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LncRNA MEG8通过靶向miR-15a-5p调控MICA/B介导结直肠癌细胞免疫逃逸
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作者 李鸷 吴迪 +2 位作者 田飞 刘洁 谢兴明 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1217-1221,1127,共6页
目的:探究长链非编码RNA母系表达基因8(LncRNA MEG8)通过靶向miR-15a-5p调控MHCⅠ类相关蛋白A/B(MICA/B)介导的结直肠癌(CRC)细胞免疫逃逸机制。方法:RT-qPCR、Western blot检测CRC组织和细胞系MEG8、miR-15a-5p、MICA、MICB、NKG2D蛋... 目的:探究长链非编码RNA母系表达基因8(LncRNA MEG8)通过靶向miR-15a-5p调控MHCⅠ类相关蛋白A/B(MICA/B)介导的结直肠癌(CRC)细胞免疫逃逸机制。方法:RT-qPCR、Western blot检测CRC组织和细胞系MEG8、miR-15a-5p、MICA、MICB、NKG2D蛋白水平;双荧光素酶实验验证MEG8对miR-15a-5p的调控关系;采用脂质体转染法将NC、MEG8、miR-NC、miR-15a-5p分别或共转染至SW480、SW620细胞,记为NC组、MEG8组、MEG8+miR-NC组、MEG8+miR-15a-5p组;将NK细胞分别与SW480、SW620细胞共培养;ELISA检测共培养液中TNF-α、IFN-γ水平;CCK-8、EdU染色、Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力;RT-qPCR、Western blot检测细胞MEG8、miR-15a-5p、MICA、MICB、NKG2D蛋白水平。结果:与癌旁组织或正常结肠上皮细胞相比,CRC组织和细胞系中MEG8、MICA、MICB、NKG2D mRNA和蛋白水平降低,miR-15a-5p水平升高(P<0.05)。MEG8靶向调控miR-15a-5p。共培养体系中,与NC组相比,MEG8组细胞MICA、MICB、NKG2D蛋白水平、共培养上清液中TNF-α、IFN-γ水平明显升高,培养1 d、2 d、3 d后,OD值、EdU阳性率、迁移和侵袭细胞数明显降低(P<0.05);过表达miR-15a-5p能部分逆转过表达MEG8对细胞MICA、MICB、NKG2D、TNF-α、IFN-γ水平和增殖、侵袭转移能力的影响(P<0.05)。结论:MEG8通过靶向miR-15a-5p调控MICA、MICB表达,促进NK细胞活性,抑制CRC细胞免疫逃逸。 展开更多
关键词 长链非编码RNA母系表达基因8 miR-15a-5p 结直肠癌 免疫逃逸 MHCⅠ类相关蛋白A/B
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LncRNA MYLK-AS1调节miR-141-3p/STMN1轴对胃癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响
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作者 刘洁 谢兴明 +1 位作者 钮洪霞 杨先智 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期276-282,共7页
目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)肌球蛋白轻链激酶反义RNA1(myosin light chain kinase antisense RNA1,MYLK-AS1)调节miR-141-3p/微管不稳定蛋白1(stathmin 1,STMN1)轴对胃癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:将H... 