多种教学方式在生物化学教学中的实践与收获

生物化学是一门重要的医学基础课程,与多种学科有密切关系,越来越成为生命学科的共同语言,在医学及生物类专业的学生培养中具有十分重要的地位。由于其内在知识结构系统性强、内容抽象、缺乏直观性,教学过程又受到其他基础学科的制约,严重影响了学生的学习兴趣和教学效果。同时,生物化学教学中普遍存在着教学时间有限性和知识增长无限性的矛盾。要解决好这一矛盾,保证知识、能力、素质的协调发展,关键是深化教学内容和教学方式的改革,充分利用有限的授课时间最大限度的提高教学效率和效果;我们在以往的生化课程教学中注重丰富多种教学方式的实践,激发了学生的学习兴趣、调动学生学习的积极主动性,获得了较为明显的教学效果。

结肠癌SW480细胞冻存与复苏方法的改进

目的探索一种程序简洁、易于操作的细胞株冻存与复苏的方法。方法采用常规方法体外培养肠癌细胞株SW480,胰酶消化后,收集细胞悬液,A组细胞采用传统冻存与复苏方法,B组采用改良的冻存与复苏方法,分别于2周、3个月、6个月后立即复苏冻存细胞进行培养,观察细胞的存活情况,并于1周内不同时间点用MTT法检测细胞增殖情况并进行比较。结果采用改良方法冻存与复苏的SW480细胞存活率及生长曲线与传统方法比较无显著差异,细胞贴壁率、形态学特点及增殖能力无明显变化。结论改良的细胞冻存体系以及快速复苏法是细胞株冻存与复苏的一种可行方法,且更加方便快捷。

结肠癌转移相关潜在微小RNA(miRNA)的分离与鉴定（英文）

目的构建在两种结肠癌细胞株SW480和SW620中微小RNA的差异表达文库,分离与结肠癌转移具有潜在相关性的微小RNA。方法以具有不同转移潜能的结肠癌细胞株SW480和SW620为材料,应用改良抑制性消减杂交联合反向斑点杂交技术,分离在两种细胞中差异表达的微小RNA,利用生物软件BLAST及MIREAP将分离到的微小RNA序列进行分析比对。结果鉴定出在SW480和SW620之间表达有明显差异的24种微小RNA,其中4种为新发现的微小RNA,并提交至Gen Bank数据库。这些微小RNA中经文献查询已知部分参与了结肠癌的发生发展过程,部分在基因转录、细胞周期循环、信号传导和细胞凋亡过程具有一定的功能。结论经过改良的抑制消减杂交技术可以高效地分离不同标本间差异表达的微小RNA;本研究得出的结果可为结肠癌细胞转移的分子生物学机制研究提供新的方向。

应用ITS序列对中药材红芪进行鉴定的有效性分析

目的应用ITS序列对中药材红芪进行鉴别,以验证DNA条形码技术从分子水平鉴定中草药的可行性。方法提取中药材红芪的总DNA,扩增其rDNA中ITS序列并测序,采用软件CodonCode Aligner对测序峰图进行校对拼接。以相似性搜索法,K-2P进行比对分析及用MEGE5.1软件计算种间遗传距离,并构建NJ系统聚类树直观获得鉴定结果。结果中药材红芪与同属物种K-2P遗传距离在0.004,中药材红芪与黄芪的K-2P遗传距离为0.153;所构建的NJ系统发育树能将中药材红芪与其他相关物种进行有效区分。结论中药材红芪的ITS序列可作为其分子水平鉴定依据,验证了ITS条形码技术对中药材鉴定的有效性。

琼脂糖电泳中核酸染料Goldview最佳使用方案的建立

目的确定琼脂糖凝胶电泳中使用核酸染料Goldview的最佳浓度和方法,尽可能减少实验中Goldview用量,控制其对实验室环境的污染。方法配置含不同浓度Goldview的上样缓冲液,混合不同浓度DNA溶液的琼脂糖凝胶电泳,然后对比预染样品法、前染法及后染法的染色效果。结果实验结果显示上样缓冲液中含0.4%Goldview的预染样品法电泳检测核酸的效果最佳且能检测的核酸样品浓度在16.5ng或以上为最佳。结论核酸染料Goldview在核酸的琼脂糖凝胶电泳中使用的最佳方案为预染样品法,实验中推荐浓度达到普通实验要求,并且最易控制对周围环境的污染。

菟丝子含药血清对大鼠肢芽细胞、骨形成蛋白2及Ⅱ型胶原表达的影响

目的探讨菟丝子含药血清对SD大鼠胚胎肢芽细胞增殖与分化、细胞中骨形成蛋白2(BMP-2)mRNA表达、Ⅱ型胶原mRNA和蛋白表达的影响。方法采用中药血清药理学方法制备高、中、低剂量(40、20、10 g/kg)菟丝子含药血清和正常血清。取E15后肢芽制成细胞悬液,接种到细胞培养板中,分别加入高、中、低剂量菟丝子含药血清和正常血清,作为高、中、低剂量组和阴性对照组。体外培养72 h,MTT法检测肢芽细胞的增殖,阿利新蓝染色检测肢芽细胞的分化,RT-PCR法检测肢芽细胞中BMP-2、Ⅱ型胶原mRNA的表达,Western blotting检测Ⅱ型胶原蛋白的表达。结果低、中剂量组细胞增殖较快,吸光度值高于阴性对照组(P<0.05);中剂量组软骨细胞集落数多于阴性对照组(P<0.05),高剂量组软骨细胞集落数低于阴性对照组(P<0.05);低、中剂量组BMP-2 mRNA表达水平高于阴性对照组(P<0.05),高剂量组BMP-2 mRNA低于阴性对照组(P<0.05);各剂量组Ⅱ型胶原mRNA和蛋白的表达水平均高于阴性对照组(P<0.05)。结论不同剂量菟丝子含药血清均可促进肢芽细胞的增殖和Ⅱ型胶原mRNA及蛋白的表达;高剂量菟丝子含药血清可下调BMP-2 mRNA的表达水平,抑制肢芽细胞的分化。