胃癌组织微小RNA-181d-5p和三基序蛋白22表达与患者术后5年内生存相关性研究

目的:探讨胃癌组织微小RNA-181d-5p(miR-181d-5p)和三基序蛋白22(TRIM22)表达与患者术后5年内生存的关系。方法:收集110例胃癌患者(均是胃腺癌)术中切除的胃癌组织标本及癌旁组织标本。荧光定量PCR和免疫组织化学法分别检测miR-181d-5p和TRIM22蛋白表达。患者术后随访5年,记录生存情况。Starbase数据库预测miR-181d-5p与TRIM22结合位点,并验证miR-181d-5p与TRIM22的靶向关系。比较癌旁和胃癌组织miR-181d-5p、TRIM22表达,不同临床病理特征患者胃癌组织miR-181d-5p、TRIM22表达差异。分析胃癌组织miR-181d-5p、TRIM22表达与患者预后的关系,胃癌患者预后的影响因素,以及胃癌组织miR-181d-5p与TRIM22及它们与不同临床病理特征的相关性。结果:与癌旁组织比较,胃癌组织miR-181d-5p表达升高,TRIM22阳性率降低(均P<0.05)。肿瘤低分化、肌层或外膜浸润、有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ期在miR-181d-5p高表达和TRIM22阴性表达患者中的比例分别高于肿瘤高分化、黏膜或膜下层浸润、无淋巴结转移、TNM分期Ⅰ-Ⅱ期(均P<0.05)。miR-181d-5p与TRIM22具有靶向结合位点,miR-181d-5p可负向调控TRIM22表达。miR-181d-5p高表达和TRIM22阴性表达患者5年总生存率分别低于miR-181d-5p低表达和TRIM22阳性表达患者(均P<0.05)。影响胃癌患者术后5年内生存的独立危险因素有miR-181d-5p高表达、TRIM22阴性表达、肿瘤低分化、肌层或外膜浸润、有淋巴结转移和TNM分期Ⅲ期(均P<0.05)。胃癌组织miR-181d-5p与TRIM22、肿瘤分化程度呈负相关,与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期呈正相关(均P<0.05);TRIM22与肿瘤分化程度呈正相关,与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期呈负相关(均P<0.05)。结论:胃癌组织miR-181d-5p表达升高,TRIM22阳性率降低,两者与患者临床病理特征和术后5年内生存有密切关系。

KLF5在结肠癌组织中表达的意义及与肿瘤侵袭转移的关系

目的检测转录调控因子(Kr(u|¨)ppel-like factors 5,KLF5)蛋白、金属基质蛋白酶2(metalloproteincoe,MMP2)、MMP-9、基质金属蛋白酶组织抑制因子1(tissue inhibitor ofmatrixmetalloproteinase-1,TIMP-1)在结肠癌组织中的表达情况,并分析KLF5蛋白与结肠癌临床病理特征的关系。方法免疫组织化学染色检测48例结肠癌组织及30例癌旁组织中KLF5、MMP-2、MMP-9、TIMP-1的表达情况,分析其关系;记录结肠癌各项临床病理资料,分析KLF5与结肠癌临床病理特征的关系。结果结肠癌组织中KLF5、MMP-2、MMP-9表达均高于癌旁组织(P<0.05),TIMP-1在癌旁组织中表达强于原发肿瘤组织(P<0.05)。KLF5表达与肿瘤浸润深度、临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。结肠癌肿瘤组织中KLF5与MMP-2、KLF5与MMP-9、MMP-2与MMP-9之间表达均存在正相关关系(r_s=0.387、0.447、0.519,P<0.05),MMP-9与TIMP-1表达存在负相关关系(r_s=-0.322,P<0.05);KLF5与TIMP-1之间、MMP-2与TIMP-1之间无明显相关关系(r_s=0.218、0.261,P>0.05)。结论结肠癌组织中KLF5蛋白表达上调,该蛋白与部分临床病理特征有关,其机制与KLF5蛋白可能调节MMP-2、MMP-9而促进肿瘤侵袭转移有关。