目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)肌球蛋白轻链激酶反义RNA1(myosin light chain kinase antisense RNA1,MYLK-AS1)调节miR-141-3p/微管不稳定蛋白1(stathmin 1,STMN1)轴对胃癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:将HGC27细胞分为NC组、si-NC组、si-MYLK-AS1组、si-MYLK-AS1+inhibitor NC组、si-MYLK-AS1+miR-141-3p inhibitor组。双萤光素酶报告基因实验检测LncRNA MYLK-AS1、miR-141-3p、STMN1的关系;qRT-PCR检测HGC27细胞中LncRNA MYLK-AS1、miR-141-3p表达;CCK-8法检测HGC27细胞增殖情况;流式细胞术检测HGC27细胞凋亡;使用Transwell实验评估了HGC27细胞的侵袭和迁移能力,并统计了穿透基质膜的细胞数量;同时采用Western blot技术检测了HGC27细胞中STMN1、E-cadherin、Vimentin及N-cadherin这几种蛋白表达量的变化。结果:HGC27细胞中LncRNA MYLK-AS1、STMN1水平高于GES-1细胞(P<0.05),miR-141-3p水平低于GES-1细胞(P<0.05)。si-MYLK-AS1组HGC27细胞A_(450 nm)值、迁移、侵袭细胞数量、LncRNA MYLK-AS1表达量、STMN1、N-cadherin、Vimentin蛋白水平低于NC组、si-NC组(P<0.05),HGC27细胞凋亡率、miR-141-3p表达量、E-cadherin蛋白水平高于NC组、si-NC组(P<0.05);而miR-141-3p低表达减弱了沉默LncRNA MYLK-AS1抑制HGC27细胞发展的作用;LncRNA MYLK-AS1靶向调节miR-141-3p/STMN1轴。结论:LncRNA MYLK-AS1可能通过上调microRNA-141-3p的表达水平,间接导致STMN1基因表达受到抑制,这一过程可能对胃癌细胞的增殖、凋亡及侵袭特性产生明显影响。 展开更多
关键词 长链非编码RNA肌球蛋白轻链激酶反义RNA1 微小RNA-141-3p/微管不稳定蛋白1轴 胃癌 增殖 凋亡 侵袭
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加速康复外科在结直肠癌手术中的效果评价及影响因素分析 被引量:1
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作者 唐岱 黄永生 《中国社区医师》 2019年第25期32-32,34,共2页
目的:分析将加速康复外科(ERAS)理念应用到结直肠癌手术治疗中所取得的效果与影响因素。方法:收治进行手术的结直肠癌患者40例,根据围术期所采取的处理措施不同分为常规组和加速康复外科组(ERAS组)。观察分析两组患者的苏醒时间、肠道... 目的:分析将加速康复外科(ERAS)理念应用到结直肠癌手术治疗中所取得的效果与影响因素。方法:收治进行手术的结直肠癌患者40例,根据围术期所采取的处理措施不同分为常规组和加速康复外科组(ERAS组)。观察分析两组患者的苏醒时间、肠道功能恢复时间、术后排气时间、术后发并发症发生情况。结果:两组均顺利完成手术。ERAS组患者的拔管时间、肠道功能恢复时间、术后排气时间、住院时间均明显短于常规组,且术后并发症发生率低于常规组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:将ERAS理念应用到结直肠癌手术中能够减轻患者的心理负担,降低治疗费用,缩短术后恢复时间、提升手术效果,具有极高的临床应用价值。 展开更多
关键词 加速康复外科 结直肠癌手 围术期 影响因素
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腹腔镜对粘连性肠梗阻患者胃肠功能的影响分析
4
作者 郭令飞 王灿 《中国医学工程》 2021年第7期98-100,共3页
目的研究腹腔镜对粘连性肠梗阻患者胃肠功能的影响。方法选取2017年6月至2019年10月在遵义市第一人民医院治疗的78例粘连性肠梗阻患者,采用随机数字表法分为对照组和观察组,每组39例。对照组采用传统开腹肠粘连松解术,观察组采用腹腔镜... 目的研究腹腔镜对粘连性肠梗阻患者胃肠功能的影响。方法选取2017年6月至2019年10月在遵义市第一人民医院治疗的78例粘连性肠梗阻患者,采用随机数字表法分为对照组和观察组,每组39例。对照组采用传统开腹肠粘连松解术,观察组采用腹腔镜下肠粘连松解术。比较两组手术指标、术后前白蛋白(PA)、降钙素原(PCT)水平及并发症发生率情况。结果观察组各项手术指标和术后血清PA、PCT水平优于对照组(P<0.05)。观察组术后并发症总发生率少于对照组(P<0.05)。结论腹腔镜下肠粘连松解术相对于传统开腹肠粘连松解术,缩短了手术时间、减少了术中出血量,加速了患者术后肠胃恢复功能时间和排气时间,降低了术后并发症的发生,值得临床推广应用。 展开更多
