研究生免疫学实验教学改革与探索

免疫学实验教学是培养研究生科研思维和动手能力的重要实验平台,面对免疫学新技术的出现以及研究生培养新的要求,通过预先设定的实验项目,查阅资料及文献后撰写实验计划,根据实验计划在教师指导下独立完成实验,书写实验论文等形式的实施,实现了提高研究生综合运用免疫学基本知识和技能的水平,熟悉了免疫学基本技术在科研中的应用,提高了免疫学实验教学质量,为培养高素质、创新型人才开辟了有效的途径。

基质金属蛋白酶在类风湿关节炎免疫致病机制及信号转导中的研究进展

基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMPs）是一组在结构上具有极大同源性、能降解细胞外基质蛋白的内肽酶的总称,因为含有金属离子锌、钙而得名[1].包括膜型的MMP在内,该家族迄今已发现20余个成员,根据其发现顺序可分为MMP-1～MMP-19,按其作用底物和结构不同又可分为5类：胶原酶类（MMP-1、MMP-8、MMP-13）,明胶酶类 （MMP-2、MMP-9）,基质分解素类 （MMP-3、MMP-7、MMP-10, MMP-11）,膜型金属蛋白酶类 （MT-MMP-14、MT-MMP-15、MT-MMP-16、MT-MMP-17）及其他（MMP-12、MMP-18、MMP-19等）.本文就MMPs的结构、生物学功能、表达调控以及在类风湿关节炎（RA）发病机制中的作用作一综述.

空肠弯曲菌pcDNA3.1(-)-peb1A壳聚糖佐剂疫苗对小鼠免疫原性和保护性研究

目的:研究空肠弯曲菌pcDNA3.1(-)-peb1A壳聚糖佐剂疫苗的免疫原性和保护性。方法:健康雄性昆明小鼠分为实验组和对照组。实验组设pcDNA3.1(-)-peb1A组3个剂量和壳聚糖-pcDNA3.1(-)-peb1A组3个剂量;对照组设空载体pcDNA3.1(-)(100μg/100μl)组和生理盐水(NS)组,各组均采用小鼠股四头肌注射法。在第0、10、20天免疫,于每次免疫后第10天采集各组小鼠血清,以间接ELISA法检测血清中特异性IgM、IgG的含量。分离各组小鼠脾淋巴细胞包被细胞培养板,以细胞ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞CD20、CD21表达水平。设空肠弯曲菌液灌胃攻击免疫后小鼠,检测肠道分泌液细菌培养数量。结果:裸DNA组和壳聚糖-DNA组各组特异性IgG水平均高于两对照组(P<0.05)。裸DNA组和壳聚糖-DNA组小鼠脾淋巴细胞CD20、CD21表达水平均高于两对照组(P<0.05),壳聚糖-DNA组高于裸DNA组(P<0.05)。肠道分泌液细菌培养结果细菌指数裸DNA组的低于两对照组;佐剂DNA组低于裸DNA组。结论:重组质粒pcDNA3.1(-)-peb1A经肌肉注射免疫小鼠,具有较好的免疫原性和保护作用,壳聚糖能增强pcDNA3.1(-)-peblA的免疫原性,有望成为空肠弯曲菌基因疫苗的候选佐剂。

重组hIL-10联合MTX对AA大鼠IL-1β、TNF-α含量变化和影像学变化研究

目的:以重组人白细胞介素-10(human interleukin-10,h IL-10)及其联合甲氨碟呤(MTX)作用佐剂性关节炎大鼠模型,检测血清IL-1β、TNF-α含量的变化情况,研究重组h IL-10联合MTX治疗佐剂性关节炎大鼠的效果。方法:AA大鼠造模后,用测量体重、足肿胀度、关节炎指数及组织病理学来评价造模是否成功,各药物处理AA大鼠模型后,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清IL-1β、TNF-α的含量。用放射学检查来评估AA大鼠后足关节损伤的程度。结果:各治疗组IL-1β、TNF-α含量比模型组水平明显下降,各治疗组与模型组比较有显著性差异(P<0.05),联合用药组对AA大鼠血清IL-1β、TNF-α有明显的抑制作用,影像学检查提示IL-1β、TNF-α水平与大鼠足骨关节的损伤程度成正相关,联合用药组治疗后骨侵蚀评分最低。结论:各治疗组对佐剂性关节炎大鼠血清中细胞因子IL-1β、TNF-α有抑制作用,这种抑制作用与骨关节影像学改变显著相关。联合用药组能有效降低AA大鼠的IL-1β、TNF-α水平,改善AA大鼠足关节损伤的治疗作用。