结肠癌中KLF5表达与Cyclin D1和PCNA及P53的关系及意义

目的通过检测转录因子KLF5蛋白和细胞周期素D1(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、P53蛋白在结肠癌组织中的表达,对KLF5在结肠癌细胞增殖过程中的意义进行探讨。方法对48例结肠癌和30例癌旁组织石蜡标本进行免疫组化染色,检测KLF5与Cyclin D1、PCNA、P53在两种组织中的表达情况,并分析其关系。结果结肠癌组织中KLF5、Cyclin D1、PCNA表达均强于癌旁组织(均P<0.05),P53在两种组织中表达无明显差异(P>0.05)。相关分析显示,结肠癌组织中KLF5与Cyclin D1之间、KLF5与P53之间表达存在正相关关系(P均<0.05);Cyclin D1与PCNA表达也存在正相关关系(P<0.05),Cyclin D1与P53、PCNA与P53之间表达均无明显相关关系(P>0.05)。结论结肠癌组织中KLF5表达上调,这与KLF5可能通过调节CyclinD1、P53表达而参与结肠癌细胞增殖有关。

胃癌组织中AEG-1的表达及与临床病理特征的关系研究

目的检测胃癌组织中星形细胞上调基因-1(AEG-1)的表达情况,并分析其与肿瘤临床病理特征的关系及意义。方法对45例胃癌组织及癌旁组织进行AEG-1、P53、增殖细胞核抗原(PCNA)进行免疫组化染色,并分析结果与临床病理特征的关系。结果胃癌组织中AEG-1、P53、PCNA表达均明显高于癌旁组织(P<0.05),且AEG-1与P53、AEG-1与PCNA表达均存在正相关关系(r值分别为0.3286、0.3063,P<0.05)。AEG-1表达与肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。结论 AEG-1在胃癌组织中高表达,该蛋白可能通过调控P53、PCNA表达而促进胃癌的发生和进展。

AEG-1与ICAM-1、MMP-2、MMP-9在胃癌组织中的表达及意义

目的探讨星形细胞上调基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-Ⅰ)、细胞间黏附因子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)和基质金属蛋白酶(MMPs)在胃癌组织中的表达及意义。方法对胃癌和癌旁组织标本45例进行免疫组织化学染色,检测AEG-1与ICAM-1、MMP-2、MMP-9在2种组织中的表达。结果胃癌组织中AEG-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-9阳性表达率分别为77.8%、62.2%、73.3%、71.1%,癌旁组织中分别为26.7%、77.8%、35.6%、37.8%,AEG-1、MMP-2、MMP-9在胃癌组织中阳性表达均比癌旁组织高(P<0.01);而ICAM-1在胃癌组织中阳性表达率表达低于癌旁组织(P<0.05)。相关分析显示,AEG-1与MMP-2、MMP-9表达呈正相关(r=0.379 2、0.485 3,P<0.05);ICAM-1与MMP-2表达呈负相关(r=-0.297 6,P<0.05)。结论 AEG-1在胃癌组织中过表达,其可能通过调节MMP-2、MMP-9表达而增强胃癌细胞的侵袭黏附能力,促进胃癌的侵袭进展。

