金钗石斛生物碱的提取技术及临床前药理作用研究进展

金钗石斛是我国珍稀名贵中药,富含生物碱。石斛碱是金钗石斛的特征性生物碱成分,用于评价金钗石斛药材的品质。文章通过系统查阅有关书籍、期刊、数据库等资料,列举了近五年金钗石斛生物碱最新的含量测定方法和提取技术,列出了金钗石斛倍半萜生物碱的化学结构,重点阐述了金钗石斛生物碱的保护神经、肝脏、心肌,降血糖、抗白内障和抗癌的临床前药理作用及机制,简述了金钗石斛的临床应用。

增液汤治疗2型糖尿病的“入血成分⁃靶点⁃效应”复杂网络研究

目的结合网络药理学方法探讨增液汤入血成分对2型糖尿病的潜在作用效应。方法根据配体的化学结构相似性预测增液汤入血成分作用靶点,并通过靶点与糖尿病治疗效应的关联性,构建并分析“入血成分-靶点-效应”网络(ITEN),从而筛选出重要的潜在活性成分。对增液汤治疗2型糖尿病的潜在活性成分和作用效应进行体外实验验证。结果哈帕苷、哈帕酯苷、阿魏酸、梓醇、毛蕊花糖苷等6个入血成分可能是增液汤的主要活性物质,葡萄糖摄取、胰岛素分泌、糖原合成可能是增液汤治疗2型糖尿病的主要作用效应。结论通过计算模拟和实验验证发现了增液汤入血成分的降糖活性效应,为揭示增液汤治疗2型糖尿病的物质基础提供了理论依据。

淫羊藿苷通过调控α-SMA和MMPs/TIMP的表达改善异丙肾上腺素所诱导的心肌纤维化

目的探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)对异丙肾上腺素(ISO)诱导的心肌纤维化的干预作用。方法将C57BL/6小鼠,随机分为空白组、ISO模型组、ICA低、中、高剂量组(15、30、60 mg·kg^(-1))和氯沙坦组(9 mg·kg^(-1))。空白组注射生理盐水,其余连续14 d皮下注射ISO(5 mg·kg^(-1),qd)制备心肌纤维化模型。同时,ICA和氯沙坦组灌胃给予ICA或氯沙坦,其余灌胃等体积双蒸水。采用小动物超声仪检测小鼠左心室射血分数(LVEF)和左心室短轴缩短率(LVFS);计算心脏质量指数(HMI);Masson染色观察左心室胶原沉积;Western blot检测左心室组织α-SMA、MMP-2、MMP-9和TIMP-1蛋白的表达。结果ICA(30、60 mg·kg^(-1))和氯沙坦可抑制ISO所致的小鼠LVEF和LVFS的降低,HMI的升高,左心室胶原沉积的增加,左心室组织α-SMA、MMP-9蛋白表达的上调及MMP-2、TIMP-1蛋白表达的下调(P<0.05)。结论ICA能够改善ISO诱导的小鼠心肌纤维化,其机制至少可能与调控α-SMA、MMPs/MMP-1的蛋白表达有关。

淫羊藿苷通过下调ATF6-DR5信号通路改善异丙肾上腺素所致小鼠左心室心肌细胞凋亡

目的以C57BL/6(简称C57)小鼠为研究对象,并基于ATF6-DR5信号通路研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的左心室心肌细胞凋亡作用及机制。方法30只6~7周龄的雄性C57小鼠连续14 d经颈背部皮下注射ISO(5 mg·kg^-1·d^-1)诱导心肌细胞凋亡,10只C57小鼠注射等体积生理盐水作为对照组。注射ISO的小鼠随机分为3组(n=10):ISO组、ICA-L组和ICA-H组。ICA组分别灌胃给予ICA混悬液(15,60 mg·kg^-1·d^-1),连续14 d。Control组和ISO组灌胃均给予等体积双蒸水。末次给药结束后称全心重,分离左心室(含室间隔)称重,计算左心室质量指数。TUNEL染色检测左心室心肌细胞凋亡情况;Western blot检测左心室GRP78、ATF6和DR5的蛋白水平。结果与Control组相比,ISO组左心室质量指数明显升高(P<0.05);TUNEL染色结果发现,左心室心肌细胞凋亡率明显增加(P<0.05);Western blot结果发现,左心室GRP78、ATF6和DR5的蛋白水平明显升高(P<0.05)。与ISO组相比,ICA高剂量组左心室质量指数明显降低(P<0.05);左心室心肌细胞凋亡率明显降低(P<0.05);左心室GRP78、ATF6和DR5的蛋白水平明显降低(P<0.05)。结论ICA具有改善ISO所致的左心室心肌细胞凋亡作用,其机制可能与抑制ATF6-DR5信号通路有关。

