γc家族细胞因子对体外培养T细胞表型的影响

目的:探讨γc家族细胞因子对体外培养T细胞表型的影响,为过继免疫治疗体外细胞制备提供实验依据。方法:采用健康人外周静脉血单个核细胞(PBMC),应用尼龙毛柱法、CD3磁珠阳性分选法、CD3磁珠阴性分选法和自然沉降法等4种方法分选T细胞,比较各种方法获取的T细胞纯度、回收率和细胞增殖。用CD3/CD28免疫磁珠激活CD3^+T细胞,γc家族细胞因子分为IL-2组和IL-7、IL-15、IL-21混合组,比较两组T细胞扩增倍数和表型的差异。结果:CD3磁珠阴性分选的T细胞纯度显著高于尼龙毛柱分选、CD3磁珠阳性分选、自然沉降分选[(94.06±1.07)%vs(86.74±1.06)%、(89.61±1.40)%、(88.48±1.86)%,P<0.05],自然沉降分选的T细胞回收率显著高于其余3种分选法[(60.29±1.53)%vs(45.03±2.79)%、(20.15±3.41)%、(42.98±2.82)%,P<0.05),综合比较效果以自然沉降法为最优选择。IL-2组T细胞扩增倍数显著高于混合组[(262.6±143.2)vs(73.0±25.8)倍,P<0.05]。混合组的早期记忆T细胞占总T细胞的比例、T_(scm)和T_(scm-like)、T_(cm)所占比例均显著高于IL-2组[(55.6±1.82)%vs(39.6±1.52)%,(16.6±1.82)%vs(9.8±1.30)%,(39.0±1.58)%vs(29.2±1.79)%;均P<0.05]。结论:自然沉降法从PBMC中分选T细胞具有低成本、高纯度、高回收率的优势。IL-7、IL-15和IL-21混合培养有利于早期记忆T细胞的生成,为肿瘤过继免疫治疗的体外细胞制备提供了实验依据。