永久性大脑中动脉闭塞大鼠梗死周围组织p-Akt(Ser473)、p-Bad(Ser136)表达与细胞凋亡

目的探讨永久性大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）大鼠脑梗死周围组织P—Akt（Ser473）、p-Bad（Serl36）表达的变化及其与细胞凋亡关系。方法60只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术、MCAO3h、MCAO12h、LY294002干预MCAO3h和LY294002干预MCAO12h组，每组12只。改良线栓法制作永久性MCAO模型，LY294002干预组在模型制作前15n血经侧脑室给药。采用Longa法进行神经功能评分，氯化三苯基四氮唑（2,3，5-triphenyl tetrazolium chloride，TTC）法检测梗死体积，免疫组织化学染色法检测梗死周围组织p-Akt（Ser473）和p-Bad（Serl36）表达，TUNEL法检测梗死周围组织凋亡细胞。结果模型制作后3h，所有实验大鼠均从麻醉中清醒。假手术组神经功能缺损评分为0分，MCAO3h组、MCAO12h组、LY294002干预MCAO3h组和LY294002干预MCAO12h组分别为（2．25±0．45）、（2．92±0．99）、（3．00±0．95）和（3．02±0．36）分，各组间存在显著性差异（F=26．520，P=0．000）。其中，LY294002干预MCAO3h组显著性高于MCAO3h组（P=0．009），LY294002干预MCAO12h组与MCAO12h组无显著性差异（P=0．354）。TTC染色显示，假手术组未见梗死灶，MCAO3h组、MCAO12h组、LY294002干预MCAO3h组和LY294002干预MCAO12h组梗死体积分别为（23．4±1．4）、（40．3±1．1）、（31．9±6．0）和（44．4±3．8）mm2，各组间存在显著性差异（F=30．440，P=0．000）。其中，LY294002干预MCAO3h组显著性大于MCAO3h组（P=0．002），LY294002干预MCAO12h组与MCAO12h组无显著性差异（P=0．113）。与假手术组相比，MCAO3h组梗死周围组织p-Akt（Ser473）表达显著性增高，MCAO12h组显著性下降；p-Bad（Ser136）表达水平随着MCAO时间的推移呈现进行性下降，同时凋亡细胞数量进行性增多。LY294002干预后，MCAO3h时梗死周围组织p-Akt（Ser473）和p-Bad（Ser136）表达水平均显著性下降，凋亡细胞数量显著性增多（P〈0．05），但对MCAO后12h时的各指标无显著性影响。结论脑梗死早期P13K／Akt信号转导通路的激活以及该通路关键蛋白p-Akt（Ser473）的应激性升高具有脑保护作用，而脑梗死后期该通路活性的衰竭及其关键蛋白的急剧降低则与脑损伤有关。