肺特异性X蛋白转染表达对A549肺癌株生物学功能的影响

目的观察肺特异性x蛋白（LUNX）转染表达对A549肺癌细胞株的增殖凋亡和生物学功能的影响。方法应用慢病毒基因转染表达方法检测LUNX表达对A549肺癌细胞株的抗增殖作用和生物学功能的影响；通过免疫组织化学法和实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）技术检测LUNX一小干扰RNA（siRNA）在A549肺癌株中的表达水平，Real—timePCR测定转染后A549肺癌细胞中增殖指标溴化脱氧尿嘧啶核苷（BrdUrd），碱性磷酸酶（AKP）和活性标志物表面活性蛋白C（SPC）的mRNA水平表达变化，并通过显微镜、苏木素．伊红（HE）染色、透射电镜等观察凋亡细胞的形态学改变。结果Real-timePCR和免疫细胞化学证实转染后A549肺癌细胞中有LUNX稳定表达；Real．timePCR结果示：A组AKP、SPC和BrdUrd密度为（0．73±0．14）、（0．53±0．12）、（O．31±0．10）U／L，B组为（1．64±0．38）、（1．47±0．25）、（1．28±0．21）U／L，C组为（1．71±0．45）、（1．53±0．32）、（1．33±0．26）U／L。与B、C对照组比较，A组AKP、SPC和BrdUrd扩增产物条带吸光度（A）值均显著降低（P〈0．01）。噻唑蓝（MTr）比色法表明：随着LUNX—siRNA与A549肺癌细胞效靶比增加及作用时间延长，抑制率明显增强（P〈0．05）。相同作用时间不同比例之间差异也均有统计学意义（P〈0．05），同一比例不同作用时间之间差异有统计学意义（P〈0．01）。LUNX-siRNA作用于肺癌细胞48h后，形态学观察肺癌细胞发生凋亡或坏死，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论体外制备的LUNX—siRNA对肺癌A549细胞具有抑制增殖和促进凋亡作用，其可能是通过通过负性调控信号通路降低A549肺癌细胞株中AKP、SPC和BrdUrd的表达。