组细胞miR-7的表达水平明显上调,差异有统计学意义(P<0.05);细胞增殖和克隆形成能力明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);划痕实验进一步显示p-miR-7载体转染组细胞的体外迁移能力显著削弱,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot检测结果显示细胞p-Akt蛋白表达显著下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论过表达miR-7能明显抑制乳腺癌细胞的体外生长能力,可能与Akt信号通路传递改变有关。

1月龄Balb/c小鼠胸腺、脾脏、肝脏、小肠和血液TRBV-TRBJ1-1 CDR3谱型分析

目的初步分析1月龄Balb/c小鼠胸腺、脾脏、肝脏、小肠和血液中TRBV-TRBJ1-1 CDR3谱型特征。方法提取1月龄Balb/c小鼠胸腺、脾脏、肝脏、小肠和血液样本的总RNA,逆转录成cDNA,以22条TRBV基因家族为上游引物,共同的TRBJ1-1基因为下游引物(荧光标记),PCR扩增包含完整CDR3区片断,毛细管电泳激光DNA扫描技术分析CDR3谱型的长度和多态性。结果胸腺样本毛细管电泳激光扫描图呈现标准的中间高两端低的多态性分布;各家族CDR3区最长和最短比较,多数为相差8～15个氨基酸的谱型分布。脾脏、肝脏、小肠、血液样本扫描图显示多数家族呈多态性分布,但均出现数量不等的单峰、寡峰、偏峰、低峰;多数家族表现为相差3～13个氨基酸的谱型分布,部分家族在预测大小位置无对应峰型。结论 1月龄Balb/c小鼠胸腺中基本包含TCR基因随机重排的多种克隆性T细胞;脾脏、肝脏、小肠、血液表现为单、寡、多克隆形式的T细胞分布,部分家族T细胞缺失,本实验结果可为进一步研究Balb/c小鼠的T细胞发育、分布、应答及CDR3谱型与疾病关系提供方法和基础。

TTF-1启动子调控microRNA-7真核表达载体的构建

目的构建甲状腺转录因子(TTF-1)启动子调控miR-7表达的真核表达载体,并观察其表达miR-7对人肺癌细胞体外生长的影响。方法抽提人肺癌95D细胞基因组DNA,PCR分别扩增TTF-1启动子序列(promoter)和miR-7前体序列,纯化产物分别经Kpn I/Mul I双酶切和Mul I/HindⅢ双酶切,克隆入PGL3-basic-载体,构建pGL3-basic-TTF-1-promoter-miR-7真核表达载体(命名为p-T-miR-7);将p-T-miR-7真核载体体外瞬时转染人肺癌95D细胞,Real-time PCR探针法检测细胞中miR-7的表达水平;CCK-8实验和克隆形成实验检测细胞增殖情况;划痕实验检测转染后细胞的体外迁移情况。结果经酶切和测序鉴定成功构建TTF-1启动子调控的miR-7真核表达载体p-T-miR-7;转染后72 h,与对照相比,p-T-miR-7转染组中miR-7的表达水平增加约2.5倍(P<0.05);CCK-8实验和克隆形成实验显示,p-T-miR-7转染组中95D细胞的增殖能力明显下降(P<0.05);划痕实验进一步显示,细胞的体外迁移能力也显著削弱(P<0.05)。结论成功构建TTF-1启动子调控的miR-7真核表达载体,这为后续肺癌基因治疗策略开发提供重要前期实验基础。

微小RNA-21与肿瘤关系的研究进展

已有资料显示,一群长度为22~24个核甘酸（nucleotide,nt）的内源性、短小非编码RNA—微小RNA（micro RNA,mi RNA,mi R）,不仅广泛存在于多种生物体中,而且参与包括肿瘤在内的多种疾病的发生过程。近年来的研究发现,mi RNAs家族成员mi R-21与肺癌、胃癌和宫颈癌等多种肿瘤的发生、生长、转移以及预后等密切相关,推测其可作为多种肿瘤临床诊治的新靶标。本文就mi R-21与这些肿瘤的发生关系、调控机制以及诊断和治疗等相关的研究进展作一综述。

自体来源肿瘤全细胞疫苗的研究现状

自体来源肿瘤全细胞疫苗(autologous whole tumor cell vaccine, AWTCV)是现今肿瘤免疫疗法中备受关注的一种靶向疗法,它利用患者自身来源的完整肿瘤细胞制备疫苗。与其他靶向特定抗原的免疫疗法相比,其具有携带相对完整的已知和未知肿瘤抗原、不受MHC限制等优势,因此避免了由于在肿瘤发展过程中某些抗原丢失而造成的肿瘤细胞免疫逃逸。不过,仅仅将肿瘤细胞灭活后制成的疫苗免疫原性极弱,并不能诱导足够的抗肿瘤免疫效应。为解决这一问题,目前研究者们主要采取对肿瘤细胞进行基因修饰,通过与佐剂或单克隆抗体联合使用等方法来达到提升疫苗抗肿瘤效果的目的。文章就AWTCV的制备、应用与发展前景作综述。

T细胞TCR CDR3受体库的高通量测序分析概况

T细胞是机体免疫功能的执行者,T细胞受体(TCR)是T细胞表面识别抗原的分子,也是T细胞产生免疫应答的第一个关键分子。TCR由胚系基因于胸腺中进行V(D)JC基因重排而形成,发育成熟的T细胞迁移至外周组成多样性的T细胞库,其中最能代表T细胞应答特征的分子为TCR高变区CDR3,在外周形成一个多样性的T细胞CDR3受体库(rep-ertoire),对TCR CDR3受体库研究,将为T细胞生理和病理特征的全面解析提供基础。