eNOS/PKG-1通路在L-精氨酸抗野百合碱所致大鼠右心室重构中的作用

目的借助工具药L-NAME,探讨eNOS/PKG-1通路在L-精氨酸(L-Arginine,L-arg)干预野百合碱(monocrotaline,MCT)所致大鼠右心室重构的作用。方法20只SD大鼠随机分为4组,正常对照组、MCT组、L-arg组和L-arg+L-NAME组。观察大鼠一般状况;采用右心导管术检测大鼠右心室压;称大鼠体质量和右心室重量,计算右心室质量指数;HE染色观察大鼠右心室形态学变化;蛋白免疫印迹法检测右心室cTnI、eNOS和PKG-1蛋白的表达。结果与Control组相比,MCT组大鼠右心室最大压和右心室质量指数均明显升高(P<0.05),体质量明显减轻(P<0.05);右心室心肌细胞肥大,且排列紊乱;cTnI蛋白的表达明显上调(P<0.05),eNOS和PKG-1蛋白表达均明显下调(P<0.05)。L-arg能明显改善上述变化(P<0.05)。而eNOS抑制剂L-NAME能明显阻断L-arg的作用(P<0.05)。结论L-arg可改善MCT所致大鼠右心室重构,其机制可能与上调eNOS和PKG-1蛋白的表达有关。

肿瘤乏氧靶向响应的罗丹明荧光探针及其成像介导手术治疗

基于罗丹明的良好荧光性能,经化学偶联反应制备并表征了一个偶氮乏氧特异响应的“Off-On”型荧光成像探针(FY-4).从分子层面证实了其荧光“Off-On”性能和响应机制;在L02正常细胞及4T1,HeLa和A549肿瘤细胞层面考察了其对受试细胞株的毒性和不同乏氧时间的荧光成像性能;再利用4T1肿瘤模型,分别以肿瘤原位注射和尾静脉注射的方式考察了其荧光成像性能,并探究了其荧光成像介导切除肿瘤性能,最后还考察了FY-4的生物安全性.结果表明,FY-4有高的肿瘤乏氧靶向特异“关-开”响应的荧光成像差异显影及荧光成像介导切除肿瘤的潜能,结合其良好的光物理性能、生物安全性和明晰的给药时间等特性,有望为生物医学荧光成像介导肿瘤切除提供新的研究工具.

金钗石斛居群内石斛碱的含量差异比较

目的测定金钗石斛居群内不同丛和不同年生枝条中石斛碱的含量,并对其进行比较与分析。方法采用气相色谱法,DB-1毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25μm),火焰离子化检测仪(FID)为检测器测定不同丛和不同年生枝条石斛碱的含量。结果金钗石斛居群内不同丛和不同年生枝条中石斛碱含量均有差异,最高含量为0.94%,最低含量为0.13%。生长年限是影响同一丛中不同枝条石斛碱含量的主要因素,1年生>2年生>3年生。在生长年限相同的条件下,地势是石斛碱含量差异的主要因素,高地势金钗石斛中石斛碱含量显著高于低地势。结论金钗石斛居群内样本中的石斛碱含量差异显著,可以为金钗石斛的种植、采收提供参考。

低密度脂蛋白受体相关蛋白1与阿尔茨海默病

阿尔茨海默病(AD)是一种与年龄高度相关的慢性进行性神经退行性疾病,常见于65岁以上中老年人群,据统计,2019年全球已有超过5000万人群罹患AD,并且每年正以惊人的速率增长,预计21世纪中叶AD患者将超过1.52亿[1-2]。从AD发现至今,人们为究其病因进行过大量研究,发现其主要的病理学标志是神经原纤维缠结(NFT)、β淀粉样蛋白(Aβ)聚集以及神经元损伤[3]。此外,家族遗传病史、脑部外伤和高胆固醇血症等慢性疾病也会增加AD发病风险,但其发病机制至今尚未明朗。近年来,越来越多的研究发现,低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)1与AD发病有关。

