miR-505通过靶向核因子-κB调控脂多糖诱导的巨噬细胞活性研究

目的:探讨究微小RNA 505(miR-505)通过靶向调控核因子-κB(NF-κB)对小鼠巨噬细胞(RAW264.7)活性的影响。方法:通过生物信息学方法预测miR-505和NF-κB潜在的结合位点,扩增NF-κB基因的3’端非编码区,同时对结合位点进行突变,将野生型(WT)及突变型(MUT)序列克隆至pSicheck2载体中,进行双荧光素酶报告实验。利用Liposome 3000将miR-505 mimics及inhibitor转染至RAW264.7细胞中,逆转录聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot实验检测miR-505、NF-κB的表达。用脂多糖(LPS)及miR-505共处理RAW264.7细胞,采用CCK-8实验检测细胞的活力,ELISA检测炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的表达。结果:双荧光素酶结果表明miR-505可与NF-κB的3’UTR端结合,且miR-505与NF-κB的表达呈负相关。CCK8结果提示miR-505可抑制LPS对RAW264.7细胞的毒性作用;ELISA结果表明miR-505可抑制LPS作用下炎症因子TNF-α和IL-6的分泌。结论:miR-505可通过靶向作用NF-κB基因以抑制TNF-α和IL-6的分泌,并降低LPS对RAW264.7细胞的损伤。

间充质干细胞治疗衰老相关疾病的研究进展

衰老是机体随着年龄增长,器官功能逐步退化的过程,也是生命的自然规律。衰老生物学及衰老相关疾病的干预是当前研究领域亟待解决的难题。干细胞衰老学说认为成体干细胞的衰老枯竭是组织器官衰老及衰老相关疾病的重要诱因,间充质干细胞(MSCs)是一类可在中胚层衍生物(软骨细胞、骨细胞、脂肪细胞)之间分化的成体干细胞亚群,在维持其器官稳态中发挥重要作用,目前已被广泛应用于缓解衰老相关疾病。

乙酰肝素酶在重症急性胰腺炎相关肺损伤中的表达及意义

目的探讨乙酰肝素酶(heparananse,HPSE)在重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)相关肺损伤中的表达及意义。方法选取2021年5月至2023年5月在本院就诊的SAP患者112例,依据患者是否发生肺损伤分为肺损伤组和无肺损伤组,对比两组临床资料、HPSE mRNA相对表达量,并多因素Logistic回归分析SAP患者发生肺损伤的相关因素,绘制ROC曲线,分析HPSE mRNA对SAP患者肺损伤发生的预测价值。结果112例SAP患者并发肺损伤55例(肺损伤组)、未并发肺损伤57例(无肺损伤组)。两组性别、年龄、BMI、基础疾病、Hb、WBC、AMY比较差异无统计学意义(P>0.05),两组BISAP评分、LDH、IL-6、CRP、Fib、PCT、TNF-α比较差异具有统计学意义(P<0.05)。肺损伤组外周血HPSE mRNA水平高于无肺损伤组(3<0.05)。BISAP评分[OR=2.891,95%CI:1.481~5.644]、HPSE mRNA[OR=3.335,95%CI:1.711~6.513]、Fib[OR=3.285,95%CI:1.524~6.231]、IL-6[OR=1.654,95%CI:1.105~5.254]、CRP[OR=1.884,95%CI:1.112~5.885]、PCT[OR=1.713,95%CI:1.121~5.126]、TNF-α[OR=1.624,95%CI:1.087~6.321]均是影响SAP患者肺损伤的危险因素(P<0.05)。外周血HPSE mRNA联合Fib预测SAP患者肺损伤敏感性为85.51%、特异性79.35%、AUC为0.821(95%CI:0.754~0.903)高于单一检测。结论外周血HPSE、Fib均与SAP相关肺损伤有关,且外周血HPSE联合Fib对SAP患者发生肺损伤的预测效能高。

同源域蛋白同源盒基因通过调控Wnt/β⁃catenin信号通路抑制胃癌细胞的增殖

目的探讨同源域蛋白同源盒基因(HOPX)在胃癌中的表达情况及调控胃癌细胞的增殖能力及其作用机制。方法采用Real time⁃PCR及Western blot检测HOPX在胃癌细胞和组织中的mRNA及蛋白表达水平;在胃癌细胞HGC27及BGC823中稳定过表达HOPX基因,通过CCK⁃8法、克隆形成实验、EdU法检测HOPX对胃癌细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测HOPX对胃癌细胞细胞周期的调控作用。另外将用于检测β⁃catenin/TCF/LEF可转录活性的荧光素酶报告质粒TOP flash和FOP flash转染胃癌细胞,使用双荧光素酶报告系统测定过表达HOPX对细胞内荧光素酶转录活性的影响。此外采用Western blot分别测定过表达HOPX对胃癌细胞内β⁃catenin、GSK⁃3β及p⁃GSK⁃3β蛋白表达水平的变化。进一步检测过表达HOPX后,胃癌细胞核内β⁃catenin蛋白表达水平及其下游靶基因CyclinD1的表达变化,以探讨HOPX影响胃癌细胞增殖的具体机制。结果Real time⁃PCR及Western blot结果显示HOPX在胃癌中的mRNA及蛋白表达水平均显著降低,HOPX过表达后可显著抑制胃癌细胞的增殖并抑制其细胞周期。Western blot结果表明过表达HOPX可通过抑制GSK3β的磷酸化水平促进β⁃catenin的降解,从而抑制β⁃catenin入核,进而下调下游靶基因CyclinD1的表达,达到抑制胃癌细胞的增殖能力。结论HOPX通过调控Wnt/β⁃catenin信号通路以抑制胃癌细胞的增殖。

白藜芦醇对秀丽隐杆线虫帕金森病模型的神经保护作用

目的探讨白藜芦醇对秀丽隐杆线虫帕金森病模型神经保护作用及其可能的机制。方法将BZ555线虫分为对照组、6-羟基多巴胺组及白藜芦醇组,检测线虫多巴胺神经元的损伤修复情况及帕金森病表型的改变;NL5901线虫分为对照组及白藜芦醇组,检测线虫α-突触核蛋白的聚集情况及帕金森病表型的改变。结果白藜芦醇修复了6-羟基多巴胺诱导的BZ555线虫多巴胺神经元的损伤,降低了NL5901线虫α-突触核蛋白的聚集和活性氧含量,改善了NL5901及BZ555线虫的帕金森病表型。结论白藜芦醇对秀丽隐杆线虫帕金森病模型具有神经保护作用,其作用可能与减轻线虫的氧化应激相关。