转化生长因子β_1血清浓度及基因多态性与煤工尘肺的关系

目的探讨血清中转化生长因子β1(TGF-β1)的浓度与其-509位点基因多态性的关系在煤工尘肺发生发展中的作用。方法选择110例汉族煤工尘肺患者和110例煤尘接触者为研究对象,采集外周静脉血,应用TGF-β1酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测血清TGF-β1浓度,应用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测TGF-β1基因-509位点基因型。结果病例组煤工尘肺患者血清TGF-β1平均浓度为(65.108±29.354)pg/L,对照组为(57.296±16.603)pg/L,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。病例组与对照组内各基因型组血清TGF-β1平均浓度差异有统计学意义(P<0.05)。进一步用q检验两两比较,各组差异均有统计学意义(P<0.05)。TGF-β1-509位点为C/C、C/T基因型的两组血清TGF-β1的平均浓度之间差异无统计学意义(P>0.05);TGF-β1-509位点为T/T基因型的两组血清TGF-β1的平均浓度之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论煤工尘肺患者血清TGF-β1浓度与TGF-β1基因-509位点多态性可能有关。

不同温度下紫杉醇对人肺癌A549细胞抑制效应

目的研究不同温度下紫杉醇对人肺癌A549细胞的增殖抑制效应及对血管内皮生长因子mRNA(VEGF mRNA)表达的影响。方法采用不同的温度(37,39,41,43和45℃)及不同剂量的紫杉醇(6.25,12.5,25,50,100和200ng/ml),并采用组内分组设计,共30个组。应用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法测定热疗、化疗及热化疗联合对A549细胞的抑制率;以β-actin基因为参照,应用半定量RT-PCR技术检测不同剂量紫杉醇及其与加热联合对A549细胞VEGF mRNA表达的影响。结果43℃组细胞抑制率与不同温度同剂量组间细胞抑制率比较,除与41℃50 ng/ml和45℃100 ng/ml组对比差异无统计学意义外(P>0.05),其余各组差异均有统计学意义(P<0.05);39℃加热组各个剂量平均抑制率均低于37℃组,200 ng/ml剂量组间的差异有统计学意义(P<0.01);43℃加热40 min后的0,6.25,12.5,25 ng/ml剂量组的VEGF mRNA表达水平均低于37℃,0和6.25 ng/ml组差异有统计学意义(P<0.01)。结论39℃加热40 min可能会降低紫杉醇对A549细胞的抑制效应;43℃加热40 min可以增加A549细胞对紫杉醇的敏感性;紫杉醇可以降低A549细胞VEGF mRNA的表达;43℃加热40 min可以增加低剂量紫杉醇对VEGF mRNA表达的抑制效应。

非小细胞肺癌组织中RASSF_(1A)和p16基因启动子甲基化研究

目的:研究肺癌新型侯选抑癌基因Ras相关结构域家族基因1A(RASSF1A)和p16基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中的甲基化情况,揭示两基因表达失活的机制,为NSCLC的基因诊断和治疗寻找新途径。方法:用甲基化特异性PCR(MSP)方法对96例NSCLC患者癌组织及相应的远癌正常肺组织中RASSF1A和p16基因启动子甲基化状态进行检测。结果:(1)96例NSCLC组织RASSF1A甲基化率48.96%,p16基因34.38%,96例远癌正常肺组织均未发现此两基因甲基化。(2)RASSF1A甲基化率鳞癌组(64.29%)高于腺癌组(37.04%,P<0.05);p16基因甲基化率50岁以上组(44.93%)高于50岁以下组(7.41%,P<0.05),鳞癌(61.90%)高于腺癌(12.96%,P<0.05),有淋巴结转移组(46.67%)高于无淋巴结转移组(13.89%,P<0.05)。(3)RASSF1A与p16基因启动子CPG岛甲基化呈正相关(r=0.256,P<0.05)。结论:RASSF1A和p16在NSCLC尤其是鳞癌中频繁甲基化,可能是两基因表达失活的主要原因。

