蓝光照射致人视网膜色素上皮细胞线粒体凋亡的途径及机制

背景 研究已证实蓝光照射可导致视网膜色素上皮细胞（RPE）凋亡,但其机制目前尚不完全清楚. 目的 探讨线粒体凋亡通路是否参与蓝光照射诱导体外培养的人RPE细胞凋亡过程.方法 分离新鲜的供体视网膜,对人RPE细胞进行原代培养和传代,用角蛋白单克隆抗体行细胞鉴定.将体外培养的人RPE细胞分为无光照组、单纯光照组、光照＋硝苯地平组、光照＋钙磷酸结合蛋白C（calphostin C）组、光照＋佛波酯（PMA）组.光照组细胞用（2 000±500） lx的蓝光照射人RPE细胞6h,然后继续培养24 h后终止.采用Western blot法比较两个组间RPE细胞中凋亡相关调控因子bax、bcl-2、bcl-xl的相对表达,以评价蓝光照射对RPE细胞凋亡的影响.光照＋硝苯地平组、光照＋calphostin C组、光照＋PMA组细胞在蓝光照射前1h分别在培养基中加入相应药物,然后以（2 000±500） lx的蓝光照射人RPE细胞6h,并继续培养24 h,采用Westernblot法检测5个组细胞中caspase-9蛋白表达量的变化,观察钙通道和蛋白激酶C（PKC）通路对RPE细胞线粒体的影响.结果 培养的细胞生长良好,细胞质内充满色素颗粒,呈铺路石样排列,对角蛋白呈阳性反应.无光照组和单纯光照组均可见bax、bcl-2及bcl-xl蛋白条带,相对分子质量分别为23 000、26 000和30 000.与无光照组比较,单纯光照组bax、bcl-2和bcl-xl蛋白表达相对值（A）下降,差异均有统计学意义（t=-4.409,P=0.012;t=7.575,P=0.002;t=6.068,P=0.004）.与无光照组比较,单纯光照组、光照＋calphostin C组、光照＋PMA组细胞中caspase-9蛋白表达均升高,差异均有统计学意义（P=0.005、0.002、0.000）,而光照＋硝苯地平组与无光照组比较差异无统计学意义（P=0.191）.与单纯光照组比较,光照＋PMA组caspase-9蛋白表达升高,差异有统计学意义（P=0.005）;而光照＋硝苯地平组及光照＋calphostin C组caspase-9蛋白表达差异均无统计学意义（P=0.057、0.643）. 结论 蓝光致体外培养的人RPE细胞凋亡,同时细胞中caspase-9表达增强,凋亡抑制基因bcl-2及bcl-xl表达下降,凋亡促进基因bax蛋白表达增强.线粒体凋亡通路参与蓝光照射致RPE细胞凋亡的过程;PKC通路可能参与了蓝光导致的人RPE细胞凋亡.

硫化氢对H_2O_2诱导的视网膜神经节细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨硫化氢对H_2O_2诱导的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)-5氧化损伤的保护作用及可能机制。方法将RGC-5分为4组,RGC-5组为正常对照组;氉RGC-5+H_2O_2组:RGC-5在500μmol·L^(-1)H_2O_2中培养24 h诱导氧化损伤;RGC-5+NaH S+H_2O_2组:RGC-5置于50μmol·L^(-1)NaH S中30 min后在500μmol·L^(-1)H_2O_2中培养24 h;RGC-5+NaH S组:RGC-5置于50μmol·L^(-1)NaH S中30 min。Western blot检测线粒体内、外细胞色素C和视神经萎缩蛋白1(optic atrophy 1,OPA1)表达;用荧光探针JC^(-1)检测线粒体膜电位,用透射电镜观察线粒体形态。结果与RGC-5组相比,RGC-5+H_2O_2组RGC-5细胞质内细胞色素C表达增加,而线粒体内的OPA1表达减少(均为P<0.05)。RGC-5组和RGC-5+NaH S+H_2O_2组线粒体内、外细胞色素C的表达差异均无统计学意义(均为P>0.05)。与RGC-5组相比,RGC-5+NaH S组细胞质内细胞色素C表达减少,而线粒体内的细胞色素C表达增加(均为P<0.05)。与RGC-5组相比,RGC-5+H_2O_2组RGC-5细胞质内OPA1表达显著增加,而线粒体内的OPA1表达减少(均为P<0.05)。RGC-5+NaH S+H_2O_2组和RGC-5+NaH S组RGC-5线粒体内、外OPA1的表达与RGC-5组相似,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。RGC-5+H_2O_2组线粒体膜电位与其他3组比较明显下降,其余3组间线粒体膜电位比较,差异无统计学意义(P>0.05)。RGC-5+H_2O_2组线粒体肿胀呈球状,而其余3组线粒体肿胀不明显。结论硫化氢可能通过阻止线粒体释放OPA1来减轻H_2O_2导致的RGC-5氧化损伤。

