大肠癌患者血清IL-8和MMP-3水平的临床研究

目的探讨大肠癌患者血清IL-8和MM P-3表达水平及其临床意义。方法应用EL ISA方法,对56例大肠癌患者和同期30名健康人的血清IL-8和MM P-3水平进行测定。结果大肠癌患者血清IL-8和MM P-3水平明显高于正常人,IL-8和MM P-3水平与肿瘤大小、血管侵犯、淋巴结受累、肝脏转移及临床病理分期密切相关(P<0.05),但与肿瘤部位、组织学类型及患者的性别和年龄等因素无关(P>0.05)。大肠癌患者血清IL-8和MM P-3水平表达有显著相关性(P<0.05)。结论IL-8和MM P-3在大肠癌的发生、发展中具有重要作用,术前检测IL-8和MM P-3可作为大肠癌辅助诊断和病情监测的参考指标。

人参皂苷Rg_3与TRAIL联合应用对大肠癌细胞株HCE8693作用的实验研究

目的将人参提取成分20(R)-人参皂苷Rg3和肿瘤坏死因子(TNF)相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)基因,联合应用于人大肠癌细胞株HCE8693,来寻求传统中药与现代基因治疗对肿瘤治疗的新途径。方法将人参皂苷Rg3联合重组腺病毒载体介导的TRAIL基因(Ad／GT-TRAIL)作用于大肠癌细胞株HCE8693。通过MTT比色法与流式细胞仪研究分析其对HCE8693细胞的作用效果。结果 单独应用浓度为0.01％,0.017％,0.025％,0.05％的人参皂苷Rg3及2000MOI的Ad／GT-TRAIL对HCE8693细胞的生长抑制率分别为8.6％,8.6％,18.7％,21.9％和24.3％;凋亡诱导率分别为5.4％,7.6％,20.3％,20.9％和23.2％。联合应用后,对HCE8693细胞株的生长抑制率及凋亡率均有显著的增强作用,分别达17.8％,25.7％,37.3％,46.2％及18.9％,20.1％,46.2％,56.0％。人参皂苷Rg3对HCE8693的生长抑制及促凋亡作用存在浓度依赖现象。结论一定浓度的人参皂苷Rg3或TRAIL能有效抑制HCE8693的生长,人参皂苷Rg3对HCE8693的生长抑制及促凋亡作用有浓度依赖性。联合应用后,其对HCE8693的生长抑制作用及凋亡诱导作用均明显增强,其协同作用的机制值得进一步探索。

云母对大鼠慢性萎缩性胃炎的干预及治疗作用的研究

目的 :研究云母对大鼠慢性萎缩性胃炎的干预及治疗作用。方法 :以 60 %的乙醇 ,2 0mmol·L- 1的去氧胆酸钠和 0 .1%的氨水在 2 4周建立SD大鼠慢性萎缩性胃炎模型。在制模的同时用云母进行干预实验 ;制模成功后用云母进行治疗实验。实验到期后取出鼠全胃 ,观察胃黏膜大体观及各项病理学指标 ,并以硫糖铝作为对照。结果 :云母干预组及治疗组胃黏膜腺体排列规则 ,无明显的萎缩现象。胃窦部的胃黏膜炎症级别低于模型组 (P <0 .0 1) ;胃黏膜腺体厚度 (L1)和黏膜肌层厚度 (L2 )之比 (Ll/L2 )高于模型组 (P <0 .0 1) ;单位长度内胃黏膜腺体数目高于模型组 (P <0 .0 1)。与正常对照组相比则无明显差别 (P >0 .0 5)。结论 :云母对大鼠慢性萎缩性胃炎有干预及治疗作用。

TRAIL基因修饰联合阿霉素对大肠癌细胞株RKO作用的研究

目的:探讨肿瘤坏死因子(tumor necrsis factor,TNF)相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)基因联合阿霉素后,应用于人大肠癌细胞株RKO基因治疗的实验研究。方法:将重组腺病毒载体(Ad)介导的TRAIL基因作用于大肠癌细胞株RKO,并联合低剂量的阿霉素协同作用。通过MTT比色法与流式细胞仪研究分析其对RKO细胞的作用效果,并以RT—PCR检测联合应用阿霉素前后TRAIL基因的表达水平。结果:病毒载体对RKO细胞的生长有轻微的抑制作用,作用4 d抑制率为11.9％,但不增加RKO细胞的凋亡率。TRAIL对RKO细胞的生长抑制率及凋亡诱导率分别为50.1％和19.8％。联合阿霉素后,TRAIL对RKO细胞株的生长抑制率及凋亡率均有显著的增强作用,分别达60.3％及49.0％。RT-PCR结果提示联合应用阿霉素后,TRAIL基因的表达并未增强。结论:TRAIL能有效抑制RKO的生长,联合阿霉素后,其对RKO的生长抑制作用及凋亡诱导作用均明显增强。阿霉素不是通过增加TRAIL基因的表达来实现上述作用的。