AEG-1在胃癌组织中的表达及与肿瘤多药耐药性的关系

目的检测星形细胞上调基因1(astrocyteelevatedgene-1,AEG-1)的表达强度与胃癌细胞体外化疗药敏性的关系,并分析AEG-1可能参与胃癌多药耐药性的机制。方法取58例胃癌患者的组织标本,一份应用四甲基偶氮唑盐(four methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测肿瘤细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)、顺铂(cisplatin,DDP)、紫杉醇(taxol,PTX)、表阿霉素(epirubicin,eADM)、奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)的体外敏感性;另一份用免疫组织化学技术检测多药耐药相关基因AEG-1与P-糖蛋白(p-glycoprotein,P-gP)、谷胱甘肽-S-转移酶π(glutathione-S-transferase-π,GST-π)、生存素(Survivin)、Bcl-2的蛋白表达。结果胃癌组织中AEG-1阳性表达率为81.03%(47/58),强表达率为55.17%(32/58);AEG-1强表达组对5-FU、DDP、L-OHP具有更强的耐药性(P<0.05),而PTX、eADM对肿瘤细胞的抑制率在2组间差异无统计学意义(P>0.05);相关分析显示,AEG-1与P-gP、AEG-1与Survivin具有正相关性(r=0.305、0.413,P<0.05),AEG-1与GST-π、Bcl-2表达无明显相关关系(r_s=0.225、0.138,P>0.05)。结论 AEG-1与胃癌的MDR有关,其机制可能在于AEG-1能调节P-gp、Survivin的表达。

Eph-Ephrin信号通路双向调节功能与胃癌的研究进展

Eph受体亦称之为促红细胞生成素产生的肝细胞受体,其属于受体酪氨酸激酶家族成员,通过一种双信号传导模式与其配体Ephrins结合,调节细胞粘附、转移和血管生成等过程。新近研究表明,Eph受体与其配体Ephrin参与多种肿瘤的生长、侵袭和转移过程。因此,关于Eph受体与其配体Ephri与胃癌发生发展的相关研究会有助于深入理解胃癌的机制,并有助于寻找抗癌治疗靶点。本文将就目前关于Eph受体和其配体与胃癌相关的研究进行系统综述。

基因组学研究揭示癌变细胞进化过程

在世界范围内,临床上七分之一死亡病例是由于罹患癌症.而在西方社会,这一比例更是高达三分之一.很早之前,人们就知道吸烟会导致肺癌,日照会诱发皮肤癌.但是,对于癌变发生的机制和细节,却知之甚少.今年五月,在以破译人类基因组测序三分之一序列著称的英国桑格研究所（Wellcome Trust Sanger Institute）,斯特拉顿（Mike Stratton）教授领导的研究小组,通过对乳腺癌患者基因组进行研究,从体细胞变异的角度,阐释了癌变发生的详细过程,并找出了诱发癌变的关键基因.同期,以我国华大基因研究院为主的科院团队,也通过对单个癌细胞进行基因测序,揭示了肾癌、骨髓瘤的癌细胞进化过程,表明了癌症个体化医疗的重要性.

五味子甲素调控miR-873-5p/G6PD轴对胃癌SGC-7901细胞活力、凋亡及有氧糖酵解的影响

目的:探究五味子甲素调控微小RNA-873-5p(miR-873-5p)/葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)轴对胃癌SGC-7901细胞活力、凋亡及有氧糖酵解的影响。方法:将胃癌SGC-7901细胞分成SGC-7901组、低浓度五味子甲素组、高浓度五味子甲素组、高浓度五味子甲素+空载质粒组、高浓度五味子甲素+miR-873-5p沉默组。各组给予相应药物干预及转染,培养48 h。细胞计数试剂盒-8和流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡率;试剂盒检测葡萄糖消耗、乳酸产生以及三磷酸腺苷(ATP)生成;实时荧光定量PCR法检测miR-873-5p和G6PD mRNA表达;蛋白印迹法检测G6PD及凋亡相关蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测miR-873-5p与G6PD的靶向关系。结果:与SGC-7901组比较,低、高浓度五味子甲素组细胞活力、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白、葡萄糖消耗、乳酸产生、ATP生成相对水平、G6PD mRNA和蛋白水平显著降低,细胞凋亡率、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3)蛋白、miR-873-5p水平显著升高(P<0.05);高浓度五味子甲素组细胞活力、Bcl-2蛋白、葡萄糖消耗、乳酸产生、ATP生成相对水平、G6PD mRNA和蛋白水平显著低于低浓度五味子甲素组,细胞凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3蛋白、miR-873-5p水平显著高于低浓度五味子甲素组(P<0.05);与高浓度五味子甲素组和高浓度五味子甲素+空载质粒组比较,高浓度五味子甲素+miR-873-5p沉默组细胞活力、Bcl-2蛋白、葡萄糖消耗、乳酸产生、ATP生成相对水平、G6PD mRNA和蛋白水平显著升高,细胞凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3蛋白、miR-873-5p水平显著降低(P<0.05);miR-873-5p可靶向调控G6PD的表达。结论:五味子甲素可通过上调miR-873-5p来靶向下调G6PD表达,从而抑制胃癌SGC-7901细胞活力和有氧糖酵解,促进其凋亡。

