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人白介素-12植物表达载体的构建
被引量:
14
1
作者
邵敏
周鹤峰
葛正龙
《第四军医大学学报》
CAS
北大核心
2007年第10期868-870,共3页
目的构建人白介素-12(hIL-12)基因的植物表达载体.方法采用PCR技术从质粒pCA13-hIL-12中扩增hIL-12基因,SmaI,SacI分别酶切hIL-12基因和植物表达载体pBI121,回收,T4DNA连接酶连接得到重组质粒pBI121-hIL-12,双酶切和DNA测序鉴定后,通过...
目的构建人白介素-12(hIL-12)基因的植物表达载体.方法采用PCR技术从质粒pCA13-hIL-12中扩增hIL-12基因,SmaI,SacI分别酶切hIL-12基因和植物表达载体pBI121,回收,T4DNA连接酶连接得到重组质粒pBI121-hIL-12,双酶切和DNA测序鉴定后,通过三亲杂交法将表达载体pBI121-hIL-12分别导入根癌农杆菌EHA105和GV3101,用PCR法进行鉴定.结果双酶切及DNA序列测定证实hIL-12已插入到表达载体pBI121中,PCR扩增表明构建的重组表达载体pBI121-hIL-12成功转入根癌农杆菌EHA105和GV3101中.结论成功构建了植物表达载体pBI121-hIL-12,为进一步利用转基因植物生产hIL-12奠定了实验基础.
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关键词
人白细胞介素-12
植物表达载体
载体构建
根瘤菌属
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职称材料
hISO基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达及鉴定
被引量:
2
2
作者
邵敏
王新颖
+3 位作者
刘星
王燕
周鹤峰
葛正龙
《吉林大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第1期59-63,共5页
目的:构建原核表达载体pET-28a(+)-hISO,探讨其融合蛋白在大肠杆菌中的稳定表达情况,为后续实验研究奠定基础。方法:以Caco-2细胞的总RNA为模版,采用RT-PCR方法扩增出大小为1 770bp的人异麦芽糖酶(hISO)基因片段,将其插入到pET-28a(+)中...
目的:构建原核表达载体pET-28a(+)-hISO,探讨其融合蛋白在大肠杆菌中的稳定表达情况,为后续实验研究奠定基础。方法:以Caco-2细胞的总RNA为模版,采用RT-PCR方法扩增出大小为1 770bp的人异麦芽糖酶(hISO)基因片段,将其插入到pET-28a(+)中,构建重组载体pET-28a(+)-hISO。经PCR、酶切及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,亲和层析纯化重组蛋白,利用SDS-PAGE电泳、Western blotting对重组蛋白进行分析和鉴定。结果:经PCR、酶切及测序鉴定后,重组质粒pET-28a(+)-hISO构建正确,表达重组蛋白相对分子质量为68 860,将融合蛋白进行纯化,经40和60mmol·L-1咪唑缓冲液洗脱后能够得到浓度和纯度相对较高的蛋白。结论:成功地构建了hISO基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得了融合蛋白表达。
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关键词
异麦芽糖酶
原核表达
Α-葡萄糖苷酶
大肠杆菌
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职称材料
人白介素12亚基p40和p35基因串联在毕赤酵母中的表达及表达产物活性分析
3
作者
周鹤峰
邵敏
+3 位作者
孙伟
刘银花
李官成
葛正龙
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第3期20-24,共5页
利用毕赤酵母系统表达有活性的人单链白细胞介素12(hscIL-12),PCR法从质粒pBI121-IL-12中扩增hscIL-12基因,经酶切、连接构建重组表达载体pPIC9K-hscIL-12,SacI线性化后,PEG1000法转化毕赤酵母GS115,经G418筛选和菌落PCR鉴定,经甲醇诱导...