猪脾转移因子的制备和生物学活性研究

目的:采用冻融-透析法制备猪脾转移因子,并对其理化性质以及免疫学生物学活性、生物安全性进行初步检定。方法:采用低温匀浆反复冻融新鲜的猪脾脏、无菌离心匀浆脾脏组织液,取上清液透析制备转移因子;以改良Lowry法分别检测多肽含量,并进行理化指标、无菌试验、热原质试验及其生物学活性检测。结果:冻融-透析法制备猪脾转移因子的理化性状符合《中国生物制品》的要求;无菌试验、热原质试验均为阴性;安全试验合格;淋巴细胞转化试验和E花环形成试验证实其具有刺激淋巴细胞增殖生物学活性。结论:成功制备了猪脾脏转移因子,其各项理化指标符合生物制品规程的要求,同时具有较好的非特异性免疫学的生物学活性。

空肠弯曲菌DNA疫苗构建及其疫苗免疫程序研究

目的:构建空肠弯曲菌peb1A基因真核表达载体,探讨DNA疫苗不同免疫程序的免疫效果。方法:以重组pET28a(+)-peb1A质粒为模板,将空肠弯曲菌peb1A基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转染COS-7细胞中表达,Western blot鉴定表达蛋白;昆明小鼠随机分组:设空白对照组、空载体对照组、pcDNA3.1(-)-peb1A实验组,用ELISA法检测免疫后的昆明小鼠血清IgG和IgM抗体水平。结果:重组质粒pcDNA3.1(-)-peb1A经双酶切和PCR鉴定,构建正确。peb1A基因测序结果与GenBank中peb1A基因序列一致。重组质粒成功转染COS-7细胞,并能正确表达重组蛋白。裸DNA组IgG水平均高于两对照组,有显著性差异(P<0.05)。同一剂量短时间(0、10、20天)免疫程序优于长时间(0、15、25、35天)免疫程序(P<0.05)。结论:成功构建空肠弯曲菌真核表达重组质粒pcDNA3.1(-)-peb1A,其经肌肉注射免疫小鼠,具有较好的免疫原性,短时间免疫程序免疫效果好。

昆虫抗菌肽分类及在医学中应用

昆虫是地球上种类最为繁多的生物,其抗菌肽的种类和应用范围也远多于其他生物产生的抗菌肽。随着越来越多昆虫抗菌肽的发现及对其深入的研究,昆虫抗菌肽的结构和作用机制也被逐一阐明,并广泛应用于畜牧、食品工业及医药等领域。然而,由于某些限制因素,昆虫抗菌肽还未应用于临床。为了加快昆虫抗菌肽在临床中的应用,本文将从昆虫抗菌肽的结构分类、潜在的医学应用以及昆虫抗菌肽的生产研究现状等方面作一综述,以期为昆虫抗菌肽在抗细菌、抗病毒、抗肿瘤及抗寄生虫药物等方面的医用研发提供文献支持。

黑水虻抗菌肽诱导条件优化及粗提物活性研究

采用不同诱导方法、不同诱导剂量及不同诱导时间诱导黑水虻Hermetia illucens L.幼虫产生抗菌肽,通过研磨提取法提取幼虫抗菌肽粗提物,并对所提取粗提物进行抑菌活性的比较研究,以优化黑水虻幼虫抗菌肽的诱导条件,为黑水虻抗菌肽的分离纯化提供最佳的实验方法。结果表明,不同龄期黑水虻幼虫产生抗菌肽的抑菌活性不同,最佳诱导龄期为5龄;不同诱导方法产生抗菌肽对大肠杆菌抑菌活性不同,大肠杆菌菌液针刺浸泡60s,诱导后饲养24h提取抗菌肽抑菌活性最好,其次为超声波100W诱导20min产生抗菌肽抑菌活性,但二者活性相比差异不显著;大肠杆菌菌液、金黄色葡萄球菌菌液注射诱导、金黄色葡萄球菌菌液针刺浸泡诱导及40w超声波诱导所产生抗菌肽虽有一定的抑菌效果但与前两种方法相比差异显著。

P13K/Akt信号通路及其在鼻咽癌发生发展中的研究进展

鼻咽癌是头颈部发病率较高且最为常见的恶性肿瘤,具有很大的地域分布特点[1],东南亚国家发病率较高,在我国以华南地区居多[2]。研究[3]表明,男性发病率明显高于女性。鼻咽癌的原发灶较为隐蔽,早期发病不明显,导致大多数确诊的鼻咽癌患者均已到中晚期。