人类表皮生长因子受体-2单链抗体抑制高表达人类表皮生长因子受体-2肿瘤生长

目的探讨抗人类表皮生长因子受体-2（Her-2）单链抗体（scFv）抑制高表达Her-2的肿瘤细胞生长增殖，探讨其应用于Her-2阳性肿瘤治疗的可行性。方法应用聚合酶链反应（PCR）技术从携带Her-2-scFv片段的质粒pUC57-Her-2-scFv获得目的基因，双酶切法将目的基因Her-2-scFv插入质粒载体pET28a构建表达质粒，转化入Rosetta大肠杆菌诱导表达，获得目的蛋白，并复性、纯化。Western blot证实表达。噻唑蓝（MTT）法检测目的蛋白对肿瘤细胞T6-17增殖的抑制作用。将肿瘤细胞T6-17在裸鼠皮下成瘤，观察抗Her-2单链抗体抑制肿瘤细胞生长。结果经基因测序鉴定，重组质粒pET28a-Her-2-scFv构建成功。转化入Rosetta菌表达并分离纯化，可获得纯度约为90%的目的蛋白。MTT法测定发现，抗Her-2-scFv组对T6-17细胞的的生长抑制率为33.52%，曲妥珠单抗治疗组的生长抑制率为34.79%，两组比较差异无统计学意义（P=0.429），而与阴性对照组比较，差异均有统计学意义（P=0.000）。进而检测Her-2-scFv对裸鼠肿瘤模型生长抑制作用发现，Her-2-scFv各浓度治疗组均表现出抑瘤效应，100、250、500 ng/kg组的抑瘤率分别为33.7%、27.2%、63.3%，与空白对照组比较，差异均有统计学意义（P=0.027、0.035、0.000）。赫赛汀组抑瘤率为70.2%，与500 ng/kg组比较，差异无统计学意义（P=0.643）。结论抗Her-2单链抗体在体内外均可显著抑制Her-2阳性肿瘤细胞T6-17的生长增殖。

外伤性肝破裂临床治疗探究

目的探讨手术与非手术治疗外伤性肝破裂的临床疗效。方法将邯郸市第一医院2009年2月至2012年2月之间收治的46例外伤性肝破裂患者依据病情状况分为重度组和轻度组,轻度组25例患者采取非手术治疗,而重度组21例患者采取手术治疗,观察两组的治疗效果。结果采取保守治疗的25例轻度组患者通过影像学检查显示损伤部位已有明显的愈合,血肿全部消失,均痊愈出院。采取手术治疗的21例重度组患者中,治愈18例,治愈率85.71%,死亡3例,死亡率14.28%,其中死于重度颅脑外伤1例,失血性休克1例,多器官功能衰竭1例。结论临床中对于轻度外伤性肝破裂采取非手术治疗是可行的,对于重度患者在进行手术治疗中也需要合理的选取手术方法,提高临床治疗效果。

单侧甲状腺微小乳头状癌合并对侧甲状腺小结节临床分析

目的对单侧甲状腺微小乳头状癌合并对侧甲状腺小结节患者的临床症状与病理进行分析,为其治疗提供一定价值的参考。方法利用多普勒彩超技术对53例单侧甲状腺微小乳头状癌合进行病灶的检查,观察单侧甲状腺微小乳头癌的病例特征和3年后其对侧甲状腺小结节诊断。结果甲状腺微小乳头状癌呈结节状,边界较为模糊不清,颜色呈现灰白,对侧小结节出现恶性结节患者49例,良性结节患者4例。结论单侧甲状腺微小乳头状癌患者对侧发生恶性甲状腺小结节的概率比较高,二者存在某种相互关系。