噪声接触与神经行为功能关系的meta分析

目的 综合分析噪声对神经行为功能改变的效应关系,取得敏感性行为指标。 方法 采用meta分析对国内1994～2 0 0 3年发表的有关噪声与神经行为关系的文献进行汇总、归纳和定量综合分析。 结果 各项行为指标得分接触组与对照组差异显著,行为效应大小均大于0 .2。 结论 噪声接触可引起认知能力、情感及心理运动能力的改变。目标追踪、简单反应时、紧张、数字跨度和疲劳是较敏感的指标。

RASSF1A和p16转录本在非小细胞肺癌中的表达及启动子区甲基化

目的研究RASSF1A和p16基因在国人非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的转录及启动子区甲基化情况,探讨其转录失活的机制,为NSCLC的诊断和治疗寻找新的途径。方法应用半定量RT-PCR和甲基化特异性PCR法分析96例NSCLC及远癌正常肺组织中RASSF1A和p16基因mRNA的表达和启动子区甲基化情况。结果(1)53.12%(51/96)的NSCLC中RASSF1A表达明显下调或缺失;36.46%(35/96)的p16表达下调或缺失,而远癌正常肺组织均表达良好。(2)96例NSCLC中RASSF1A甲基化率48.96%(47/96),该基因表达明显下调或缺失的51例中39例(76.5%)出现甲基化,表达正常的45例中8例(17.8%)出现甲基化,两组对比差异有统计学意义(P<0.05);96例NSCLC中33例(34.38%)检测到p16启动子区甲基化,p16基因表达明显下调的35例中20例(57.1%)出现该基因CPG岛的甲基化,而表达正常的61例中13例(21.3%)出现甲基化,两组比较差异显著(P<0.05)。96例远癌正常肺组织均未检测到此两基因启动子有甲基化。结论RASSF1A和p16基因mRNA在国人NSCLC中较高比例的表达下调或缺失;甲基化可能是两基因表达失活的主要原因。

创造酶切位点PCR-RFLP检测PON2(rs12026)基因多态性

目的:建立简便易用的PON2基因单核苷酸多态(rs12026)的检测方法。方法:应用创造酶切位点原理设计引物,通过PCR-RFLP技术判断PON2基因SNP位点多态性。结果:设计一对特异引物并PCR扩增含PON2多态位点的DNA片段,根据限制性内切酶BsmAI酶切结果判断PON2位点多态性,PCR和酶切效果均较好。结论:应用创造酶切位点PCR-RFLP原理建立的PON2多态位点的检测方法具备简便、经济、快速的特点。

RASSF1A表达或缺失的两类早期肺腺癌组织差显蛋白的筛选与鉴定

目的:建立RASSF1A表达或表达缺失的两类不同早期肺腺癌组织蛋白质的双向电泳凝胶图谱,筛选并鉴定存在明显表达差异的蛋白质。方法:采用Western印迹技术,从RASSF1A转录缺失和RASSF1A转录正常的早期肺腺癌标本中筛选出RASSF1A表达和表达沉默的癌组织各5例。提取组织可溶性总蛋白,采用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离总蛋白,建立两类不同早期肺腺癌组织蛋白质的双向电泳凝胶图谱;PDQuest凝胶图像分析软件比较分析,筛选出差异表达的蛋白质点;基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱获得相应蛋白质点的肽质量指纹图谱;搜索蛋白质数据库鉴定差异表达的蛋白质。结果:建立了重复性较好的RASSF1A表达或表达缺失的两类不同早期肺腺癌组织蛋白质双向电泳凝胶图谱;筛选出存在明显表达差异的蛋白质点17个,挖取其中的9个进行质谱分析,9个蛋白质点均得到了满意的肽质量指纹图谱;搜索蛋白质数据库鉴定出5种蛋白质,分别是:细胞色素b5(cytochrome b5),60S磷酸核糖体蛋白P2(60S acidic ribosomal protein P2),碳酸酐酶1(carbonic anhydrase-1),5-吡咯啉羧酸还原酶1(pyrroline-5-carboxylate reductase-1)和载脂蛋白A-Ⅰ前体蛋白(apolipoprotein A-Ⅰ precursor)。结论:成功建立了RASSF1A表达或表达缺失的两类不同早期肺腺癌组织蛋白质的双向电泳凝胶图谱,从中鉴定出5种存在明显表达差异的蛋白质,为进一步研究RASSF1A作用的信号转导途径奠定了初步的基础。

