基于翻转课堂下医学免疫学自主学习的实践

由于传统教学方式的影响,当前大学生的自主学习能力普遍较低,在一定程度上影响了医学本科教学的教学质量和学生未来的职业发展,医学教育要求医学生具有终生学习的能力。翻转课堂作为一种较新的教学方式,它具有引导学生由被动的学习向主动,自主学习方式的转变。为了提高本科临床医学专业医学免疫学教学质量,达到人才培养目标,医学免疫学部分教学内容采用翻转课堂教学模式,教师在课前引导学生预习,课堂指导学生,结合多样化评价方式,构建一种以学生自主学习的教学方式,在教学过程中取得了显著的效果。

整合素连接激酶基因敲除骨肉瘤细胞系的建立及其对上皮-间质转化的影响

目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建人整合素连接激酶ILK基因敲除的人骨肉瘤U2OS细胞系,探讨ILK敲除对骨肉瘤细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法首先在人ILK基因的第2,4,6外显子区域选取序列,分别设计3组靶向ILK的sgRNA,退火后与酶切lentiCRISPRv2慢病毒质粒连接,构建含有sgRNA的重组质粒,重组载体与病毒包装质粒共转染293T细胞后获得慢病毒颗粒;将病毒颗粒感染U2OS细胞,经嘌呤霉素筛选及有限稀释法获得单克隆细胞株,通过测序、qRT-PCR及Western blot鉴定ILK基因稳定敲除细胞系,并进一步通过Western blot检测E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、Snail1、Snail2、Twist等EMT相关标记分子以及Akt的磷酸化水平。结果构建了3组lentiCRISPRv2-ILK-sgRNA敲除质粒,经慢病毒感染U2OS细胞后及单细胞克隆株的筛选鉴定后得到了一株含有ILK等位基因突变的细胞,Western blot证实ILK^(-/-)细胞中ILK蛋白表达缺失;相比野生型,ILK^(-/-)细胞中N-钙黏蛋白、Snail1、Snail2及Twist蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),而E-钙黏蛋白表达则显著升高(P<0.05);与野生型细胞相比,ILK^(-/-)细胞Akt通路的磷酸化水平显著降低(P<0.05),而经TGF-β1处理后,相比野生型细胞,ILK^(-/-)细胞中Akt激活水平亦显著下降(P<0.01)。结论成功构建ILK^(-/-)U2OS细胞系,敲除ILK可能通过下调Akt信号通路抑制U2OS细胞的EMT进程。

软骨寡聚基质蛋白与疾病关系的研究进展

软骨寡聚基质蛋白(COMP)为细胞外基质(ECM)中的非胶原糖蛋白,通过其不同结构域与组织中的多种ECM、细胞表面黏附分子、生长因子等相互作用,参与了多种疾病的发病过程,并发挥不同作用。本文就COMP的基本结构、功能,以及在骨关节系统病变、心血管系统疾病、组织纤维化和癌症等疾病发生过程中发挥的作用进行了综述。

幽门螺杆菌与不孕不育的研究进展

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是一种螺旋状革兰阴性耐酸细菌,主要定植于胃型上皮如胃黏膜、十二指肠黏膜或食管的胃型上皮化生区等。于1994年被世界卫生组织研究机构(IARC)列为Ⅰ类致癌原,是世界范围内最常见的慢性感染之一,在欧美国家约有三分之一的人口感染Hp,而在发展中国家这一比例通常高于50%[1]。最初研究人员发现Hp与慢性活动性胃炎,胃/十二指肠溃疡,肠上皮化生、胃增生性息肉和胃十二指肠的黏膜相关性淋巴样组织(MALT)淋巴瘤的发生和胃腺癌等消化道疾病密切相关。从20世纪90年代开始,越来越多的研究发现Hp感染后的结果不仅仅局限于消化系统,还与心血管,内分泌,呼吸系统,免疫和中枢神经系统疾病相关[2]。

主动脉瓣膜间质细胞分化机制研究进展

瓣膜纤维化或钙化是瓣膜性心脏病(VHD)的两大重要病理表现,其中瓣膜间质细胞(VICs)由成纤维细胞样表型分化为肌成纤维细胞表型或成骨细胞表型,是瓣膜发生早期病理改变的关键环节。VHD多累及主动脉瓣,近年来有关VICs分化的研究多聚焦于主动脉瓣来源细胞。本文就主动脉瓣VICs分化的最新研究进展予以综述,旨在为VHD的防治研究提供更为全面的参考。

通过基于iTRAQ的蛋白组学方法筛选与TGF-β1调控瓣膜间质细胞活化相关的关键蛋白

瓣膜间质细胞(valve interstitial cells,VICs)由成纤维细胞表型分化为肌成纤维细胞表型,即VICs活化是驱动瓣膜纤维化病变的早期关键环节,而转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)是诱导VICs活化的经典细胞因子,该文利用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术对TGF-β1处理前后的VICs进行了差异蛋白质组学分析,以期发现与VICs活化相关的关键蛋白。该研究以原代培养的大鼠VICs为对象,利用蛋白组学方法分析TGF-β1处理VICs前后蛋白质表达谱的变化,通过多种生物学信息分析方法对重点差异蛋白进行筛选,并利用qRT-PCR与Western blot法验证候选蛋白的表达差异。结果显示,共鉴定出可定量差异蛋白7104个,其中包括具有显著差异(P<0.05)的上调蛋白404个、下调蛋白494个。GO分析显示差异蛋白主要富集到多细胞生物学过程、DNA结合功能以及细胞外基质区域组分等功能条目中,KEGG分析显示差异蛋白主要参与DNA复制、错配修复及黏着斑等信号通路。此外,进一步发掘出了AKAP12、FBLN2、NCAM1、MFAP4以及CADM4等5种与VICs活化相关的新型候选蛋白。该研究全面解析了TGF-β1处理前后的VICs差异蛋白表达谱,为进一步阐明VICs活化与瓣膜性心脏病的发生机制提供了新的线索。

姜黄素联合维拉帕米对MCF-7/ADR细胞多药耐药逆转作用的研究

目的:研究姜黄素和维拉帕米对多重耐药人乳腺癌细胞系MCF-7/ADR的逆转作用及其可能机制,为克服乳腺癌细胞对阿霉素的耐药性提供参考。方法:采用CCK-8法检测不同剂量阿霉素对MCF-7细胞与MCF-7/ADR细胞的抑制率,建立耐药模型。以单独使用阿霉素作为对照组,姜黄素、维拉帕米和姜黄素/维拉帕米联合阿霉素为实验组。采用CCK-8法检测各组对耐药细胞的毒性作用,流式细胞术分析耐药细胞凋亡率,实时PCR检测MDR-1基因的表达。结果:姜黄素联合维拉帕米能抑制MCF-7/ADR细胞的生长并具有协同作用,与单独使用两者相比,MCF-7/ADR细胞的凋亡率显著提高。实时PCR结果进一步证明,姜黄素联合维拉帕米可以下调MDR-1基因的表达水平,抑制P-糖蛋白的表达。结论:姜黄素联合维拉帕米在逆转MCF-7/ADR细胞的多药耐药(multidrugresistance,MDR)中发挥协同作用,该研究针对多重耐药乳腺癌细胞的临床用药具有潜在指导意义。