耐异烟肼结核分枝杆菌及其katG与inhA基因突变的研究

目的探讨耐异烟肼临床分离结核分枝杆菌与其katG及inhA基因突变的相关性。方法对87例临床肺结核患者痰标本进行培养、鉴定及药物敏感性试验,提取菌落DNA、PCR扩增katG和inhA基因片段,并对所有扩增片段进行序列分析。结果 87例菌株经鉴定均为结核分枝杆菌,30(34.5%)例为耐异烟肼菌株,57(65.5%)例异烟肼敏感菌株。30例耐异烟肼株中,18(60%)株出现katG和(或)inhA基因突变。在突变株中,9(50%)株为katG单基因突变,5(27.8%)株为inhA单基因突变,4(22.2%)株为katG和inhA双基因联合突变。两个新突变位点(Val230Met和Pro232Gln)为首次发现,已被美国,欧洲和日本的基因库收录。结论该研究证实结核分枝杆菌katG和inhA基因突变与耐异烟肼相关,为进一步研究异烟肼的抗菌机制奠定了基础。

结核分枝杆菌广泛耐药株与耐多药株菌体蛋白质组学比较研究

目的比较和分析结核分枝杆菌广泛耐药(XDR)与耐多药(MDR)菌株在菌体蛋白质表达水平上的差异,并寻找与XDR相关的蛋白质点。方法利用双向凝胶电泳分离XDR、MDR菌株以及H37Rv标准菌株菌体蛋白质,通过计算机图像分析软件分析各菌株之间在菌体蛋白质表达水平上的差异性,并进行质谱分析。结果 XDR与MDR以及H37Rv菌株之间在菌体蛋白质表达水平上存在明显差异;与XDR相关的28个差异(新增、缺失、上调、下调)表达的蛋白质点中,质谱分析鉴定出5个相关的蛋白质点。结论结核分枝杆菌XDR与MDR菌株在菌体蛋白质表达水平上存在明显差异,为进一步研究XDR菌株耐药机理奠定了基础。

核酸薄膜技术快速检测结核分枝杆菌katG突变的研究

目的研制一种新的核苷酸薄膜,通过导流杂交技术检测结核分枝杆菌katG基因突变类型,以快速判断结核分枝杆菌对异烟肼的耐受性,寻找一种快速简便检测耐异烟肼结核病的方法。方法根据结核分枝杆菌katG基因序列设计1个野生型及2个常见突变型寡核苷酸特异探针,探针5’末端连接亚甲基(-CH2)。同时设计1个人类基因组探针以及1个生物素探针。制作低密度核苷酸薄膜微阵距列,通过导流杂交技术进行杂交,将杂交结果与DNA测序法对照。结果核酸测序显示,突变位点分别出现在包括315位点在内的7个位点,315位点突变占75.0%(18/24),最常见突变形式为AGC315ACC所致Ser315Thr氨基酸改变。杂交结果与测序结果符合率为93.9%(31/33),与DNA测序相比,其阳性预测值、阴性预测值、敏感度、特异度分别为90.0%、100%、100%、86.7%。结论核酸薄膜导流杂交技术能快速、简便、高效地检测临床标本中有无结核分枝杆菌,并可提示结核分枝杆菌有无异烟肼耐药性,指导临床用药。

肺结核患者结核分枝杆菌的耐药性分析

目的检测和分析结核分枝杆菌(MTB)的耐药性,为临床诊断与治疗提供实验依据。方法分离我院门诊及住院肺结核患者痰标本中MTB并进行异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇4种抗结核一线药物的敏感试验。结果 90例肺结核患者(初治60例,复治30例)以青壮年为主(76.7%);在所有病例中,分离的MTB对4种抗结核药物均敏感的41例,存在不同类别耐药的49例,总耐药率54.4%。其中,单耐药在初治病例中多见,耐多药以复治病人为主,多耐药在初治与复治病人中比例相当。结论应加强结核病患者痰MTB的检测,根据药敏结果分层次制定不同方案,以提高治愈率,减少耐药结核病尤其是耐多药结核病例的产生。

构建甲型流感病毒核蛋白融合基因三种方法的比较研究

目的比较构建甲型流感病毒核蛋白NP融合基因的三种方法，以获取成功构建含绿色荧光蛋白融合基因的方法。方法PCR扩增甲型流感病毒核蛋白NP基因片段，运用三种不同的方法构建NP表达绿色荧光蛋白的融合基因：①含限制性内切酶酶切位点的NP基因片段与pEGFP-N1克隆构建融合基因；②NP基因片段与pMD19-TVector连接、TA克隆后获得限制性内切酶酶切位点，经pEGFP—N1克隆构建融合基因；③含限制性内切酶酶切位点的NP基因片段与pMD19-TSimpleVector连接、TA克隆后经pEGFP—N1克隆构建融合基因。结果含限制性内切酶酶切位点的NP基因片段TA克隆后经pEGFP—N1克隆，获得高效且稳定的绿色荧光核蛋白融合基因，第一、第二两种方法构建绿色荧光核蛋白融合基因成功率低。结论含限制性内切酶酶切位点的NP基因片段经TA克隆与pEGFP-N1连接克隆，成功构建了绿色荧光蛋白的甲型流感病毒核蛋白NP融合基因pEGFP-N1-NP，该方法高效且重复性好。该研究为进一步了解NP蛋白的生物功能及甲型流感病毒的致病机理奠定了基础。

流感病毒唾液酸受体在人、小鼠、鸡及鸭气管和肺组织分布的定性与定量分析

为了准确地检测流感病毒唾液酸α2,3-半乳糖和唾液酸α2,6-半乳糖两种受体在人、小鼠、鸡及鸭气管和肺组织中分布和表达的特征,本研究利用凝集素免疫荧光组织染色方法对各种组织切片进行了系统的定性和定量分析.定性分析的结果,显示两种流感病毒唾液酸受体在人、小鼠、鸡及鸭肺组织和小鼠及鸭气管组织中均有表达,但是,唾液酸α2,6-半乳糖受体只在人气管组织中有表达而唾液酸α2,3-半乳糖受体只在鸡气管组织中有表达.定量分析的结果显示,两种流感病毒唾液酸受体在人和小鼠的气管组织以及人、鸡和鸭的肺组织均有表达.同时,本研究结果还显示了流感病毒受体在同一组织中的分布和表达并不是均匀的,表明它们在各种组织中的分布和表达并非简单的有和无之间的区别,而是一种在表达数量上多和少的差别.