肺癌组织P33ING1的表达及其与P53蛋白的关系

[目的 ]探讨侯选抑癌基因ING1(inhibitorofgrowth 1)产物P33ING1蛋白在肺癌组织中的表达及其与P5 3蛋白的关系[方法 ]Western免疫印迹法检测肺癌组织、距癌肿 3cm组织及距癌肿 5cm组织中P33ING1与P5 3蛋白质的表达。 [结果 ]本研究收集了 13例肺鳞癌 ,6例肺腺癌 ,1例小细胞肺癌和 1例大细胞肺癌患者的肺癌组织、距癌肿 3cm和 5cm的组织 ,P33ING1蛋白在肺癌组织中的表达明显低于距癌肿 5cm组织 ,P33ING1蛋白减低 6 0 % ;P33ING1蛋白在肺癌组织中表达的条带密度与距癌肿 5cm组织条带密度之比为 1∶1 2。肺癌组织中有 11例检出突变型P5 3表达增高 ( 5 5 % ) ,突变率与文献报道( 5 0 %～ 6 0 % )接近 ;P5 3蛋白的表达在 3组之间无显著差异。P5 3突变的肺癌组织中有 7例P33ING1蛋白的表达减低( 6 3 6 % ) ,无P5 3突变的肺癌组织中有 5例P33ING1蛋白表达减低 ( 5 5 6 % ) ,经相关分析二者无直线相关关系。 [结论 ]检测到P33ING1蛋白在肺癌组织中表达减低 ,说明它可能与肺癌的发生发展有关 ;有文献报道P33ING1与P5 3蛋白在抑癌功能上相互依赖 ,但本研究初步表明二者在表达量上无直线相关关系 ,这与相关文献报道不相一致 。

人Ⅰ期肺腺癌及癌旁组织蛋白质双向电泳图谱的差异分析

目的筛选并鉴定存在明显表达差异的蛋白质,为人肺腺癌发病机制及其早期诊断的研究提供理论依据。方法采用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离12例Ⅰ期肺腺癌及其相配的癌旁正常肺组织可溶性总蛋白,建立人Ⅰ期肺腺癌及相配癌旁正常肺组织蛋白质的双向电泳凝胶图谱;PDQuest凝胶图像分析软件比较分析,筛选出差异表达的蛋白质点;基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱获得相应蛋白质点的肽质量指纹图谱;搜索蛋白质数据库鉴定差异表达的蛋白质。结果建立了重复性较好的人Ⅰ期肺腺癌及相配癌旁正常肺组织蛋白质的双向电泳凝胶图谱;筛选出存在明显表达差异的蛋白质点26个,挖取其中的9个蛋白质点进行质谱分析,9个蛋白质点均得到了满意的肽质量指纹图谱;搜索蛋白质数据库鉴定出4种蛋白质,分别是:60S核糖体蛋白P2、组织蛋白酶B1、载脂蛋白A-I前体和La4.1蛋白。结论成功建立了人Ⅰ期肺腺癌及相配癌旁正常肺组织蛋白质的双向电泳凝胶图谱,鉴定出4种在肺腺癌发生早期出现明显表达变化的蛋白质,为进一步探索人肺腺癌的发病机制及寻找特异性的早期分子标志物提供了理论依据。

人非小细胞肺癌中FHIT基因突变的研究

目的探讨FHIT基因突变在非小细胞肺癌发生发展中的作用。方法应用PCR-SSCP和DNA序列分析方法对29例人非小细胞肺癌中FHIT基因外显子5及其相邻内含子进行研究,以癌旁组织和7例肺良性病变组织做对照。结果29例肺癌患者中有7例出现FHIT基因变异,阳性率24.1%其中鳞癌28.6%(6/21)腺癌(1/6);而癌旁组织及肺良性病变组中均无变异,肺癌组、癌旁组及肺良性病变组比较差异具有统计学意义(p<0.05)。FHIT基因异常与非小细胞肺癌P-TNM分期、肿瘤组织学类型无明显关系。异常FHIT基因经DNA序列分析显示为内含子两个位点的碱基发生突变:188位插入G,227位T—C。外显子及其与内含子接头位点未发现变异。结论FHIT基因变异与非小细胞肺癌发生发展有关,基因异常发生在内含子,该变异可能是引起FHIT基因RNA异常剪接的主要原因之一。