多灶性脉络膜炎的临床特征

多灶性脉络膜炎是一种特发性累及外层视网膜、RPE和脉络膜的炎症性疾病。通过回顾性分析了近两年来我院门诊就诊患者经FFA确诊为MC的病例资料,分析总结其临床表现、FFA及OCT的特点。报告如下。

远达性视网膜病变3例报告

近年来由于经济改善,交通事故发生率不断增加,远达性视网膜病变的报道逐渐增多,但其临床表现及机制也不尽相同,不同学者从不同的角度以不同的方法进行研究,结论看法不甚一致。现将我院2013-2015年收治的3例远达性视网膜病变病例诊治分析报告如下。

蓝光致人RPE细胞分泌VEGF及PEDF变化及与Ca2＋-PKC信号通路的关系

目的 探讨蓝光照射致体外培养人RPE细胞分泌VEGF、色素上皮衍生因子（PEDF）、RPE细胞内三磷酸肌醇（IP3）和二酰甘油（DAG）的浓度变化,分析Ca2＋-蛋白激酶C（PKC）信号通路之间的相互作用.方法 实验研究.将体外培养的第4代人RPE细胞随机分为6个组,A组：无光照组;B组：蓝光光照组;C组：蓝光光照＋PKC激动剂佛波酯（PMA）组;D组：蓝光光照＋PKC抑制剂钙磷酸结合蛋白（Calphostin C）组;E组：蓝光光照＋硝苯地平组;F组：蓝光光照＋钙磷酸结合蛋白组＋硝苯地平组.用（2 000±500）lux蓝光照射体外培养人RPE细胞6h,终止培养24 h,采用ELISA测定各组RPE细胞分泌VEGF、PEDF、RPE细胞内IP3和DAG的浓度,采用流式细胞仪检测A、B及F组细胞的凋亡率.结果 A～E组的VEGF浓度分别为（584.38± 10.66）、（700.70±5.88）、（698.21±6.66）、（623.87±3.12）、（648.30±4.91） ng/L.其中B、C、E组的VEGF浓度高于A组,差异有统计学意义（P=O.002,0.002,0.016）.A～E组的PEDF浓度分别为（75.96±1.70）、（71.82±1.67）、（72.43±0.58）、（86.31＋1.35）、（93.716±1.24） μg/L.其中B、C组PEDF浓度低于A组（P=0.004,0.011）.B组和C组的VEGF/PEDF比值显著高于A组（P=0.008,0.027）,E组和D组的VEGF/PEDF比值低于B组（P=0.016,0.015）.A～E组的IP3浓度分别为（9 108.42±0.74）、（117.23±1.05）、（137.12±2.70）、（139.17±1.39）、（149.60±0.76） μg/L.B、C、D、E组IP3浓度均高于A组（P=0.003,0.007,0.000,0.000）,并且C、D、E组IP3浓度均高于B组（P=0.011,0.000,0.000）.A～E组的DAG浓度分别为（995.47±13.61）、（1070.10±10.07）、（1046.39±7.90）、（1041.12±9.76）、（1273.13±10.89） pmol/L.B、C、D、E组DAG浓度均高于A组（P=0.000,0.000,0.000,0.000）,与B组比较,组DAG的浓度增高（P=0.000）,而C、D组DAG浓度降低（P=0.021,0.007）.A、B和F组的细胞凋亡率分别是（10.26±1.87）％、（25.06±2.66）％和（19.36±3.23）％.与A组比较,B组和F组的细胞凋亡率升高（P=0.001,0.009）;与B组相比较,F组的细胞凋亡率下降（P=0.038）.结论 蓝光照射可致人RPE细胞分泌VEGF量增加,PEDF量减少;VEGF与PEDF的比值升高;IP3和DAG浓度增加.L型钙通道及Ca2＋-PKC信号通路参与调节蓝光照射导致体外培养的人RPE细胞VEGF、PEDF、IP3和DAG浓度变化,可能存在反馈调节机制.钙磷酸结合蛋白与硝苯地平联合应用可抑制蓝光照射导致体外培养的人RPE细胞凋亡.