融合DNA疫苗CRT180/HPV6E7的构建及其免疫学特性研究

目的构建融合DNA疫苗CRT180/HPV6E7,并评价其体外实验和动物模型上的免疫学特性,尤其是抗病毒致病基因的特异性细胞免疫反应。方法分别构建DNA重组体pcDNA3.1-CRT180/HPV6E7,pcDNA3.1-CRT180,pcDNA3.1-HPV6E7。将pcDNA3.1-HPV6E7质粒经脂质体介导转染B16细胞,以G418筛选阳性细胞集落,荧光显微镜观察和RT-PCR鉴定表达HPV6E7的阳性细胞株。将质粒DNA肌注免疫C57BL/6小鼠,3次后取全血经流式细胞仪检测T细胞亚群的变化,LDH法检测小鼠的脾细胞和淋巴细胞与靶细胞B16/HPV6E7孵育后的CTL活性以及ELISA法检测共孵育上清中IL-2和IFN-γ浓度的变化。结果各组质粒经鉴定表明构建正确。转染后细胞株稳定表达HPV6E7。DNA疫苗免疫小鼠后,pcDNA3.1-CRT180/HPV6E7免疫组较pcDNA3.1-HPV6E7免疫组的外周血CD8+T细胞和TCRγδT细胞的比例显著增加,脾细胞和淋巴细胞针对靶细胞B16/HPV6E7的CTL杀伤活性更明显,分泌IL-2和IFN-γ的水平升高(P<0.05)。结论CRT180与HPV致病基因6E7相连的重组质粒疫苗pcDNA3.1-CRT180/HPV6E7能引发小鼠T细胞亚群CD8+分化并诱导出显著的特异性CTL反应。推测CRT180/HPV6E7DNA疫苗在动物模型上可以有效激活抗HPV特异性细胞免疫,有利于病毒感染的清除。

HAI-1蛋白在人正常及肿瘤组织中的表达研究

目的:肝细胞生长因子激活物抑制因子(Hepatocyte growth factor activator inhibitor 1,HAI-1)是一类细胞膜相关的Kunitz型丝氨酸蛋白酶的抑制因子,它可强效抑制多种丝氨酸蛋白酶的活性,包括:肝细胞生长因子的激活因子(HGFA)、matriptase,、hespsin、组织激肽释放酶和胰蛋白酶。其中,HGFA、matriptase和hepsin能激活作为酪氨酸激酶MET受体配体的肝细胞生长因子(HGF),研究显示HAI-1可能在肿瘤中发挥多方面的作用,因此检测HAI-1蛋白在人正常及肿瘤组织中的表达,分析与大肠癌临床病理的相关性,为进一步研究HAI-1在肿瘤的发生和发展中可能的作用及机制提供资料。方法:应用免疫组化方法,用抗HAI-1单克隆抗体检测HAI-1蛋白在人正常及肿瘤组织中的表达水平,并结合大肠癌患者的临床病理资料,统计分析HAI-1在大肠癌组织中的表达与其相关性。结果:HAI-1在各种上皮组织和/或相应的肿瘤组织中有不同程度表达,在38对大肠癌及其癌旁(正常)组织中大肠粘膜上皮和肿瘤组织表达较高,大肠腺体表达较低(P<0.001),HAI-1蛋白的表达水平与总共52例大肠癌的组织分化程度正相关(P<0.05),与大肠癌的分期及淋巴结转移无显著相关性。结论:HAI-1可能在正常上皮细胞分化以及大肠癌的分化中发挥重要的作用,并可能为上皮细胞分化成熟的一个标志。

乳腺癌的DNA甲基化研究进展

乳腺癌是严重威胁女性健康的疾病，其发病机制还不是很清楚。随着研究手段的不断提高，目前发现乳腺癌的发病机制不仅仅局限于基因突变、缺失等遗传学变化。随着表观遗传学的理论研究的深入，DNA甲基化在乳腺癌的病理生理过程中的作用逐渐被揭示。

腹腔镜与开腹子宫内膜癌分期手术的临床对比研究

目的 探讨腹腔镜下分期手术治疗子宫内膜癌的必要性和可行性.方法 回顾性分析56例子宫内膜癌分期手术患者,比较腹腔镜和开腹两组的围手术期情况 分析术前术后分期的差异及原因.结果 手术时间腹腔镜组（213±49）min,开腹组（162±30）min 手术后血红蛋白下降值腹腔镜组为（12±8）g/L,开腹组为（19±8）g/L 差异有统计学意义（P＜0.05）.腹腔镜组术后住院时间、肛门恢复排气时间均短于开腹组,差异有统计学意义（P＜0.01）.两组留置导尿管时间、术后并发症发生率、淋巴结切除数量、住院费用等方面差异均无统计学意义（均P＞0.05）.临床与手术病理分期总符合率为57.14%.结论 腹腔镜下分期手术可作为早期子宫内膜癌的主要治疗术式.