ING1表达产物、MDM2、p53与肿瘤

人类基因组 (测序 )计划完成之后 ,将跨入蛋白质组的新时代 ,深入探讨基因的功能及其相互关系是有关学者面临的时代课题。多种基因之间存在复杂的竞争、协同、反馈等调控网络 ,对医学难题之一的肿瘤的发生发展及恶化有重要作用。新近发现侯选抑癌基因ING1与p5 3有相互依赖作用 ,p5 3与mdm2基因之间相互调节等结论提示 ,围绕p5 3基因的复杂调控网络尚待明确。在多基因立体交错的调控网络里 ,揭示某一环节会有助于深入理解肿瘤的发生发展机制 ,便于更好地防治肿瘤。

汞接触与神经行为功能关系的meta分析

目的:综合分析汞接触对神经行为功能改变的效应关系,取得敏感性行为指标。方法:采用meta分析对国内1994～2003年发表的有关汞接触与神经行为关系的文献进行汇总、归纳和定量综合分析。结果:除目标追踪外,其余各项行为指标得分接触组与对照组差异显著,行为效应大小均大于0.2。结论:在神经行为测试中,数字译码、视觉保留、疲劳、数字跨度、紧张和反应速度是较敏感的指标。

氯化汞对大鼠子宫内膜细胞的增殖作用

目的研究氯化汞对去卵巢大鼠子宫内膜细胞的增殖作用。方法将成年雌性大鼠去卵巢后,给予不同剂量的HgCl2(0.04mg/kg、0.20mg/kg和1.00mg/kg)连续3d,观察子宫内膜细胞有丝分裂指数和嗜银染色颗粒数。结果氯化汞低、中、高3个剂量组有丝分裂指数,均高于阴性对照组,差异有显著性(P<0.05),且有明显的剂量-效应关系。同时氯化汞高剂量组嗜银染色颗粒数,与阴性对照组相比,差异有显著性(P<0.05)。结论氯化汞能加速细胞的分裂和增殖,因此,推断它在大鼠体内可能具有雌激素样作用。

兔尘肺模型制备与肺灌洗方法的研究

目的 为尘肺的发病机制研究、治疗提供无损伤的家兔尘肺动物模型和肺灌洗方法。方法 采用气管插管向家兔气管内注入直径≤ 5 μm的粉尘 ,用改进的灌洗导管进行肺灌洗。结果 染煤尘家兔全肺多处出现点状和片状黑色尘斑 ,成纤维细胞增生 ;染矽尘家兔全部发现矽结节且有多处融合。X线摄片证实染尘家兔两肺存在不规则小阴影或片状融合阴影及类圆形阴影等。灌洗液回收率为 89%～94%。结论 采用气管插管和改进的灌洗导管制备尘肺模型和进行肺灌洗 ,方法简便、安全、无损伤。

创造酶切位点PCR-RFLP检测MTHFR(rs2274976)基因多态性

目的建立简便易用的MTHFR基因单核苷酸多态(rs2274976)的检测方法。方法应用创造酶切位点原理设计引物,通过PCR-RFLP技术判断MTHFR基因SNP位点多态性。结果设计一对特异引物,其中正向引物3’末端与多态相邻,倒数第二位碱基为错配碱基C可在PCR扩增后与多态G等位基因及相邻片段形成CCGG结构,使用限制性内切酶MspI进行RFLP检测可判断MTHFR多态性。结论应用创造酶切位点PCR-RFLP原理建立的MTHFR多态位点的检测方法具备简便、经济、快速的特点。

血浆Ras相关结构域家族基因1A和p16基因甲基化联合检测在非小细胞肺癌诊断中的意义

目前，提高肺癌患者生存率的关键措施是早期诊断，寻找与肺癌发生早期相关的分子标志物是肺癌早期诊断的有效方法。肺癌新型候选抑癌基因Ras相关结构域家族基因1A（ras association domain family gene 1A，RASSFlA）是从3p21．3克隆得到的，p16是多肿瘤抑制基因，两基因主要以启动子CPG岛高甲基化失活。