microRNA-490-3p抑制胶质瘤增殖及凋亡的作用研究

目的探讨微小RNA-490-3p(miR-490-3p)对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响,观察miR-490-3p对胶质瘤生物学行为的影响。方法通过荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测16例胶质瘤样本、胶质瘤旁组织及4种胶质瘤细胞系中miR-490-3p的表达;利用人工合成miR-490-3p mimic瞬时转染脑胶质瘤细胞株,qRT-PCR检测细胞中miR-490-3p的表达水平;采用MTT比色法检测胶质瘤细胞增殖情况;流式细胞术检测胶质瘤细胞凋亡。结果胶质瘤样本及胶质瘤细胞系中miR-490-3p的表达量较瘤旁与正常胶质细胞系显著降低,miR-490-3p mimic能够显著上调胶质瘤细胞株中miR-490-3p的表达水平,并显著抑制胶质瘤细胞株U251、U87细胞的增殖能力显著增加细胞凋亡数量;结论 miR-490-3p在胶质瘤样本及胶质瘤细胞系中呈现低表达,过表达miR-490-3p有效抑制了胶质瘤细胞株的增殖,增加凋亡,提示miR-490-3p可能成为胶质瘤治疗的新靶点。

miR －181c抑制胶质母细胞瘤细胞株 T98G侵袭能力的机制

目的：探讨miRNA －181c（miR－181c）抑制胶质母细胞瘤（GBM ）细胞株T98G侵袭的机制。方法应用实时定量PCR、蛋白质印迹法（Western Blot）检测miR－181c与转化生长因子β（TGF－β）相关基因的表达水平，应用Transwell实验检测miR－181c与TGF－β对胶质瘤细胞侵袭的影响，利用分子克隆技术设计、克隆目的基因的3＇端非翻译区（3＇－UTR）及其突变区域，通过荧光素酶分析miR－181c与目的基因的直接结合情况。结果 miR－181c转染后与TGF－β通路相关基因转化生长因子β受体1（TGFBR1）、TGFBR2和转化生长因子β受体相关蛋白1（TGFBRAP1）的mRNA及蛋白表达水平下降，差异有统计学意义（P ＜0．05），miR－181c通过影响TGF－β信号减弱T98G细胞的侵袭性，且TGFBR1、TGFBR2和TGFBRAP1的3＇－UTR是miR －181c的直接作用靶点。结论 miR－181c可能通过调控 TGF －β信号通路抑制胶质瘤细胞株 T98G的侵袭能力，可以做为GBM 治疗的重要分子。

Notch信号通路与胶质瘤细胞上皮间充质转化的相关性

目的 探讨 Notch信号通路与胶质瘤细胞上皮间充质转化的关系。方法 采用免疫磁珠法从人脑胶质瘤组织分离脑胶质干细胞，进行体外培养，使用免疫荧光技术鉴定细胞；构建 Notch-1基因的 RNA干扰反转录病毒载体（pSiRNA-Notch-1），试验分为 3组，空白对照组（不转染质粒）、阴性对照组（转染空白质粒）和干扰组（转染 pSiRNA-Notch-1），观察 3组细胞增殖、分化，采用 RT-PCR和 Western blot检测 Notch-1和 Hes-1 mRNA和蛋白表达。结果 干扰组培养第 7天细胞增殖及细胞分化吸光度值（A）分别为（1.332±0.614）和（ 1.203±0.783），明显低于空白对照组和阴性对照组（P＜ 0.05）；细胞增殖培养 3 d后，干扰组 Notch-1和 Hes-1 mRNA和蛋白相对表达量分别为（0.189±0.021）和（ 0.301±0.121），（0.422±0.022）和（0.091±0.032），明显低于空白对照组和阴性对照组（P＜ 0.05）；细胞分化培养 3 d后，干扰组 Notch-1和 Hes-1 mRNA和蛋白相对表达量分别为（0.253±0.071）和（ 0.192±0.043），（0.178±0.022）和（ 0.101±0.012），明显低于空白对照组和阴性对照组（P＜ 0.05）。结论 Notch信号通路在胶质瘤细胞增殖分化过程中有重要作用，其中 Notch-1和 Hes-1可能参与了增殖、分化的调控，需进一步研究。