黏着斑激酶在HUVEC的增殖、迁移、凋亡和毛细血管样结构形成中的作用

目的:探讨以黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)特异性抑制剂TAE226处理或siRNA沉默FAK基因对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)的增殖、迁移、细胞凋亡及毛细血管样结构形成的影响。方法:应用Real-time PCR检测HUVEC和胸膜间皮瘤(malignant pleural mesothelioma,MPM)细胞株Y-MESO-14、NCI-H290中FAK mRNA的表达。以FAK siRNA转染HUVEC细胞致FAK基因沉默或以TAE226处理,采用Western blotting法检测经/未经VEGF预处理的HUVEC中FAK蛋白的表达;采用MTT法检测TAE226或FAK siRNA处理对HUVEC增殖能力的影响,Annexin-V FITC/PI双染色流式细胞术检测两者对HUVEC细胞凋亡的作用,Transwell法检测TAE226及siRNA处理对HUVEC细胞迁移的影响,体外脉管生成实验检测HUVEC中毛细血管样结构形成的数量。结果:在HUVEC中FAK mRNA的表达量显著高于Y-MESO-14和NCI-H290细胞[(0.032±0.006)vs(0.014±0.001)、(0.006±0.002),均P<0.05]。HUVEC在VEGF刺激下,FAK和p FAK的表达量均有增高(P<0.05),FAK siRNA转染可以抑制VEGF预刺激下的FAK蛋白表达[(0.011±0.002)vs(0.036±0.004),P<0.01]。分别给予不同浓度TAE226或FAK siRNA处理,均可呈浓度依赖性地抑制HUVEC增殖、迁移和凋亡(P<0.01)。体外脉管生成实验发现,VEGF可促进HUVEC中毛细血管样结构的生成,TAE226[(14.32±7.83)vs(46.31±39.46)条,P<0.01]而FAK siRNA[(11.83±6.75)vs(42.86±27.63)、(48.32±18.19)条,均P<0.01]转染可明显抑制毛细血管样结构形成。结论:TAE 226处理或FAK siRNA转染可以抑制HUVEC增殖、迁移和诱导细胞凋亡,同时可显著抑制毛细血管样结构的形成,提示FAK可能成为靶向治疗恶性肿瘤的潜在靶点。

二甲双胍对大鼠肺纤维化模型肺组织的影响

目的研究二甲双胍对大鼠肺纤维化模型肺组织中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、轻链蛋白-3(LC3-Ⅱ)表达的影响。方法将健康清洁的24只SD雄性大鼠,随机分为对照组、模型组及实验组,每组8只。模型组及实验组均气管内单次注射博来霉素5 mg·kg^-1建立肺纤维化模型。造模7 d后,对照组和模型组给予0.9%NaCl,实验组给予二甲双胍500 mg·kg^-1,持续21 d。用HE、Masson染色图像半定量评分观察大鼠肺组织炎症及纤维化改变,用酶联免疫吸附法检测肺组织匀浆中AMPK、羟脯氨酸(HYP)及转化生长因子β1(TGF-β1)表达,用免疫组化法检测肺组织中LC3-Ⅱ的表达。结果模型组、对照组和实验组HYP分别为(934.28±29.28),(162.99±14.28),(487.98±31.66)ng·mL^-1,TGF-β1分别为(213.57±24.33),(81.56±10.53),(142.53±14.77)ng·mL^-1,AMPK分别为(55.18±10.64),(42.35±9.00),(78.29±9.90)ng·mL^-1,LC3-Ⅱ分别为127.53±23.43,95.80±5.50,198.33±13.21,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论二甲双胍可减轻肺部炎症、延缓肺纤维化的进展,可能与上调肺组织中AMPK及LC3-Ⅱ有关。