关键词 粘连性肠梗阻 腹腔镜 肠粘连松解术 疗效比较研究
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伤口造口失禁患者多学科团队的干预效果 被引量:10
5
作者 夏澜 杨平 +2 位作者 江湖 向瑞萍 蒲亨萍 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2019年第2期347-349,共3页
目的探讨伤口造口失禁患者多学科团队(MDT)的干预效果。方法选取伤口造口失禁患者,随机均分为实验组和对照组,实验组给予MDT干预,对照组给予常规护理。观察两组患者慢性伤口愈合度、压力性溃疡情况、疼痛情况、治疗满意度和生存质量。... 目的探讨伤口造口失禁患者多学科团队(MDT)的干预效果。方法选取伤口造口失禁患者,随机均分为实验组和对照组,实验组给予MDT干预,对照组给予常规护理。观察两组患者慢性伤口愈合度、压力性溃疡情况、疼痛情况、治疗满意度和生存质量。结果实验组慢性伤口愈合度、压力性溃疡情况和疼痛情况均显著优于对照组(均P<0. 05);实验组治疗效果评分、服务态度评分、医患沟通评分和总分显著高于对照组(均P<0. 05),在医疗技术评分上两组比较差异无统计学意义(P>0. 05);实验组生理、心理领域得分和总分显著高于对照组(均P<0. 05),两组社会和环境领域得分差异无统计学意义(P>0. 05)。结论 MDT干预在伤口造口失禁患者的应用能有效提高患者预后。 展开更多
关键词 专科护士 伤口造口失禁 多学科协作
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老年上消化道穿孔术后早期肠内营养与肠外营养的临床效果比较 被引量:19
6
作者 葛华 何学彦 黄永生 《安徽医药》 CAS 2018年第12期2379-2382,共4页
目的探讨老年上消化道穿孔术后早期肠内营养对患者恢复的影响。方法将60例老年上消化道穿孔的患者根据其术后不同的营养方式随机分为两组,观察组30例术后给予早期肠内营养支持,对照组30例术后按传统治疗方案给予全肠外营养。对比分析两... 目的探讨老年上消化道穿孔术后早期肠内营养对患者恢复的影响。方法将60例老年上消化道穿孔的患者根据其术后不同的营养方式随机分为两组,观察组30例术后给予早期肠内营养支持,对照组30例术后按传统治疗方案给予全肠外营养。对比分析两组患者术前及术后第3、7天患者胃肠道功能恢复的情况、住院时间、住院费用、术后并发症的发生率、营养和免疫状况等。结果术前两组患者的体质量、体质量指数、总蛋白、前白蛋白以及白蛋白水平均差异无统计学意义(P>0. 05);术后第3、7天上述各指标两组均出现下降,其中术后第3天观察组体质量、总白蛋白水平高于对照组,术后第7天各项营养指标在对照组与观察组均差异有统计学意义(P <0. 05);术前两组患者的C3、C4、IgG水平均无差异无统计学意义(P>0. 05);术后第3天上述各指标与术前相比两组均出现下降,Ig G水平在对照组术后第7天仍低于术前;组间比较发现补体C4和IgG水平在术后第3天观察组恢复较好,且术后第7天各免疫指标观察组恢复情况优于对照组(P <0. 05);观察组患者在术后感染性并发症、死亡率、腹胀等与对照组相比差异无统计学意义;术后首次肛门排气时间、住院时间和住院总费用观察组均短于或低于对照组,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论老年上消化道穿孔术后早期肠内营养能加速术后肠道功能的恢复,提高营养状况和免疫功能,缩短术后住院时间,降低住院费用,具备较高的安全性、有效性,有着良好的临床应用价值和前景。 展开更多
关键词 老年 上消化道穿孔 肠内营养 肠外营养
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14-3-3σ和Claudin-5在结直肠癌中的表达及临床意义 被引量:1
7
作者 葛华 裴海平 +1 位作者 蒋锐 曾亮 《贵州医药》 CAS 2012年第10期865-868,共4页