绞股蓝总皂苷对高胆固醇血症模型小鼠主要尿蛋白基因表达的影响研究

目的:探讨绞股蓝总皂苷(GPs)对高胆固醇血症模型小鼠肝组织中主要尿蛋白(Mups)基因表达的影响。方法:将C57BL/6J小鼠按体质量(BW)分为对照(ND)组、模型(HFD)组和GPs治疗(GP)组,每组11只。除ND组外,其余各组小鼠均给予高脂饲料以复制高胆固醇血症模型。于饲养的第17周起时,ND组和HFD组小鼠均灌胃等体积0.1%羧甲基纤维素钠溶液,GP组小鼠灌胃GPs混悬液(250 mg/kg),每日1次,连续22周。在检测各组小鼠BW、血糖(BG)、血脂[总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]水平的基础上,提取其肝组织总RNA,构建逆转录文库并进行RNA-seq测序;采用主成分分析(PCA)、火山图、散点图等方法筛选差异基因;采用实时荧光定量聚合酶链反应法(RT-qPCR)对差异基因进行验证;通过双变量分析评价差异基因表达量与上述药效学指标的相关性。结果:与ND组比较,HFD组小鼠BW和血清BG、TC、LDL-C水平均显著升高(P<0.05);与HFD组比较,GP组小鼠除BW外上述指标均显著降低(P<0.05)。PCA结果显示,ND组和HFD组数据分布于不同象限,GP组数据分布介于上述两组之间。经高脂饮食诱导后,小鼠肝组织中Mup4、Mup5、Mup11、Mup15、Mup21基因mRNA均显著上调(P<0.05);经GPs干预后,Mup3、Mup4、Mup5、Mup8、Mup12、Mup21基因mRNA均显著下调(P<0.05)。在ND组与HFD组、HFD组与GP组中表达发生显著改变且趋势相反的基因为Mup4、Mup5、Mup21。RT-qPCR验证结果显示,与ND组比较,HFD组小鼠Mup4、Mup5、Mup21基因mRNA的相对表达量均显著升高(P<0.05)。相关性分析结果显示,小鼠Mup5基因mRNA表达量与血清TC、BG水平(r分别为0.727 1、0.670 6)以及Mup4、Mup21基因mRNA表达量与血清BG水平(r分别为0.737 8、0.721 5)均成正相关(P<0.05)。结论:GPs对高胆固醇血症模型小鼠肝组织中Mups基因的表达具有一定的调控作用,可通过回调Mup4、Mup5、Mup21基因mRNA的过表达来降低模型小鼠的糖脂水平。

贵州铁皮石斛、金钗石斛中农药残留、重金属及有害元素含量分析

目的检测分析贵州不同地区主要石斛基地中铁皮石斛和金钗石斛药材中48种农药残留和5种重金属及有害元素含量。方法根据2020版《中国药典》,利用QuEChERS结合超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS)和气相色谱-串联质谱(GC-MS)技术多指标同步定性、定量检测分析铁皮石斛和金钗石斛药材中48种农药残留量;采用电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)及原子荧光光谱仪检测分析铁皮石斛和金钗石斛药材中铅、镉、砷、汞、铜5种重金属及有害元素含量。结果不同主要石斛种植基地产的铁皮石斛和金钗石斛药材中的48种农药残留和5种重金属及有害元素含量均低于《中国药典》规定的定量限。结论主要种植基地的铁皮石斛和金钗石斛药材中的48种农药残留和5种重金属及有害元素含量均符合《中国药典》规定。

糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链蛋白在糖皮质激素作用中的角色及分子机制

糖皮质激素(glucocorticoids,GCs)因具有强大的抗炎和免疫抑制作用,在临床上广泛用于自身免疫性疾病和炎症相关性疾病的治疗。然而,长期使用或者大剂量使用会导致较多的不良反应,降低其应用价值。因此,为了既保留GCs的抗炎作用、又减轻GCs的免疫抑制作用,深入研究GCs的分子作用机制对寻找新的药物靶点或者具有GCs作用的小分子化合物具有重要意义。糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链蛋白(glucocorticoid-induced leucine zipper protein,GILZ)是GCs调控的靶分子,是GCs的重要下游执行分子,但GILZ效应又不完全等同于GCs通过糖皮质受体(glucocorticoids receptor,GR)发挥的生理和药理效应,具有替代GCs用于临床的可能性。因此,本文就GILZ在GCs的抗炎、免疫抑制中的作用、分子机制以及在自身免疫系统疾病模型中的应用进行综述。