重组人IL-24联合顺铂体外抗肺癌细胞生长的实验研究

目的探讨重组人白细胞介素-24(rhIL-24)联合顺铂(DDP)对人肺腺癌A549细胞的体外抑制效应及对A549细胞凋亡、细胞周期的影响。方法 rhIL-24、DDP及rhIL-24+DDP干预A549细胞,用CCK-8法检测A549细胞增殖抑制率;用流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期的变化。结果 rhIL-24联合DDP作用24 h对人肺腺癌A549细胞增殖抑制率为32.8%,与单独DDP组比较有显著性差异(P<0.05);流式细胞仪检测rhIL-24联合DDP作用24 h对人肺腺癌A549细胞凋亡率为24.9%;细胞周期检测中rhIL-24作用A549细胞24 h后S期细胞增多。结论 rhIL-24能抑制A549细胞增殖,联合DDP组效果优于单独用药组,具有化疗增敏效应;rhIL-24能诱导A549细胞凋亡并能影响细胞周期。

GeXP检测rhIL-24联合DDP对人肺腺癌A549/DDP细胞凋亡相关基因的实验研究

目的:利用多基因遗传表达分析系统(GeX P)探讨重组人白细胞介素-24(rhI L-24)联合顺铂(DDP)诱导人肺腺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞6个凋亡相关基因的变化。方法:用rhI L-24、DDP及rhI L-24+DDP干预A549/DDP细胞,应用多基因遗传表达分析系统(GeX P)同时检测Bax、Bcl-2、Survivin、Caspase3、Rb与P53等6个凋亡相关基因。结果:rhI L-24蛋白可引起A549/DDP细胞Bax基因、Caspase3基因、Rb基因转录上调;Bcl-2基因、Survivin基因转录下调,但抑癌基因P53变化无规律,rhI L-24联合DDP后Bax、Survivin、Rb表达较单独rhI L-24组变化更加显著。结论:rhI L-24蛋白可通过上调Bax,下调Bcl-2、Survivin,激活Caspase3,上调抑癌基因Rb诱导人肺腺癌A549/DDP细胞凋亡。

重组hIL-10对AA大鼠T淋巴细胞及IL-17A的影响研究

目的:以重组人白细胞介素-10(human interleukin-10,h IL-10)及其联合甲氨碟呤(MTX)作用佐剂性关节炎大鼠模型,检测T淋巴细胞亚群及IL-17A水平的变化情况,研究重组hIL-10及其联合MTX治疗佐剂性关节炎大鼠的效果。方法:用IL-10、MTX以及IL-10+MTX处理AA大鼠模型,用流式细胞仪测定各组大鼠血液中CD4^+T细胞与CD8^+T细胞比值,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清IL-17A的含量。结果:各治疗组CD4^+淋巴细胞总数与CD4^+/CD8^+值不同程度下降,各治疗组与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。各治疗组IL-17A水平有不同程度下降,各治疗组与模型组比较有显著性差异(P<0.05),联合组与IL-10组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:重组hIL-10能下调AA大鼠血液中CD4^+T细胞的数量及CD4^+/CD8^+比值,降低血清中IL-17A水平,联合组较IL-10组对血清中IL-17A影响更显著,提示重组hIL-10联合MTX在治疗类风湿关节炎中能更好地发挥作用。

细胞因子在类风湿关节炎发病机制中作用的研究进展

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种病因尚未明确的以滑膜慢性炎症为主的自身免疫性疾病,近年研究发现,细胞因子网络失衡在RA的发病和进展中发挥着重要作用,该病的加重或好转依赖于炎性细胞因子和调节性细胞因子之间的动态变化。其中TNF-α、IL-1、IL-17、IL-33等在RA滑膜病变中起核心作用,而IL-4、IL-10、TGF-β等细胞因子却可以起到减轻关节损伤的作用。本文将从致炎细胞因子、抑炎细胞因子与RA之间的关系来阐述RA的发病机制。

IL-10受体及其信号转导研究进展

白细胞介素10 (interleukin-10,IL-10)是由多种细胞分泌的一种多效价细胞因子,既有免疫抑制作用也有免疫刺激作用。IL-10的特异性受体为受体复合物,包括与配体结合的IL-10R1亚单位和起辅助作用的IL-10R2亚单位。IL-10与细胞表面IL-10R1和IL-10R2相互作用并主要通过激活JAK-STAT通路发挥生物学作用。IL-10生物学活性都是通过IL-10与靶细胞膜上受体特异性结合而实现的。

