^(99)Tc^(m)-DOTA-G3NGR SPECT显像靶向评价抗血管生成药物早期疗效的初步实验研究

目的:探究^(99)Tc^(m)标记NGR对CD13阳性表达的肿瘤小鼠模型进行SPECT显像,以期为靶向评价抗血管生成药物早期疗效提供一种直观的影像学方法。方法:用^(99)Tc^(m)标记,制备环形DOTA-G3NGR(DOTA-GGGNGRC),再分别以HT-29人结肠腺癌(CD13表达阴性)和HT-1080人纤维肉瘤(CD13表达阳性)细胞按106/只接种于裸鼠右侧腋下建立荷瘤小鼠模型,以200μCi/只通过腹腔注射^(99)Tc^(m)-DOTA-G3NGR行SPECT显像,采用感兴趣区技术(ROI)对图像进行半定量分析,选择肿瘤作为靶组织(T),对侧肌肉组织作为非靶组织(NT),统计ROI内的总放射性计数计算T/NT比值。结果:DOTA-G3NGR分子量1107.2,^(99)Tc^(m)-DOTA-G3NGR标记率为85%放射化学纯度(radiochemical purity,RCP)达95%以上(97.30±0.76)%(n=4);经室温和37℃(10%FBS,5%CO_(2))条件下,6 h内RCP均在90%以上。HT-1080移植瘤最大T/NT值可达4.23±0.53,且高峰时间出现在注射后4小时,而HT-29移植瘤T/NT值约1.20±0.15,且无明显峰值。通过给予抗血管生成药物(0.5 mg/kg,连续7天后),再注射^(99)Tc^(m)-DOTA-G3NGR显像结果显示HT-1080移植瘤T/NT值出现明显的降低但仍高于HT-29移植瘤(P<0.0001,P<0.0001,P=0.0306,n=5)。结论:^(99)Tc^(m)-DOTA-G3NGR对CD13具有良性的靶向性和较高的T/NT值,在靶向评估抗血管生成药物早期疗效方面具有潜在应用价值。

近红外荧光分子探针Cy5-G3CNGRC靶向肿瘤血管生成显像的实验研究

目的:CD13受体是肿瘤血管生成过程的重要调节因子,而天冬酰胺酰-甘氨酸-精氨酸(NGR)氨基序列是CD13的特异性配体;我们制备了Cy5-GGGCNGRC(Cy5-G3CNGRC),以期为研究肿瘤血管生成提供一种新的影像方法。方法:以活化酯法制备Cy5-G3CNGRC经HPLC纯化后备用;分别以永生化人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、人主动脉内皮细胞(HAEC)及CD13阳性表达的人纤维肉瘤细胞(HT-1080)和阴性表达的人直肠癌细胞(HT-29)建立体外细胞学模型以观察Cy5-G3CNGCR细胞学摄取情况;建立HT-29和HT-1080荷瘤小鼠模型通过腹腔注射Cy5-G3NGR(200μg/只)后0.5、1、2和4 h分别进行活体荧光成像,并计算肿瘤(靶,target,T)组织与肌肉(非靶,non-target,NT)组织的T/NT比值,然后对这些数据进行统计学分析。结果:细胞学实验结果提示,HUVEC、HAEC及HT-1080对Cy5-G3CNGRC摄取明显,而HT-29则几乎不摄取;HT-1080移植瘤最大T/NT比值明显高于HT-29移植瘤(2.25±0.49 vs 1.05±0.08,P=0.0047,n=5),且高峰值出现在注射后2 h左右。结论:Cy5-G3CNGRC在体内及体外均表现出了对CD13良好的亲和性,在肿瘤新生血管荧光成像方面有一定的应用价值。

甲状腺激素受体在阿尔茨海默病PC12细胞模型中异常表达

目的观察甲状腺激素受体在阿尔茨海默病(AD)PC12细胞模型中异常表达。方法将PC12细胞扩增,通过MTT法选择浓度为0、30、40 nmol/L的冈田酸(OA)分别加入培养液中处理24 h后更换培养液;收集经前述方法处理后的细胞,以Western印迹和免疫荧光检测Aβ表达情况;Western印迹检测tau蛋白磷酸化情况;Western印迹和PCR方法检测经不同浓度OA处理后的PC12细胞的甲状腺激素受体(THR)α,β及其基因表达情况。结果与0 nmol/L OA组相比,30、40 nmol/L组Aβ蛋白表达明显升高(P<0.001)且40 nmol/L组表达明显高于30 nmol/L组(P=0.006),免疫荧光结果显示,30、40 nmol/L OA处理组Aβ蛋白表达明显高于0 nmol/L;30、40 nmol/L OA处理组蛋白磷酸酯酶(PP)2A表达明显下调,磷酸化的tau蛋白(P-tau)表达明显增加,酪氨酸307磷酸化的PP2A(PP2Ac-yp307)表达显著升高(P<0.001);40 nmol/L OA处理组细胞THRα、THRβ蛋白及基因表达均明显升高(P<0.001),30 nmol/L OA处理组仅THRα蛋白,THRβ蛋白及基因表达明显升高(P<0.001),而THRα基因表达无显著异常(P=0.098)。结论PC12细胞AD模型中PC12神经细胞表达THR蛋白(α、β)及THRβ基因异常升高可能是细胞的一种修复反应,AD的发生诱发了PC12细胞THR蛋白及基因的高表达。