非编码RNA与血管平滑肌细胞功能调节的研究进展

血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表型转换、异常增殖及迁移在心血管疾病中起着关键作用,是动脉粥样硬化、高血压等心血管疾病的重要病理过程[1]。非编码RNA是一类从分子基因组转录而未编码蛋白质的RNA分子,包括微小RNA(microRNA,miRNA)、长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)和环状RNA(circular RNA,circRNA)。近年来,越来越多的研究证明非编码RNA与VSMC功能调节密切相关,本文拟对miRNA、lncRNA、circRNA与VSMC功能调节的研究进展进行综述如下。

阿尔茨海默病相关基因受高脂饮食调控的肝脏转录组学分析

目的研究阿尔兹海默症相关基因在肝脏中受高脂饮食的调控。方法通过提取肝脏总RNA进行测序,深入分析MS小鼠肝脏AD通路基因的表达变化,并通过PPI网络分析挖掘AD通路关键节点基因,利用荟萃分析检验关键节点基因在MS人群中的表达情况,结合mRNA水平与生化指标的相关性阐明MS诱导AD发病的机制。结果与正常小鼠比较,MS小鼠肝脏AD通路基因的表达模式明显不同。利用PPI网络分析发现高节点度基因Uqcrh、Cyc1和Uqcrq。荟萃分析结果表明三个关键节点基因在MS人群体内的表达会发生显著改变。结论高脂饮食对AD通路基因的影响可能是包括肝脏等外周器官在内全身性的而并非仅仅局限于大脑,Uqcrh、Cyc1、Uqcrq等高节点度基因可能成为研究MS诱发AD的重要靶点。

刺梨专利信息分析

刺梨(Rosa roxbughii)为蔷薇科蔷薇属植物,又名送春归、刺石榴、刺菠萝、刺莓果,主要分布于我国西南一带,其中尤以贵州最为丰富,在贵州省刺梨主要分布在西部的毕节市、安顺市以及兴义和铜仁市。刺梨性味甘,酸涩,归脾、肾、胃经,具有消食、健脾、治疗食积饱胀、收敛止泻、解暑的作用,《本草纲目拾遗》《中药大辞典》《宦游笔记》《四川中药志》和《贵州民间方药集》均有收载。药理研究表明,刺梨果具有抗氧化、延缓衰老、抗疲劳、调节机体免疫功能、调节消化系统、抗肿瘤、降血糖、降血脂、调节糖脂代谢、抗动脉粥样硬化等多种药理作用。

甲状腺癌颈淋巴结转移分子检测的研究进展

甲状腺癌发生颈淋巴结转移与疾病复发和患者预后密切相关。准确判断淋巴结转移对肿瘤分期及治疗至关重要,可有效改善患者预后。然而,术前发现颈淋巴结转移是甲状腺癌患者个体化诊治的重点和难点。目前,临床上常使用细针穿刺洗脱液甲状腺球蛋白检测在术前评估分化型甲状腺癌颈淋巴结转移情况,其诊断效能较高。对肿瘤标记物及新兴生物标记物的不断探索与应用,为甲状腺癌术前淋巴结转移诊断研究提供了崭新的视角。液体活检作为一种新型无创的检测技术,获取样本方便,在早期诊断甲状腺癌颈淋巴结转移方面具有广阔的临床应用前景。此外,液体活检生物标志物的分析与应用,将有助于临床诊疗策略的制定,为甲状腺癌患者的早期精准治疗提供可能。本文围绕甲状腺癌颈淋巴结转移相关分子标志物的研究进展进行综述。