原发性肝癌患者外周血淋巴细胞Th1/Th2型细胞因子表达的测定

目的 检测原发性肝癌患者外周血 Th1/ Th2类细胞因子基因的表达 ,为细胞因子免疫治疗提供依据。方法 应用逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)方法检测 30例原发性肝癌患者及 2 5例健康体检者外周血淋巴细胞IFN-γ、IL - 2、IL - 4及 IL - 10 m RNA的表达 ,以及用酶联免疫吸附 (EL ISA)方法检测血浆中 IFN-γ和 IL - 10的含量。结果 原发性肝癌患者 PBMC中 Th1型细胞因子 IL - 2 m RNA表达阳性率低于正常对照组 (P<0 .0 5 ) ,Th2型细胞因子 IL - 4和 IL - 10 m RNA表达阳性率明显高于正常对照组 (P<0 .0 1) ;原发性肝癌 、 与 期 IL - 10 m RNA表达阳性率比较差异均有显著性 ,随临床分期升高 ,IL - 10表达阳性率升高 ; 、 与 期原发性肝癌患者血浆中IFN-γ明显低于正常对照组 (P<0 .0 1) ,而 IL - 10明显高于正常对照组 (P<0 .0 1)。结论 原发性肝癌患者外周血单个核细胞及血浆中存在 Th1/ Th2平衡失调 ,呈 Th2型细胞因子优势表达现象。 IL -

血小板衍生内皮细胞生长因子在胃癌和胃癌前病变中的表达及意义

目的:分析胃癌和胃癌前病变组织中血小板衍生内皮细胞生长因子(thymidine phosphoryl-ase/platelet-derived endothelial cell growth factor,TP/PD-ECGF)表达、微血管密度(microvessel den-sity MVD)和血小板(PLT)计数的变化。方法:收集有详细临床资料,并有外周血血小板计数资料的归档病理切片标本117例,分别作TP/PD-ECGF、MVD(应用CD34染色)免疫组化染色和PLT计数。结果:正常胃黏膜、肠上皮化生、不典型增生和肠型胃癌组织中TP/PD-ECGF表达阳性率分别为25%、34.88%、65.71%和92.95%,各组间差异有统计学意义。117例不同胃组织中TP/PD-ECGF表达积分与MVD具有相关性(r=0.441,P=0.000),TP/PD-ECGF表达阳性组与阴性组的MVD差异有统计学意义,P<0.01。胃不典型增生组织TP/PD-ECGF表达阳性组与阴性组的MVD差异有统计学意义,P<0.05。对MVD行4组不同胃组织间的两两比较显示,除肠上皮化生组与不典型增生组之间差异无统计学意义外(P>0.05),其余组间比较均有统计学意义。血小板计数在正常胃黏膜组与肠型胃癌组之间差异有统计学意义,P<0.01。结论:胃癌和胃癌前病变中存在TP/PD-ECGF表达增加和MVD增多。伴随TP/PD-ECGF表达增加,MVD也随之增加。血小板在胃癌的形成中也起到一定作用。

(His)_6-eIF3s4融合蛋白在人乳腺癌细胞Bcap37中的表达

目的:构建真核细胞翻译起始因子3第4亚单位(eIF3s4)真核表达载体用于进一步功能研究。方法:设计引物,以K562细胞的总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增eIF3s4的全长编码区cDNA,克隆于pGEM-TEasy载体,经DNA测序并与GenBank数据库序列进行比对后,将该cDNA序列亚克隆于真核表达载体pcDNA4/HisMaxB载体,构建成(His)6-eIF3s4融合蛋白的表达载体,用LipofectamineTM2000瞬时转染人乳腺癌细胞株Bcap37,利用Westernblot方法检测(His)6-eIF3s4融合蛋白的表达。结果:DNA序列测定表明,利用RT-PCR方法克隆的eIF3s4全长编码区cDNA序列与GenBank数据库序列一致,Westernblot结果证实(His)6-eIF3s4融合蛋白在Bcap37细胞中获得预期表达。结论:成功地构建了eIF3s4的真核表达载体并在人乳腺癌细胞Bcap37中表达,为建立稳定的eIF3s4高表达细胞系,进而研究eIF3s4与肿瘤细胞多药耐药相关性打下了基础。

