肺瘤平膏联合环磷酰胺化疗对肺癌的抑瘤作用和酸性微环境的影响

目的:观察肺瘤平膏和化疗药环磷酰胺对肺癌小鼠的作用,并从酸性微环境和细胞凋亡角度探索其内在作用机制。方法:建立Lewis肺癌小鼠模型,分别给予环磷酰胺、肺瘤平膏、环磷酰胺+肺瘤平膏相应处理,以生理盐水组作为对照,观察各组小鼠的肿瘤体积、肿瘤增殖率、食物消耗量。给药15 d后处死小鼠,取肿瘤组织,用乳酸试剂盒检测肿瘤组织的乳酸相对浓度,免疫组织化学法检测葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,GLUT4)、己糖激酶1(hexokinase 1,HK1)、葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、碳酸酐酶-Ⅸ(carbonic anhydrase-Ⅸ,CA-Ⅸ)的蛋白表达,流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡率和调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)比例,Wes-tern blot法检测缺氧诱导因子1-α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、Bcl-2、Bax、Caspase-3、白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)的蛋白表达。结果:肺瘤平膏+环磷酰胺组小鼠的肿瘤生长受到抑制最为明显,肿瘤增殖率最低,与生理盐水组相比差异有统计学意义(P<0.05),食物的消耗量也最多,但差异并不具有统计学意义(P>0.05)。进一步的分子生物学检测发现,肺瘤平膏+环磷酰胺组肿瘤组织的乳酸水平在各组中最低,并伴有GLUT4、HK1、GRP78、CA-Ⅸ等蛋白表达和Treg细胞比例的下降,与生理盐水组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。此外,与生理盐水组相比,肺瘤平膏+环磷酰胺组肿瘤细胞凋亡显著增加,而HIF-1α、Bcl-2、Bax、Caspase-3、IL-2等蛋白的表达与生理盐水组相比存在明显差异。结论:化疗药环磷酰胺与肺瘤平膏在抑制肺癌生长、提高荷瘤小鼠一般状况上具有协同作用,这些作用部分是因为二者联用改善组织缺氧,抑制HIF-1α表达,进而调控下游GLUT4、HK1、GRP78、CA-Ⅸ等蛋白的表达,降低肿瘤组织局部的乳酸水平,改善肿瘤组织酸性微环境,从而诱导肿瘤细胞凋亡,抑制T细胞向Treg细胞分化。

从抑制髓源抑制性细胞的募集探索肺瘤平联合化疗对肺癌的作用和机制

目的观察肺瘤平膏和化疗药物对肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长的影响,并通过分子生物学方法探索其内在的作用机制。方法通过注射Lewis肺癌细胞悬液建立荷瘤小鼠模型并分为生理盐水、环磷酰胺、肺瘤平、环磷酰胺+肺瘤平4组,分别给与相应干预,记录各组小鼠的瘤块变化、食物消耗量。提取小鼠外周血、脾脏和肿瘤局部的细胞,流式细胞术检测其中Gr-1+CD11b+髓源抑制性细胞(Myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)的比例,取肿瘤组织和外周血血清采用Western Blot法和ELISA法检测炎症通路和肿瘤相关细胞因子的表达。结果肺瘤平+环磷酰胺组小鼠的肿瘤体积最小,消耗食物最多,同时该组小鼠外周血、脾脏、肿瘤组织中的MDSCs比例在各组中最低,并伴有TNF-α/IL-1-NF-κB/STAT3炎症通路的抑制和MCP-1、VEGF、MMP-2、MMP-9等炎性因子表达的下调。结论化疗与肺瘤平膏可协同抑制肺癌生长,而这种协同作用部分是因为二者联用可以抑制TNF-α/IL-1-NF-κB/STAT3炎症通路、调控肿瘤局部微环境从而抑制肿瘤对骨髓来源细胞的募集来实现的。