利用毕赤酵母系统表达有活性的人单链白细胞介素12(hscIL-12),PCR法从质粒pBI121-IL-12中扩增hscIL-12基因,经酶切、连接构建重组表达载体pPIC9K-hscIL-12,SacI线性化后,PEG1000法转化毕赤酵母GS115,经G418筛选和菌落PCR鉴定,经甲醇诱导,hscIL-12在酵母中获得分泌表达,表达产物经Western blot检测,显示该蛋白相对分子质量为70kDa,可与鼠抗人IL-12单克隆抗体特异性结合;定量分析结果表明,重组酵母培养上清中hscIL-12约占总蛋白的26%,表达量约为60mg/L;生物学活性实验表明,重组蛋白能促进人外周血淋巴细胞增殖。为利用rhscIL-12进行基因治疗奠定了基础。
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关键词
人白细胞介素12
毕赤酵母
分泌表达
活性分析
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职称材料
双shRNA表达载体对HSV-2复制的干扰作用
被引量:
1
4
作者
向红英
兰小松
吕延成
《遵义医学院学报》
2018年第6期690-694,共5页
目的利用带有多个启动子的质粒p Genesil10-3p,构建针对HSV-2靶基因UL27和UL54的双短发卡RNA(Duo-shRNA)表达载体,探讨双shRNA表达载体对双靶基因的干扰作用以及对HSV-2病毒增殖的影响。方法 DuoshRNA通过脂质体转染HEK293细胞后接种HSV...
目的利用带有多个启动子的质粒p Genesil10-3p,构建针对HSV-2靶基因UL27和UL54的双短发卡RNA(Duo-shRNA)表达载体,探讨双shRNA表达载体对双靶基因的干扰作用以及对HSV-2病毒增殖的影响。方法 DuoshRNA通过脂质体转染HEK293细胞后接种HSV-2,采用四唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率,终点滴定法检测细胞上清液中病毒滴度,QPCR(Quantitative Real-time PCR,QPCR)检测对靶基因mRNA的抑制率,蛋白质印迹(Western blot,WB)检测靶蛋白的表达量。结果结果表明Duo-shRNA对于细胞存活率、抑制HSV-2复制以及干扰靶基因表达方面都优于单-shRNA,可以达到多个单基因-shRNA联合作用的干扰效果。结论利用双启动子的方法构建了针对HSV-2的UL27和UL54的shRNA质粒表达载体,更好的抑制HSV-2病毒靶基因mRNA表达水平以及病毒在HEK293细胞中增殖,实现了多个单基因的shRNA干扰效应的相互作用。
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关键词
Ⅱ型单纯疱疹病毒
RNA干扰
UL27基因
UL54基因
短发卡RNA
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职称材料
题名
人白介素-12植物表达载体的构建
被引量:
14
1
作者
邵敏
周鹤峰
葛正龙
机构
遵义医学院珠海校区生物化学教研室
遵义
医学院
珠海
校
区
生物
工程
教研室
遵义
医学院
生物
化学
与分子
生物
学
教研室
出处
《第四军医大学学报》
CAS
北大核心
2007年第10期868-870,共3页
基金
贵州省科委重大攻关项目(2004NGZ002)
文摘
目的构建人白介素-12(hIL-12)基因的植物表达载体.方法采用PCR技术从质粒pCA13-hIL-12中扩增hIL-12基因,SmaI,SacI分别酶切hIL-12基因和植物表达载体pBI121,回收,T4DNA连接酶连接得到重组质粒pBI121-hIL-12,双酶切和DNA测序鉴定后,通过三亲杂交法将表达载体pBI121-hIL-12分别导入根癌农杆菌EHA105和GV3101,用PCR法进行鉴定.结果双酶切及DNA序列测定证实hIL-12已插入到表达载体pBI121中,PCR扩增表明构建的重组表达载体pBI121-hIL-12成功转入根癌农杆菌EHA105和GV3101中.结论成功构建了植物表达载体pBI121-hIL-12,为进一步利用转基因植物生产hIL-12奠定了实验基础.
