siRNA沉默PPARγ基因对大鼠心肌细胞缺血再灌注致胰岛素抵抗现象的影响

目的观察小干扰RNA(siRNA)沉默过氧化物酶体增殖物激活受体基因(PPARγ)的表达对成年大鼠缺血再灌注损伤(IRI)心肌细胞胰岛素抵抗的影响。方法培养成年大鼠心肌细胞,构建沉默大鼠心肌细胞PPARγ基因特异siRNA,以脂质体介导转染离体培养的大鼠心肌细胞。制备心肌细胞IRI模型。采用RT-PCR检测PPARγ和葡萄糖转运蛋白4(GLUT-4)mRNA表达,Western blot检测PPARγ蛋白表达;同位素示踪法检测细胞葡萄糖(Glu)摄取率变化。结果 IRI模型组心肌细胞PPARγmRNA及蛋白表达较空白组不同程度增加(P均<0.05);siRNA-PPARγ组,PPARγmRNA及蛋白表达量较空载体组和IRI模型组明显下降(P<0.01),空载体组PPARγmRNA及蛋白表达接近IRI模型组水平;GLUT-4mRNA表达量空白组各时间点无明显差别,IRI模型组0min表达量明显降低,之后随着再灌注时间增加逐渐恢复至空白组水平,空载体组GLUT-4mRNA表达与IRI模型组无明显差别;沉默PPARγ后,细胞GLUT-4mRNA表达较IRI模型组和空载体组减低更明显(P<0.05),恢复较IRI模型组更慢。在胰岛素刺激下,与IRI模型组比较,siRNA-PPARγ组各时间点Glu摄取率均降低(P<0.05),0min下降49.78%,15min、1h、2h分别降低38.94%、18.61%、11.54%,6h开始恢复至IRI模型组水平。空载体组与模型组比较Glu摄取率无明显差异。结论沉默PPARγ的表达,可加重IRI心肌细胞胰岛素抵抗,其可能的机制是PPARγ基因沉默导致的GLUT-4mRNA表达下降或转位障碍。