基于代谢组学研究金钗石斛调节脂质代谢的作用

目的基于代谢组学研究金钗石斛对脂质代谢的调节作用。方法将24只大鼠随机分为空白对照组、金钗石斛给药组(0.25 g/kg),每6 h灌胃1次,连续5 d,收集大鼠血浆和肝脏。采用UPLC-MS对血浆样本进行代谢组学研究。利用主成分分析、聚类分析、KEGG通路富集分析等方法,对金钗石斛给药组与空白对照组的代谢组学数据进行分析,比较差异代谢物。根据代谢组学结果,采用RT-qPCR检测金钗石斛对Cyp7a1、Cyp7b1、Cyp8b1、Cyp27a1、Cyp3a1和Lpin1等脂质代谢相关基因表达的影响。结果与空白对照组相比,金钗石斛给药组血浆样本内源性代谢物整体轮廓变化明显,其中1448个代谢物的变化显著(P<0.05),641个代谢物的差异倍数≥2。KEGG通路富集结果显示,前5条通路分别为Metabolic pathways、Biosynthesis of antibiotics、ABC transporters、Biosynthesis of amino acids、Protein digestion and absorption。RT-qPCR结果表明,金钗石斛可以上调Cyp27a1和Cyp3a1基因的表达(P<0.05),下调Lpin1基因的表达(P<0.05)。结论金钗石斛能对脂质代谢进行调节,为其进一步的开发与利用提供了科学依据。

多基因检测在甲状腺结节中的诊断价值及卫生经济学分析

目的:探究多基因检测[KRAS、NRAS、PIK3CA(H1047R)、BRAF(V600E),KNPB]在甲状腺结节诊断中的应用价值。方法:选取我院2020年1月至2021年2月行多基因检测的甲状腺结节患者232例,收集其临床信息,分析KNPB中各基因在甲状腺结节中的突变频率,以术后病理为“金标准”,比较各检测方法的敏感度、特异度、准确性、阳性预测值、阴性预测值、成本效果比及增量成本效果比。结果:232例患者中共251枚结节,其中共有BRAF(V600E)突变69枚(27.49%),KRAS突变11枚(4.38%),NRAS突变9枚(3.59%),PIK3CA(H1047R)未检测到突变。在164例手术患者中包括结节性甲状腺肿64例、甲状腺腺瘤9例、甲状腺滤泡状癌4例、甲状腺乳头状癌87例,仅BRAF(V600E)基因在不同病理类型中的差异有统计学意义(P<0.001)。细针抽吸细胞学检查(fine needle aspiration cytology,FNAC)联合BRAF(V600E)单基因检测的受试者工作特征曲线下面积为0.856,增量成本效果比为98.81。结论:相较于多基因检测,FNAC联合BRAF(V600E)单基因检测对甲状腺结节的诊断效能和卫生经济学价值最优。

金钗石斛生物碱成分分析及其对Aβ_(1-42)所致PC12细胞凋亡的抑制作用

目的用Aβ_(1-42)处理高分化PC12细胞建立体外阿尔茨海默病(AD)细胞模型,研究金钗石斛生物碱(DNLA)对Aβ_(1-42)所致PC12细胞凋亡的抑制作用及机制。方法用UPLC-ESI-HRMS技术分析DNLA成分。将PC12细胞分为对照组、DNLA正常给药组(0.03、0.3、3μg·mL^(-1))、30μmol·L^(-1) Aβ_(1-42)模型组、DNLA低浓度组(Aβ_(1-42)+0.03μg·mL^(-1) DNLA)、DNLA中浓度组(Aβ_(1-42)+0.3μg·mL^(-1) DNLA)、DNLA高浓度组(Aβ_(1-42)+3μg·mL^(-1) DNLA)和阳性对照组(Aβ_(1-42)+10μmol·L^(-1)美金刚),观察DNLA对Aβ_(1-42)所致细胞毒性的保护作用,探讨DNLA对钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶2磷酸化,caspase-3和Cleaved caspase-3表达的调控作用。结果DNLA主要由石斛碱、石斛胺碱、石斛碱氮氧化物和石斛星碱等生物碱组成。DNLA不显著影响PC12细胞存活率;0.3、3μg·mL^(-1) DNLA预给药显著抑制Aβ_(1-42)诱导PC12细胞毒性,改善损伤细胞形态,减少凋亡细胞,下调钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶2的Ser511位点磷酸化水平和caspase-3、Cleaved caspase-3蛋白表达(P<0.05)。结论金钗石斛生物碱抑制Aβ_(1-42)诱导PC12细胞凋亡,其机制与负向调控钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶2的Ser511位点磷酸化,下调caspase-3蛋白表达、减少caspase-3蛋白活化有关。