目的探讨14-3-3σ和Claudin-5蛋白在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学染色方法检测14-3-3σ和Claudin-5在50例结直肠癌组织中的表达情况,结合其临床病理学资料,分析它们之间的相关性。结果14-3-3σ在对照组和肿瘤... 目的探讨14-3-3σ和Claudin-5蛋白在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学染色方法检测14-3-3σ和Claudin-5在50例结直肠癌组织中的表达情况,结合其临床病理学资料,分析它们之间的相关性。结果14-3-3σ在对照组和肿瘤组中的阳性表达率分别为10%和58%,差异有统计学意义(P<0.001);Claudin-5在对照组和肿瘤组中的阳性表达率分别为82%和68%,差异无统计学意义(P>0.05);结直肠癌组织中14-3-3σ与Claudin-5表达无明显相关(P>0.05)。14-3-3σ表达与年龄、肿瘤大小、淋巴结转移(均P<0.05)有关,而与性别、分化程度、浆膜浸润无关(均P>0.05);Claudin-5表达与淋巴结转移有关(P<0.05),与性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、浆膜浸润无关(均P>0.05)。结论14-3-3σ和Claudin-5蛋白在结直肠癌中表达明显增高,这两种蛋白均与结直肠癌淋巴结转移关系密切。 展开更多
关键词 结直肠癌 14-3-3σ CLAUDIN-5 免疫组织化学
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造瘘口扩张护理预防直肠癌根治术后造瘘口并发症的疗效研究 被引量:7
8
作者 赵音 《中国社区医师》 2016年第9期146-147,共2页
目的:观察造瘘口扩张护理防治直肠癌根治术后造瘘口并发症的疗效,总结其护理方法。方法:收治直肠癌造瘘术后患者120例,随机平分为两组。对照组采用常规护理,观察组在对照组的基础上加用造瘘口扩张护理。观察、比较两组患者造瘘口并发症... 目的:观察造瘘口扩张护理防治直肠癌根治术后造瘘口并发症的疗效,总结其护理方法。方法:收治直肠癌造瘘术后患者120例,随机平分为两组。对照组采用常规护理,观察组在对照组的基础上加用造瘘口扩张护理。观察、比较两组患者造瘘口并发症发生情况。结果:观察组造瘘口周围炎发生率及总体并发症发生率明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:采用造瘘口扩张护理方法可以有效降低直肠癌根治术后造瘘口并发症的发生率。 展开更多
关键词 直肠癌 造瘘口 并发症 护理
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疼痛护理干预在胃癌根治术患者中的应用效果分析 被引量:2
9
作者 夏澜 《内蒙古中医药》 2013年第36期F0002-F0002,共1页
目的:分析对胃癌根治术患者进行术后疼痛护理干预的应用疗效。方法:将需进行胃癌根治术的88例患者随机分成干预组与对照组,各44人。对照组进行胃癌术后的本院常规护理,干预组进行常规护理基础上的疼痛的护理干预。对两个组术后疼痛程度... 目的:分析对胃癌根治术患者进行术后疼痛护理干预的应用疗效。方法:将需进行胃癌根治术的88例患者随机分成干预组与对照组,各44人。对照组进行胃癌术后的本院常规护理,干预组进行常规护理基础上的疼痛的护理干预。对两个组术后疼痛程度、术后的睡眠时间、芬太尼的使用量、术后至出院下床活动时间长度进行比较。结果:干预组术后12h、24h、72h段的疼痛评分比对照组低,统计学意义显著(P<0.05);干预组术后的睡眠时间、芬太尼的使用量、术后至出院下床活动时间长度等恢复情况较常规组好,有统计学意义(P<0.05)。结论:对胃癌根治术患者的围手术期的疼痛干预,在缓解疼痛同时,也有助于患者的身体机能的恢复。 展开更多
关键词 疼痛护理 胃癌根治术 应用效果
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miR-299-5p靶向RRS1调控胃癌细胞增殖、凋亡的分子机制 被引量:2
10
作者 郭令飞 罗德红 +1 位作者 葛华 王灿 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2020年第17期3763-3767,共5页