外源性肿瘤坏死因子α对三维环境下小鼠间充质干细胞向汗腺细胞分化的影响及机制

目的探讨外源性肿瘤坏死因子α(TNF-α)对三维环境下小鼠间充质干细胞向汗腺细胞分化的影响及其分子机制。方法(1)取5只6~8周龄雌性C57BL/6小鼠,用烫伤仪在每只小鼠背部制成1个1 cm^2深Ⅱ~Ⅲ度烫伤创面。伤后1 d,取创面全层皮肤组织,采用酶联免疫吸附测定法检测组织中TNF-α浓度。(2)将0.9 g明胶和0.3 g海藻酸钠混匀后溶于30 mL磷酸盐缓冲液中制成水凝胶,取10只1 d龄雌雄不明C57BL/6小鼠足底全层皮肤研磨成真皮匀浆,从10只7 d龄雌雄不明C57BL/6小鼠股骨和胫骨中分离培养间充质干细胞。混合8 mL预热水凝胶、1 mL小鼠足部真皮匀浆、1 mL第2或3代终浓度为1.5×10^5个/mL间充质干细胞悬液,利用三维生物打印机在培养皿中打印出纵横交错的圆柱块共12块。打印块用25 g/L氯化钙溶液交联10 min,加入间充质干细胞培养基常规培养12 h后,按随机数字表法分为空白对照组和TNF-α处理组,每组6皿、6块。2组打印块均更换新鲜的汗腺诱导培养基培养,TNF-α处理组培养基中另加入终质量浓度为20 ng/mL的TNF-α。培养6 h,采用实时荧光定量反转录PCR法检测各组2皿打印块中间充质干细胞的多能性标志物Nanog mRNA的表达,采用蛋白质印迹法检测各组1皿打印块中间充质干细胞的Nanog蛋白表达,样本数均为3。培养14 d,采用实时荧光定量反转录PCR法检测各组2皿打印块中间充质干细胞的汗腺细胞标志物细胞角蛋白14(CK14)、CK18、钠钾ATP酶蛋白a1(ATP1a1)和水通道蛋白5(AQP5)mRNA表达,样本数为3;采用免疫荧光染色检测各组1皿打印块中间充质干细胞CK14、CK18、ATP1a1和AQP5蛋白表达分布。对数据行独立样本t检验。结果(1)伤后1 d,小鼠烫伤创面组织中TNF-α质量浓度为(19±3)ng/mL。(2)培养6 h,TNF-α处理组打印块中间充质干细胞Nanog mRNA和蛋白表达量分别为0.39±0.04、0.36±0.03,均明显低于空白对照组的1.00±0.05、1.00±0.07(t=16.51、14.56,P<0.01)。(3)培养14 d,TNF-α处理组打印块中间充质干细胞CK18、CK14、ATP1a1、AQP5 mRNA表达量分别为0.38±0.03、0.42±0.11、0.23±0.06、0.25±0.03,明显少于空白对照组的1.00±0.03、1.00±0.05、1.00±0.05、1.00±0.07(t=25.31、8.31、17.07、17.06,P<0.01)。(4)培养14 d,空白对照组打印块中间充质干细胞CK18、CK14、ATP1a1和AQP5蛋白均广泛分布于细胞质,而TNF-α处理组打印块中间充质干细胞CK18、CK14、ATP1a1和AQP5蛋白在细胞质的分布较空白对照组明显减少。结论外源性TNF-α抑制三维环境下小鼠间充质干细胞向汗腺细胞定向分化,这可能与TNF-α抑制Nanog mRNA和蛋白水平的表达从而使间充质干细胞多向分化潜能下调有关。