布雷菲德菌素A通过线粒体凋亡途径增强顺铂抗肺癌细胞的作用

本研究证明了线粒体凋亡途径在布雷菲德菌素A (brefeldin A,BFA)联合顺铂(cisdichlorodiamine platinum,CDDP)抗非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的作用。MTT结果显示,BFA对肺癌GLC-82和NCI-H1299细胞的半数有效抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))分别是100 ng/mL和400 ng/mL,CDDP对GLC-82和NCI-H1299细胞的IC_(50)分别是4μg/mL和15μg/mL;而分别采用半量的BFA和CDDP联合处理GLC-82或NCIH1299细胞后,抑制作用均进一步加强。DAPI染色结果进一步证明了二者的协同作用——与单独用药组相比,细胞核染色质固缩加剧,核裂解碎片增多,乃至形成凋亡小体,表明细胞凋亡的发生。与单药组比较,联合用药导致肺癌GLC-82细胞线粒体膜电位显著下降; q-RT-PCR及Western印迹结果显示,在联合用药早期(24 h),GLC-82细胞可能通过提高Bcl2表达以促进存活;而在联合用药晚期(48 h),细胞已发生不可逆转的凋亡,Bcl2表达受抑制,同时二者通过促进Bax表达来诱导细胞色素C释放,使胱天蛋白酶3发生剪切激活,最终诱导细胞凋亡发生。提示线粒体凋亡途径可能是BFA协同CDDP抗非小细胞肺癌的分子机制之一,为肺癌的临床治疗方案提供了更多的理论依据。

Brefeldin A调控ATF6通路增强顺铂抑制肺癌细胞增殖的作用

目的检测肺癌GLC-82细胞内质网应激ATF6通路的激活水平,以探究布雷菲德菌素A(BFA)增强顺铂(CDDP)抑制肺癌细胞增殖的分子机制。方法取对数期细胞,分别设置50 ng/mL BFA组、2μg/mL CDDP组及50 ng/mL BFA+2μg/mL CDDP组作为实验组,同时设置加入等体积二甲基亚砜(DMSO)的对照组。继续培养24 h后,利用CCK8法检测细胞增殖抑制率;培养24 h和48 h后,利用实时荧光定量PCR和免疫印迹检测细胞GRP94、ATF6和ATF6B的mRNA水平和蛋白质水平。结果药物处理24 h后,BFA组、CDDP组和联合用药组细胞增殖抑制率分别为(28.6±6.8)%、(24.0±9.6)%和(57.1±3.1)%,均显著高于对照组(P<0.01),且联合用药组细胞生长抑制率亦显著高于BFA组和CDDP组(P<0.01、P<0.01)。与对照组相比,药物处理24 h后,联合用药组GRP94、ATF6 mRNA水平分别上调(19.9±2.8、22.9±4.7)倍,GRP94、ATF6和ATF6B蛋白质水平分别上调(1.3±0.4、6.1±1.8、5.7±1.8)倍(P<0.01或P<0.05);药物处理48 h后,联合用药组GRP94、ATF6 mRNA水平分别上调(10.5±0.7、12.1±1.8)倍(P<0.01),GRP94蛋白质水平下调(4.5±1.7)倍、ATF6和ATF6B蛋白质水平分别上调(1.4±0.3、2.6±0.9)倍(P<0.01或P<0.05)。结论 BFA协同增强CDDP抑制肺癌GLC-82细胞增殖的作用,与内质网应激ATF6通路和GRP94分子的激活密切相关,为肺癌的临床治疗方案提供更多的理论基础。

不同时程吗啡依赖对雄性大鼠睾丸GRP94和XBP-1表达的影响

目的观察内质网应激标志性分子GRP94和XBP-1在不同时程吗啡依赖大鼠睾丸组织中的动态表达,以探究吗啡依赖对生殖系统的影响。方法建立吗啡戒断、消退及点燃大鼠模型后,利用定量PCR(RTPCR)技术和蛋白免疫印迹(Western blot)技术分别检测睾丸组织中GRP94和XBP-1 mRNA或蛋白的表达水平。结果 RT-PCR和Western blot结果显示,与NS对照组比较,吗啡依赖大鼠戒断48 h后,其睾丸组织GRP94和XBP-1表达水平均显著升高(P<0.01);经17 d的戒断,大鼠对吗啡依赖消退后,GRP94和XBP-1表达水平均有所升高(P>0.05);大鼠对吗啡依赖消退后,于31 d给予吗啡进行复燃,GRP94和XBP-1表达水平均显著升高(P<0.01或P<0.05)。吗啡依赖大鼠睾丸组织GRP94和XBP-1表达水平在戒断48 h后最高,消退时有所降低(P<0.01),而点燃后水平又有所上调(P<0.05)。结论吗啡依赖与睾丸内质网应激标志性分子GRP94及其XBP-1通路的激活密切相关,为吗啡依赖患者生殖系统损伤的修复提供更多的理论依据。