关键词
人白细胞介素-12
植物表达载体
载体构建
根瘤菌属
Keywords
human interleukin 12
plant expression vector
vector construction
rhizobium
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
hISO基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达及鉴定
被引量:
2
2
作者
邵敏
王新颖
刘星
王燕
周鹤峰
葛正龙
机构
遵义医学院珠海校区生物化学教研室
遵义
医学院
生物
化学
教研室
出处
《吉林大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第1期59-63,共5页
基金
贵州省科技厅社会发展攻关项目资助课题[黔科合SY字(2012)3091)]
遵义医学院青年科研启动基金资助课题(F-501)
文摘
目的:构建原核表达载体pET-28a(+)-hISO,探讨其融合蛋白在大肠杆菌中的稳定表达情况,为后续实验研究奠定基础。方法:以Caco-2细胞的总RNA为模版,采用RT-PCR方法扩增出大小为1 770bp的人异麦芽糖酶(hISO)基因片段,将其插入到pET-28a(+)中,构建重组载体pET-28a(+)-hISO。经PCR、酶切及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,亲和层析纯化重组蛋白,利用SDS-PAGE电泳、Western blotting对重组蛋白进行分析和鉴定。结果:经PCR、酶切及测序鉴定后,重组质粒pET-28a(+)-hISO构建正确,表达重组蛋白相对分子质量为68 860,将融合蛋白进行纯化,经40和60mmol·L-1咪唑缓冲液洗脱后能够得到浓度和纯度相对较高的蛋白。结论:成功地构建了hISO基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得了融合蛋白表达。
关键词
异麦芽糖酶
原核表达
Α-葡萄糖苷酶
大肠杆菌
Keywords
isomaltasel prokaryotic expressionl a-glucosidase
Escherichia. coli
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
人白介素12亚基p40和p35基因串联在毕赤酵母中的表达及表达产物活性分析
3
作者
周鹤峰
邵敏
孙伟
刘银花
李官成
葛正龙
机构
遵义
医学院
珠海
校
区
生物
工程
教研室
遵义医学院珠海校区生物化学教研室
遵义
医学院
生物
化学
教研室
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第3期20-24,共5页
文摘
利用毕赤酵母系统表达有活性的人单链白细胞介素12(hscIL-12),PCR法从质粒pBI121-IL-12中扩增hscIL-12基因,经酶切、连接构建重组表达载体pPIC9K-hscIL-12,SacI线性化后,PEG1000法转化毕赤酵母GS115,经G418筛选和菌落PCR鉴定,经甲醇诱导,hscIL-12在酵母中获得分泌表达,表达产物经Western blot检测,显示该蛋白相对分子质量为70kDa,可与鼠抗人IL-12单克隆抗体特异性结合;定量分析结果表明,重组酵母培养上清中hscIL-12约占总蛋白的26%,表达量约为60mg/L;生物学活性实验表明,重组蛋白能促进人外周血淋巴细胞增殖。为利用rhscIL-12进行基因治疗奠定了基础。
关键词
人白细胞介素12
毕赤酵母
分泌表达
活性分析
Keywords
Human interleukin-12(hscIL-12) Pichia pastoris Secretion expression Bioactivity
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
双shRNA表达载体对HSV-2复制的干扰作用
被引量:
1
4
作者
向红英
兰小松
吕延成
机构
遵义医学院珠海校区生物化学教研室
出处
《遵义医学院学报》
2018年第6期690-694,共5页
基金
贵州省科学技术基金资助项目(NO:黔科合LH字[2014]7581)
文摘
目的利用带有多个启动子的质粒p Genesil10-3p,构建针对HSV-2靶基因UL27和UL54的双短发卡RNA(Duo-shRNA)表达载体,探讨双shRNA表达载体对双靶基因的干扰作用以及对HSV-2病毒增殖的影响。方法 DuoshRNA通过脂质体转染HEK293细胞后接种HSV-2,采用四唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率,终点滴定法检测细胞上清液中病毒滴度,QPCR(Quantitative Real-time PCR,QPCR)检测对靶基因mRNA的抑制率,蛋白质印迹(Western blot,WB)检测靶蛋白的表达量。结果结果表明Duo-shRNA对于细胞存活率、抑制HSV-2复制以及干扰靶基因表达方面都优于单-shRNA,可以达到多个单基因-shRNA联合作用的干扰效果。结论利用双启动子的方法构建了针对HSV-2的UL27和UL54的shRNA质粒表达载体,更好的抑制HSV-2病毒靶基因mRNA表达水平以及病毒在HEK293细胞中增殖,实现了多个单基因的shRNA干扰效应的相互作用。
关键词
Ⅱ型单纯疱疹病毒
RNA干扰
UL27基因
UL54基因
短发卡RNA
Keywords
herpes simplex virus type 2
RNAi
UL27
UL54
shRNA
分类号
R343 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人白介素-12植物表达载体的构建
邵敏
周鹤峰
葛正龙
《第四军医大学学报》
CAS
北大核心
2007
14
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职称材料
2
hISO基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达及鉴定
邵敏
王新颖
刘星
王燕
周鹤峰
葛正龙
《吉林大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2016
2
下载PDF
职称材料
3
人白介素12亚基p40和p35基因串联在毕赤酵母中的表达及表达产物活性分析
周鹤峰
邵敏
孙伟
刘银花
李官成
葛正龙
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008
0
下载PDF
职称材料
4
双shRNA表达载体对HSV-2复制的干扰作用
向红英
兰小松
吕延成
《遵义医学院学报》
2018
1
下载PDF
职称材料
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