红曲米高产GABA工艺优化和双红曲霉菌联合发酵抑制膳食相关酶活条件优化

以高产γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)菌株MA-25和产降脂色素菌株MP-19为研究菌株,通过单因素、Plackett-Burman实验设计、Box-Behnken响应面实验筛选提高MA-25的GABA产量的红曲米培养条件,并筛选MP-19的色素对α-淀粉酶有最佳抑制效应的氨基酸,然后综合考虑代谢产物GABA产量、α-淀粉酶,蛋白酶和脂肪酶的最佳抑制率,设计正交实验分别选出四组MA-25和MP-19双菌联合发酵的最佳组合,最后考虑降脂能力的最大化。结果表明,优化培养条件是谷氨酸1.18%,葡萄糖+麦芽糖是1.16%,pH为6.08,MA-25红曲米的GABA最高得率5.608 mg·g-1,比优化前(4.651 mg·g-1)提高了20.58%,MP-19最佳降脂氨基酸为L-色氨酸(L-Trp)。双菌联合发酵最佳组合为:粳米20.0%,初始pH为6.5,硫酸铵1.0%,葡萄糖+麦芽糖为0.50%,谷氨酸为1.50%,L-Trp为1.0%,NaH2PO4 1.0%,水57.0%,GABA产量为5.400 mg·g-1,α-淀粉酶抑制率为57.15%,蛋白酶抑制率为28.14%,脂肪酶抑制率为29.67%。

小鼠睾丸体外生精小管模型构建及Rho/ROCK信号通路对其重构的影响

目的构建小鼠睾丸体外生精小管模型,探讨Rho/ROCK信号通路在生精小管重构过程中的作用。方法取新生10日龄小鼠睾丸,分离纯化睾丸支持细胞(Sertoli cells,SCs),培养3 d后利用免疫荧光染色技术检测分离细胞GATA结合蛋白4(GATA Binding protein 4,GATA4)表达情况,鉴定SCs纯度;以RPMI 1640为阴性对照组(cont组),人工合成血清替代物(KnockOut^(TM) Serum replacement,KSR)和FBS为实验组,倒置显微镜下观察原代SCs生精小管形成情况,建立生精小管体外培养模型;分别以RPMI 1640培养基组和KSR组为阴性对照和阳性对照组,以KSR+Y27632(K+Y)、缓激肽(Bradykinin,BK)为实验组,探讨Rho/ROCK信号通路在生精小管形成过程中的作用。结果(1)免疫荧光染色结果显示在分离得到的细胞中GATA4^(+)DAPI^(+)SCs占90%以上;(2)倒置显微镜下观察到与cont组相比,随着培养天数的增加,KSR组有大量管状结构形成,而FBS组只观察到细胞生长,并未有管状结构形成;(3)添加ROCK分子抑制剂Y27632后镜下观察到的管状结构被明显抑制,而当添加Rho/ROCK信号通路激动剂BK后,我们观察到类似于KSR组管状结构的形成。结论Rho/ROCK信号通路参与小鼠睾丸体外生精小管结构的形成。

贵州遵义地区冈田绕眼果蝇野外调查及唾液腺染色体制备

目的对遵义地区的冈田绕眼果蝇进行野外调查及鉴定。方法在市郊区果园诱捕果蝇,对采集的果蝇进行分离、鉴定,并进行多线染色体的制备。结果在遵义地区成功诱捕到冈田绕眼果蝇,平均长径为3. 5 mm,雌蝇略大,雌雄蝇均比黑腹果蝇大。经鉴定:环绕复眼的白色条带、足胫节的黑色环带、胸背部的褐色暗斑、腹部背侧"山"字形黑色横带均可以作为冈田属果蝇形态鉴定的标志。对制备方法进行摸索,首次观察了冈田绕眼果蝇的多线染色体。结论通过野外调查并研究遵义地区冈田绕眼果蝇的形态学、分子标记基因鉴定及唾液腺染色体制备等,将为遵义地区冈田绕眼果蝇以及结膜吸吮线虫病的防治研究提供基础。

红曲霉-金钗石斛双向发酵工艺优化

红曲霉(Monascus sp.)代谢产物具有很强的抗氧化性,是天然的抗氧化剂重要来源。金钗石斛是中国传统中药材,具有很多生物活性,结合红曲霉与中草药材双向发酵有望增强其抗氧化能力和改变代谢通路,为探究筛选最佳的金钗石斛-红曲霉发酵条件,提高双向发酵代谢产物的抗氧化活性,采用ABTS法、DPPH法和抗脂质过氧化法三种体外抗氧化模型,通过单因素实验确定影响抗氧化活性的发酵条件,然后设计了四因素三水平正交实验,确定了最优发酵条件为:接种量10%、料水比1:0.7、培养时间16 d和温度(28±1)℃。在此条件下,石斛红曲的脂质过氧化抑制率为69.32%,DPPH自由基清除率为45.65%,ABTS+自由基清除率90.63%,比单独红曲霉发酵代谢产物的抗氧化性分别提高了13.04%,14.10%,29.07%,比金钗石斛的抗氧化性分别提高了42.48%,44.99%,74.63%。可为新型双向发酵的抗氧化产品的开发提供一定的依据。