目的探讨微小RNA-299-5p(miRNA-299-5p)对胃癌细胞增殖、凋亡的影响及其可能作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测不同胃癌细胞株(BGC-823、MKN45、MGC803)及正常胃上皮GES-1细胞中miRNA-299-5p、核糖体合成调控因子(RR... 目的探讨微小RNA-299-5p(miRNA-299-5p)对胃癌细胞增殖、凋亡的影响及其可能作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测不同胃癌细胞株(BGC-823、MKN45、MGC803)及正常胃上皮GES-1细胞中miRNA-299-5p、核糖体合成调控因子(RRS)1 mRNA表达水平,采用Western印迹法检测RRS1蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因分析法验证miRNA-299-5p与RRS1的靶标关系。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组BGC-823细胞增殖活力;流式细胞术检测各组BGC-823细胞凋亡情况。结果不同胃癌细胞株中miRNA-299-5p表达水平均低于GES-1细胞,而RRS1 mRNA及蛋白表达水平显著高于GES-1细胞(P<0.05)。miRNA-299-5p组GES-1细胞增殖活力显著低于miR-NC组(P<0.05),miRNA-299-5p表达水平及细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与si-NC组相比,si-RRS1组BGC-823细胞增殖活力及RRS1蛋白表达水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05);RRS1是miRNA-299-5p的靶基因;与miR-299-5p+pcDNA组相比,miR-299-5p+pcDNA-RRS1组BGC-823细胞增殖活力显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。结论miRNA-299-5p可抑制胃癌细胞增殖及促进细胞凋亡,其主要通过靶向调控RRS1表达而发挥作用。 展开更多
关键词 微小RNA-299-5p 核糖体合成调控因子1 胃癌 增殖 凋亡
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miR-149靶向调控CARM1基因对直肠癌细胞放疗敏感性 被引量:1
11
作者 郭令飞 罗德红 +1 位作者 葛华 王灿 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2020年第15期3319-3323,共5页
目的研究miR-149对直肠癌细胞活性、凋亡及辐照敏感性的影响及作用机制。方法运用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人结直肠上皮细胞HCEpiC、直肠癌细胞HT29中miR-149的表达;将miR-con组(转染miR-con)、miR-149组(转染miR-149 mim... 目的研究miR-149对直肠癌细胞活性、凋亡及辐照敏感性的影响及作用机制。方法运用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人结直肠上皮细胞HCEpiC、直肠癌细胞HT29中miR-149的表达;将miR-con组(转染miR-con)、miR-149组(转染miR-149 mimics)、miR-149+pcDNA组(共转染miR-149 mimics和pcDNA)、miR-149+pcDNA-共激活相关精氨酸甲基转移酶(CARM)1(共转染miR-149 mimics和pcDNA-CARM1)、IR+miR-con组(转染miR-con)、IR+miR-149组(转染miR-149 mimics)、IR+miR-149+pcDNA组(共转染miR-149 mimics和pcDNA)、IR+miR-149+pcDNA-CARM1(共转染miR-149 mimics和pcDNA-CARM1)均用脂质体法转染至HT29细胞,各IR组再进行4 Gy照射;噻唑盐(MTT)法检测各组细胞的活性;Western印迹检测各组细胞中CARM1、B细胞淋巴瘤(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;克隆形成试验检测各组细胞的存活分数;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与人结直肠上皮细胞HCEpiC组相比,直肠癌细胞HT29中miR-149表达明显下调,CARM1表达明显上调(P<0.05);过表达CARM1可逆转过表达miR-149对HT29细胞的活性抑制,凋亡促进及辐照增敏作用。