黑水虻研究进展

黑水虻学名亮斑扁角水虻(Hermitia illucens L.),其幼虫主要用于禽畜粪便及餐厨垃圾的处理,为目前最具应用前景的资源昆虫。本文主要从黑水虻的生物学特性、黑水虻生长发育影响研究、黑水虻的抗逆性研究及黑水虻的应用研究四个方面对其进行综述,为黑水虻无害化处理餐厨垃圾及粪便技术推广提供文献依据。

中药抗佐剂性关节炎的实验研究进展

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种自身免疫性疾病，表现为以关节腔滑膜的慢性炎症为特点，并伴有多系统的慢性全身性疾病^[1]。该病在世界范围内普遍存在，全世界患病率约为0．5％～1．0％，我国患病率约为0．4％，目前RA的发病率仍呈逐年上升趋势。从中医学角度来看，

空肠弯曲菌pcDNA3.1(-)-peb1A壳聚糖佐剂疫苗的Th免疫应答及作用

目的:探讨以壳聚糖为佐剂的空肠弯曲菌基因疫苗免疫小鼠后的Th细胞免疫应答状态。方法:昆明小鼠随机分组:设空白对照组、空载体组、pcDNA3.1(-)-peb1A组、壳聚糖+pcDNA3.1(-)-peb1A组,各组均采用小鼠股四头肌注射法。在第0、10、20天免疫,于每次免疫后第10天采集各组小鼠血浆,间接ELISA法检测免疫后不同时间小鼠血浆中Th1、Th2细胞因子的含量。结果:Th1类细胞因子IL-2、IFN-γ,在第10、20、30天,裸DNA组、佐剂DNA组、空载体组及NS组两两相比均无显著性差异(P>0.05);Th2类细胞因子IL-4、IL-10:实验组高于两对照组,在IL-4的检测中有显著性差异(P<0.05),在IL-10的检测中裸DNA组高于空白对照组有显著性差异(P<0.05),其裸DNA组高于空载体组,仅在第20天有显著性差异(P<0.05);佐剂DNA组高于裸DNA组,在IL-4的检测中有显著性差异(P<0.05),在IL-10的检测中,仅在第10、20天有显著性差异(P<0.05);佐剂DNA组高于两对照组,有显著性差异(P<0.05)。结论:以壳聚糖为佐剂的空肠弯曲菌基因疫苗可促进Th2细胞为主的免疫反应。

铜污染对昆虫生长发育及繁殖影响的研究进展

铜(Cu)是生物体生长发育所必需的微量营养元素,参与或构成许多含铜酶及含铜生物活性蛋白质,但是过度摄入Cu会对生物体产生危害。Cu中毒由许多因素而定,如物种、遗传、年龄和食物等。在生态系统中昆虫种类多,数量大,分布广,往往会取食、转移和代谢环境中的Cu,从而对自身生长发育及繁殖造成影响。通常表现为发育历期延长,体重下降,体长变短,化蛹率、羽化率、产卵率、孵化率、存活率降低,种群数量减少等。本文以近几年Cu2+胁迫对昆虫生长发育及繁殖影响的研究进行综述。

基于细胞凋亡信号通路的抗菌肽抗肿瘤机制的研究进展

抗菌肽(AMPs)因其具有广谱的抑菌及抗肿瘤生物活性,且不产生耐药性,而备受关注,但多集中在抑菌及其机制研究,其抗肿瘤及其机制研究相对较少。细胞凋亡是多细胞调控生物体发育、细胞更新和维持内环境稳态的一种重要机制,与肿瘤细胞的发生、发展密切相关。本文就近几年AMPs在抗肿瘤方面的细胞凋亡信号通路的研究进展进行综述,为AMPs在抗肿瘤方面的研究提供文献参考。

基因工程HBsAg纯化技术的研究进展

乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)是乙肝疫苗(hepatitis B vaccine)的重要组成部分,注射乙肝疫苗是目前预防乙型肝炎感染最有效的方法。血源性乙肝疫苗因成本、来源和潜在其他病毒的感染已被淘汰,取而代之的是基因工程技术生产的第2代重组乙肝疫苗。主要介绍了国内外重组HBsAg在样品净化捕获、中度纯化和精纯3个阶段的主流纯化技术。