结节性硬化合并双眼视网膜星形细胞错构瘤及室管膜下巨细胞星形细胞瘤一例

患者男性,44岁.因右眼视力下降半年于2014年4月14日到遵义医学院附属医院眼科门诊就诊.患者智力障碍,由其母亲代述：患者自幼视力欠佳,半年前右眼无明显诱因视力下降.否认外伤手术史,否认肝炎、结核、高血压、糖尿病史.患者幼时曾有＂抽搐＂发作,当时未予诊治,青春期后未再发作,家中未发现其他类似病例.

家族性玻璃体淀粉样变性甲状腺激素结合蛋白Gly83Arg突变一家系

家族性玻璃体淀粉样变性（FTA）属常染色体显性遗传性疾病。因淀粉样物质在玻璃体沉积致病。研究最多并与眼部淀粉样变性特别是与玻璃体淀粉样变性密切相关的基因为甲状腺激素结合蛋白（TTR）；目前已知和淀粉样变性相关的TTR基因突变有100多种。

视网膜中央静脉炎致视网膜中央动静脉联合阻塞一例

患者男,35岁.因突发右眼无痛性视力下降4d来我院眼科就诊.无眼红、眼痛及头痛恶心等伴随症状.既往身体健康,无高血压、糖尿病及心脏病史,无眼部外伤及手术史.全身体格检查正常.眼科检查：右眼视力0.02,矫正不能提高;左眼视力1.0.双眼外眼及眼前节正常.右眼视盘水肿,中央见一月牙形黄白色病灶,边界清楚,视盘表面及周围见少许线状出血,视网膜静脉纡曲扩张,动静脉比约1∶2;后极部视网膜散在棉绒斑,黄斑水肿,呈樱桃红色（图1）.左眼视盘边界清楚,颜色淡红,杯盘比约0.6,其余未见明显异常.右眼眼压17.3 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）,左眼眼压18.0 mmHg.

毛细血管扩张症晚期转化为眼球痨一例

患者女性,8岁.因右眼视力下降1周于2009年1月22日就诊于遵义医学院眼科门诊.全身检查未见异常,自发病以来无眼部红肿、疼痛症状,无外伤史、中枢神经系统及全身疾病史.眼科检查：视力：右眼CF/40 cm,左眼0.8.裂隙灯显微镜检查眼前节未见明显异常.散瞳后眼底镜检查可见血管异常扩张,视网膜下方、黄斑区及颞侧见黄白色渗出,脂质沉着,病灶周围小血管扩张（图1）.荧光素眼底血管造影（FFA）显示右眼病灶内及周围视网膜毛细血管扩张,管壁荧光渗漏,微血管瘤,颞侧、颞下方网膜大片无灌注区,后期荧光增强（图2）.右眼OCT显示黄斑区网膜隆起,明显增厚,网膜下见不规则反射光带（图3）.