茯苓多糖对人乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移的影响及机制

目的分析基于活性导向分离茯苓中具有抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移的成分并探索其分子机制。方法茯苓经醇提去除小分子成分,水提醇沉淀后得茯苓多糖(PPS),PPS经DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换树脂分离和Superdex-75系列凝胶纯化后活性跟踪得PPS10-2,并对PPS10-2进行高效凝胶渗透色谱(HPGPC)法分析、单糖组成测定和活性及机制探索。结果PPS抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移,采用活性跟踪方法,从茯苓中得到活性均一多糖PPS10-2,相对分子量为5761D,主要由鼠李糖∶阿拉伯糖∶葡萄糖组成,三种单糖的摩尔比为10.0∶3.3∶7.0,PPS和PPS10-2表现出较强的抑制MDA-MB-231细胞迁移能力,并且PPS和PPS10-2均是通过抑制特异富含AT序列结合蛋白(SATB)-1的表达来抑制MDA-MB-231细胞迁移能力,推测PPS中可能是PPS10-2为主要成分发挥该作用。结论从茯苓中成功分离到具有抑制MDA-MB-231细胞迁移的多糖,该功效可能是通过抑制SATB-1基因表达实现,该发现为PPS的抗乳腺癌研究提供依据。

细胞因子诱导的杀伤细胞与人肺腺癌A549及A549/DDP细胞共培养下细胞因子的变化

目的目前细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced kill cell,CIK)逆转肿瘤多药耐药的机制尚不明确,文中旨在研究将CIK细胞与人肺腺癌A549及耐药株A549/DDP细胞非接触式共培养条件下,上清液中细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-2及IL-12的变化情况,为研究CIK细胞逆转A549/DDP耐药机制提供细胞因子水平的理论依据。方法实验将细胞分为5组:CIK组(CIK细胞)、A549组(A549细胞)、A549/DDP组(A549/DDP细胞)、CIK+A549组(CIK细胞与A549细胞按20∶1共培养24 h)、CIK+A549/DDP组(CIK细胞与A549/DDP细胞按20∶1共培养24 h)。利用Transwell小室模型将CIK细胞与A549、A549/DDP细胞分别非接触式共培养后,通过ELISA检测各组细胞培养24 h后上清液中细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-2及IL-12的含量。为测A549/DDP细胞本身耐药倍数,实验将细胞分组:A549a组和A549/DDPa组分别加入A549、A549/DDP细胞,同时加入浓度分别为1、2、4、6、8、16、32、64μg/m L的顺铂;A549 b组、A549/DDP b组分别加入A549细胞、A549/DDP细胞,同时加等体积含5%FBS的RPMI-1640培养液;调零组只加RPMI-1640培养液。为测Transwell中CIK与A549/DDP共培养后A549/DDP耐药倍数,实验将细胞分为对照组(A549/DDP细胞)、实验组(A549/DDP细胞+浓度分别为1、2、4、6、8、16、32、64μg/m L的顺铂)、调零a组(只加培养液)。结果 CIK+A549/DDP组TNF-α含量[(245.82±8.63)pg/m L]显著高于CIK组、A549组、A549/DDP组及CIK+A549组[(52.66±3.32)、(66.95±1.71)、(72.42±3.00)、(88.24±3.44)pg/m L],差异均有统计学意义(P<0.05)。CIK+A549组TNF-α含量较CIK组、A549组、A549/DDP组均升高(P<0.05)。CIK组、CIK+A549/DDP组、CIK+A549组IFN-γ含量显著高于A549组、A549/DDP组(P=0.000)。CIK+A549/DDP组、CIK+A549组IL-2含量[(910.24±32.33)、(502.74±36.24)pg/m L]显著高于CIK组、A549组、A549/DDP组[(144.00±12.14)、(47.32±7.50)、(68.386±2.21)pg/m L],且CIK+A549/DDP组IL-2含量显著高于CIK+A549组,差异有统计学意义(P<0.05)。CIK+A549/DDP组、CIK+A549组IL-12含量[(4.04±0.05)、(2.52±0.19)pg/m L]显著高于CIK组、A549组、A549/DDP组[(2.96±0.07)、(2.06±0.13)、(2.33±0.15)pg/m L],且CIK+A549/DDP组IL-12含量显著高于CIK+A549组,差异有统计学意义(P<0.05)。A549/DDP本身的耐药倍数为5.087;A549/DDP的耐药倍数为0.805。结论 CIK与肿瘤细胞非接触式共培养后发生了相互刺激作用,尤其是耐药株A549/DDP与CIK共培养后,更显著的刺激了TNF-α、IL-2及IL-12的分泌。采用Transwell小室模型将CIK细胞与A549/DDP细胞非接触式共培养后A549/DDP细胞耐药倍数下降。

microRNA-21、microRNAlet-7a在三阴性乳腺癌与LuminalA型乳腺癌血清中的表达差异

目的:探讨micro RNA-21、micro RNAlet-7a在三阴性乳腺癌与Luminal A型乳腺癌中的差异及与临床参数间相关性,为三阴性乳腺癌的治疗提供分子靶点。方法:收集三阴性、Luminal A型乳腺癌各33例以及健康者血清29例,通过q PCR检测血清中micro RNA-21、let-7a的表达情况。结果:micro RNA-21在三阴组血清中表达高于Luminal A组(P<0.05)及正常组(P<0.05)。Let-7a在三阴组血清中表达低于正常组(P<0.05)。三阴组血清中micro RNA-21高表达与临床分期晚呈正相关(P>0.05)。结论:micro RNA-21在Luminal A型与三阴性乳腺癌中的表达差异可作为三阴性乳腺癌特异性治疗的候选靶点。

茯苓均一多糖的分离纯化及其硫酸化衍生物对人乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移的影响

SATB1在乳腺癌的侵袭转移中起到决定性作用,抑制SATB1的表达能够有效地控制乳腺癌的转移。该实验从茯苓中分离纯化得到均一多糖并制备硫酸化衍生物,筛选具有抑制SATB1表达的多糖成分。茯苓经醇提去除小分子成分,水提醇沉后得茯苓粗多糖PPS,PPS经DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换树脂分离和Superdex-75系列凝胶纯化后得PPSW-1,并对PPSW-1进行结构分析、硫酸衍生化和抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移作用考察。结果显示从茯苓中得到一种具有抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移作用的均一多糖PPSW-1,相对分子质量为3. 06×104,结构为1,3连接α-D-半乳聚糖为主链,1,6连接α-D-半乳聚糖为支链的多糖,PPSW-1表现出较强的抑制细胞迁移的作用,经硫酸衍生化后产物Sul-W-1活性较PPSW-1并未有明显的增强,但水溶性有明显增加,并且发现茯苓多糖及其硫酸化衍生物能抑制SATB1的表达。该研究从茯苓中成功分离到具有抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移作用的均一多糖,并经过硫酸衍生化得到活性不变溶解性更好的多糖,该发现为茯苓多糖及其衍生物的抗乳腺癌研究提供依据。