miR-149可抑制野生型CARM1细胞的荧光活性,又可负向调控CARM1的蛋白表达。结论miR-149可抑制直肠癌细胞的活性,促进细胞凋亡,增强其对放射治疗的敏感性,其机制可能与靶向CARM1有关。 展开更多
关键词 miR-149 共激活相关精氨酸甲基转移酶(CARM)1 直肠癌 放射敏感性
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腹腔镜辅助胃癌根治术在胃癌手术治疗中的应用效果分析 被引量:2
12
作者 唐岱 刘洁 《中国社区医师》 2019年第28期44-44,47,共2页
目的:探讨腹腔镜辅助胃癌根治术在胃癌手术治疗中的应用效果。方法:收治胃癌手术患者20例,随机分为两组各10例。试验组采用腹腔镜辅助胃癌根治术治疗,对照组采用单一胃癌根治术治疗。比较两组手术时间、术中出血量、术后住院时间。结果... 目的:探讨腹腔镜辅助胃癌根治术在胃癌手术治疗中的应用效果。方法:收治胃癌手术患者20例,随机分为两组各10例。试验组采用腹腔镜辅助胃癌根治术治疗,对照组采用单一胃癌根治术治疗。比较两组手术时间、术中出血量、术后住院时间。结果:试验组手术时间、术后住院时间明显短于对照组,术中出血量明显少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在胃癌手术治疗中采用腹腔镜辅助胃癌根治术,有利于胃癌患者的手术治疗过程,有助于提高患者的治疗效果。 展开更多
关键词 胃癌 胃癌根治手术 腹腔镜 治疗
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结直肠癌骨转移风险临床预测模型的建立及意义
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作者 葛华 黄永生 田飞 《中国科技期刊数据库 医药》 2022年第5期15-18,共4页
临床上,结直肠癌骨转移的患者治疗效果不佳,有着较差的预后。方法:本次研究,我们检索了2004年至2015年美国监测、流行病学及预后(Surveillance, Epidemiology, and End Results,SEER)数据库中结直肠癌患者的信息,从中提取了患者的TNM分... 临床上,结直肠癌骨转移的患者治疗效果不佳,有着较差的预后。方法:本次研究,我们检索了2004年至2015年美国监测、流行病学及预后(Surveillance, Epidemiology, and End Results,SEER)数据库中结直肠癌患者的信息,从中提取了患者的TNM分期、转移部位、婚姻状态、是否手术治疗以及生存时间等信息。利用COX回归分析来研究相关的预后因素,并建立了包括人口统计学和临床病理学因素的列线图,以预测结直肠癌骨转移患者12和24个月的生存率。结果:患者年龄,性别,种族,肿瘤部位,肿瘤分级,T和N分期,脑、肺、肝是否转移,婚姻状态,是否接受手术等是建立列线图的重要变量。结论:由上述变量整合并创建的结直肠癌骨转移临床预测模型具备一定的临床实践意义,并可为结直肠癌患者的个体化随诊计划提供了一个新的方向。 展开更多
关键词 结直肠癌 骨转移 预测模型 SEER
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长链非编码RNA THAP7-AS1通过调控METTL3介导的m^(6)A修饰影响胃癌细胞的糖酵解
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作者 邓志龙 杨先模 +2 位作者 王灿 苏弦 郭令飞 《肿瘤》 CAS 北大核心 2023年第10期781-798,共18页
