长链非编码RNA BCYRN1通过激活Wnt信号通路促进卵巢癌增殖和转移的实验研究

目的 探讨长链非编码RNA脑细胞质RNA1(lncRNABCYRN1)通过激活Wnt信号通路促进卵巢癌细胞体外及体内增殖和转移的作用。方法 体外培养人卵巢癌SKOV3细胞和腹水瘤亚系SKOV3.ip1细胞(Blank组),采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测BCYRN1表达水平。分别向SKOV3.ip1细胞转染BCYRN1-siRNA和阴性对照序列作为BCYRN1-siRNA组和NC-siRNA组。采用CCK-8法、Transwell小室法和划痕实验检测各组细胞增殖、侵袭和迁移活性。采用Westernblotting法检测β-catenin、Wnt1、c-myc、CyclinD1、APC蛋白表达水平。将SKOV3细胞或SKOV3.ip1细胞接种于裸鼠皮下,观察成瘤情况和肿瘤体积;实验结束,处死裸鼠,称重其肿瘤组织,观察其肝脏。结果 SKOV3.ip1细胞BCYRN1表达水平为1.38±0.20,高于SKOV3细胞(P<0.05)。BCYRN1-siRNA组BCYRN1表达水平为0.43±0.07,低于Blank组和NC-siRNA组,差异有统计学意义(P<0.05)。转染6、12、24、48和72h后,BCYRN1-siRNA组吸光值(A)分别为0.140±0.027、0.351±0.038、0.548±0.072、0.795±0.103和0.927±0.154,低于Blank组和NC-siRNA组。BCYRN1-siRNA组侵袭细胞数为132±28,迁移细胞数为238±61,48h划痕愈合率为(45.63±7.12)%,均低于Blank组和NC-siRNA组(P<0.05)。BCYRN1-siRNA组β-catenin、Wnt1、c-Myc、CyclinD1和APC蛋白表达水平分别为0.85±0.17、0.92±0.25、1.10±0.21、0.95±0.20和1.04±0.13,低于Blank组和NC-siRNA组(P<0.05)。BCYRN1-siRNA组裸鼠平均瘤体质量为(0.71±0.25)g,低于Blank组(P<0.05),且未见肝转移。结论 BCYRN1在具有高侵袭活性的SKOV3.ip1细胞中表达上调,可通过异常激活Wnt/β-catenin信号,增加卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移的活性。

微小RNA-3677靶向调控B细胞易位基因1表达及对肝细胞癌细胞侵袭迁移的影响

目的探讨微小RNA-3677(miR-3677)对B细胞易位基因1(BTG1)的靶向调控作用及肝细胞癌(HCC)细胞HepG2侵袭和迁移的影响。方法采用脂质体Lipofectamine 2000向HepG2细胞转染miR-3677抑制剂(Inhibitor组)和阴性对照序列(NC组)并以未行转染的细胞为对照组,采用实时定量PCR(QPCR)检测miR-3677水平,划痕实验和Transwell实验分别检测划痕宽度和穿膜细胞数目,双荧光素酶报告基因实验验证miR-3677与BTG1的靶向关系,QPCR检测BTG1、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和信号转导和转录激活因子3(STAT3)的mRNA水平,Western blotting检测BTG1、MMP-9、STAT3和磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)的蛋白水平。结果QPCR结果显示Inhibitor组的miR-3677水平为0.241±0.059,低于对照组的1.012±0.123和NC组的1.147±0.168(P<0.05);Inhibitor组的穿膜细胞数和划痕相对宽度分别为(96.5±9.2)个和(62.15±3.29)%,均优于对照组的(174.5±12.9)个和(37.45±2.16)%及NC组的(181.6±16.4)个和(39.47±2.82)%,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-3677模拟物抑制了BTG1野生型3′端非翻译区的荧光素酶活性,而对突变型的无影响。与其余两组相比,Inhibitor组的BTG1表达水平升高,而MMP9和p-STAT3的水平降低(P<0.05)。结论下调miR-3677水平可抑制HCC细胞的迁移侵袭,该miRNA发挥癌基因的作用,可能与通过靶向BTG1以激活JAK/STAT3信号传导有关,为HCC提供一个新的潜在治疗靶点。