射频热疗后小鼠脾细胞分泌细胞因子的动态变化

目的:通过检测荷肝癌小鼠射频治疗后脾细胞分泌Th1类细胞因子IL-2、IFN-γ及Th2类细胞因子IL-4、IL-10的动态变化,评价射频热疗对小鼠免疫状态的影响。方法:用酶联免疫吸附(ELISA)方法检测荷瘤组、手术组、射频组、正常对照组小鼠脾细胞培养上清IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10的表达量。结果:IL-2含量在射频治疗后2周显著高于正常组2周和手术后2周(P<0·05);IFN-γ含量在射频后1、2、3周均显著高于手术后1、2、3周及正常对照组1、2、3周(P<0·05);IL-4含量在射频后1、2、3周均显著低于同期手术后和正常对照组(P<0·05);IL-10含量在射频治疗后2周亦显著低于正常组2周和手术后2周(P<0·05);而同期手术组和正常对照组间无显著差异(P>0·05)。结论:射频治疗可以促进Th1类细胞因子IL-2和IFN-γ的表达,使荷瘤小鼠由Th2向Th1逆转,从而增强机体的抗肿瘤免疫功能。

抗氧化剂和NF-κB对大肠癌细胞IL-8表达的作用及机制

目的:探讨NF-κB在大肠癌细胞IL-8诱导表达中的作用及抗氧化剂对大肠癌细胞IL-8诱导表达的影响及其机制。方法:IL-8mRNA表达采用逆转录/聚合酶链反应(RT/PCR)检测,培养上清IL-8蛋白含量用ELISA检测,EMSA法测定细胞核内NF-κB结合活性。结果:抗氧化剂可阻断大肠癌细胞培养体系TNF-α诱导的IL-8生成及IL-8mRNA的表达,TNF-α可诱导大肠癌细胞NF-κB的激活并被抗氧化剂阻断。结论:TNF-α诱导的大肠癌细胞IL-8基因和蛋白表达依赖于NF-κB的激活;抗氧化剂可通过抑制NF-κB的活化而阻断IL-8基因和蛋白的诱导表达。

ARDS肺内分流增加的机制

肺内分流是指肺动脉未经氧合的血液流入肺静脉的总量。正常情况下，由于小静脉血可直接流入左心房，同时支气管静脉血可直接进入肺静脉，且血液和气体在肺部的分布不均，血液流经无通气的肺泡时可造成一定量的解剖和生理分流，其总量约占肺循环血量的3％-7％。急性呼吸窘迫综合征（ARDS）患者的肺内分流量可增加至30％-50％，

幽门螺杆菌及其根除治疗与胃癌前病变

幽门螺杆菌 (H .pylori)感染与胃癌前病变的发生及演变过程密切相关 ,而其根除治疗在胃癌前病变干预和治疗中的作用倍受争议。该文综述了胃癌前病变中H .pylori的感染状况 ;H .pylori致萎缩、肠化的机制 ;H .pylori对胃癌前病变细胞增殖与凋亡的影响。进一步总结了根除治疗所取得的成果 ,展望了今后研究发展的方向和前景。

体表胃电刺激联合雷贝拉唑治疗非糜烂性反流病疗效观察

非糜烂性反流病（NERD）是指具有由胃食管反流物引起的食管和食管外组织损害，由于内镜下未见Barrett食管及明确的食管黏膜破损，故也称作内镜阴性反流病（ENRD）或症状性胃食管反流病（GERD）。据北京、上海社区整群抽样的一项调查报告显示，NERD约占GERD的67％。NERD是一种难治性疾病，目前药物治疗上以抑酸及促进胃排空为主，但部分患者疗效不佳。国内资料显示，体表胃电刺激可治疗胃动力障碍性疾病如功能性消化不良，故笔者采用体表胃电刺激联合雷贝拉唑治疗NERD，并与其他疗法进行比较，现报道如下。

从纤支镜刷落细胞提取微量RNA并检测Foxp3基因表达

目的建立纤维支气管镜刷落细胞提取微量核糖核酸(RNA)的方法,检测分析调节性T细胞(Treg)Foxp3基因在肺癌及肺良性疾病患者中的表达水平。方法以磁珠吸附法提取154例肺癌及肺良性疾病患者纤支镜刷脱细胞的微量RNA,以实时荧光定量RT-PCR的方法检测Treg特异性转录因子Foxp3基因在肺癌及肺良性疾病患者中的表达水平。结果平均总RNA提取量为5.08μgRNA/例,最低为3.20μg,最高为15.25μg。肺癌患者组中Foxp3 mRNA的表达水平(0.0000～13682.0805,四分位数间距0.0011)显著高于肺良性疾病组(0.0000～0.0061,四分位数间距0.0000)(Z=-3.508,P<0.01),肺癌患者组中Foxp3的阳性率(29.34%,27/92)亦明显高于肺良性疾病组(3.23%,2/62)(χ2=16.535,P<0.01)。结论利用纤支镜毛刷刷取病灶部位涂片后毛刷中的剩余细胞,采用磁珠吸附的方法可以提取微量RNA,并用于基因表达水平的检测。