目的:探究长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)THAP7-AS1通过影响甲基转移酶样3(methyltransferase like protein 3,METTL3)介导的N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m^(6)A)修饰调控胃癌(gastric cancer,GC)细胞糖酵解的机制。方... 目的:探究长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)THAP7-AS1通过影响甲基转移酶样3(methyltransferase like protein 3,METTL3)介导的N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m^(6)A)修饰调控胃癌(gastric cancer,GC)细胞糖酵解的机制。方法:利用Gene Expression Profiling Interactive Analysis(GEPIA)数据库分析THAP7-AS1和METTL3 mRNA在GC组织中的表达水平及其与患者预后的关系;对遵义医科大学附属第三医院(遵义市第一人民医院)胃肠外科收集的80例GC患者的肿瘤组织及癌旁组织标本进行实时荧光定量PCR和蛋白印迹检测以验证GC组织中THAP7-AS1、METTL3 mRNA、GLUT1 mRNA和METTL3蛋白的表达水平,并分析THAP7-AS1的表达水平与患者临床病理特征间的关系;采用实时荧光定量PCR和蛋白印迹法在GES-1、BGC-823和SGC-7901细胞中验证THAP7-AS1、METTL3 mRNA、GLUT1 mRNA和METTL3蛋白的表达水平。通过慢病毒转染法敲减THAP7-AS1或过表达METTL3,并采用实时荧光定量PCR和蛋白印迹法检测不同处理对GC细胞METTL3 mRNA、GLUT1 mRNA和METTL3蛋白表达水平的影响;采用比色法和RNA甲基化免疫共沉淀(methylated RNA immunoprecipitation,MeRIP)-定量PCR(quantitative PCR,qPCR)法分别检测不同处理对GC细胞总RNA的m^(6)A修饰水平和GLUT1的m^(6)A修饰水平的影响;用糖酵解压力测试试剂盒检测不同处理对GC细胞的细胞外酸化率(extracellular acidification rate,ECAR)、葡萄糖摄取量和乳酸产量的影响;采用蛋白印迹法检测不同处理对GC细胞中METTL3、GLUT1、PKM2和LDHA蛋白表达水平的影响;采用EdU染色、细胞划痕实验和Transwell小室实验检测不同处理对GC细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响。最后构建裸鼠GC皮下移植瘤模型,通过检测移植瘤的体积、质量、肿瘤组织中THAP7-AS1及METTL3和GLUT1蛋白的表达水平来分析敲减THAP7-AS1表达对GC移植瘤生长的影响。结果:GEPIA数据库分析结果显示GC组织中THAP7-AS1和METTL3的表达水平高于正常胃组织,且THAP7-AS1和METTL3表达水平与患者的总生存期呈负相关(P<0.05);与癌旁组织(或正常胃粘膜上皮细胞)相比,GC组织(或GC细胞)中THAP7-AS1、METTL3 mRNA、GLUT1 mRNA和METTL3蛋白的表达水平显著升高,且THAP7-AS1的表达水平越高,GC患者的TNM分期越高、肿瘤分化程度越低、微血管越容易浸润且越容易发生淋巴结转移(P<0.05)。降低THAP7-AS1表达后,GC细胞中的METTL3 mRNA、GLUT1 mRNA和METTL3蛋白表达水平降低;总RNA和GLUT1的m^(6)A修饰水平降低;ECAR水平、葡萄糖摄取量及乳酸生成量降低;细胞EdU阳性率及划痕愈合率降低且侵袭细胞数减少;METTL3和糖酵解相关蛋白(GLUT1、PKM2和LDHA)的表达水平降低;而过表达METTL3可部分逆转低表达THAP7-AS1对GC细胞产生的这些影响(P<0.05)。在体内模型中,降低THAP7-AS1表达能显著抑制小鼠移植瘤的生长(P<0.05)。结论:lncRNA THAP7-AS1通过影响METTL3介导的m^(6)A修饰来调控GC细胞的糖酵解水平,进而影响GC细胞的增殖、迁移及侵袭。 展开更多
关键词 胃癌 THAP7-AS1 甲基转移酶样3 N6-甲基腺嘌呤 糖酵解 葡萄糖转运蛋白1
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