核因子-κB介导肿瘤相关巨噬细胞对骨肉瘤增长的影响及其作用机制的实验研究

目的探讨核因子-κB(NF-κB)介导肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)对骨肉瘤增长的影响及其作用机制。方法选取4~6周无特定病原体级Balb/c雄性裸鼠15只,数字表法随机分为人骨肉瘤MG63细胞组、人单核巨噬细胞系THP-1细胞组、MG63+THP-1混合细胞组3组,每组5只。于裸鼠右侧腋窝皮下注射浓度为1.0×10^8/mL的不同细胞悬液制备裸鼠成瘤模型:MG63细胞组裸鼠每只注射MG63细胞悬液0.2 mL,THP-1细胞组裸鼠每只注射THP-1细胞悬液0.2 mL,MG63+THP-1混合细胞组裸鼠每只注射MG63+THP-1混合细胞悬液(9∶1)0.2 mL。注射细胞后每天观察各组裸鼠是否出现移植瘤,从MG63组和MG63+THP-1混合细胞组均出现移植瘤当天开始,用游标卡尺测量移植瘤的长径和短径,并计算移植瘤体积,此后每5天测量1次,对比不同时间各组移植瘤生长情况;注射细胞后第25天处死裸鼠,剥离移植瘤,对比各组移植瘤质量。将移植瘤置于10%甲醛中固定,制备石蜡切片,采用HE染色,观察各组移植瘤的肿瘤特征改变;采用免疫组织化学SP染色,观察各组移植瘤中核转录因子NF-κB蛋白的表达情况;采用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件定量分析比较各组移植瘤中NF-κB蛋白的表达水平。结果THP-1细胞组裸鼠没有形成移植瘤。MG63+THP-1混合细胞组和MG63细胞组的裸鼠分别从注射细胞后第7天、第10天开始腋窝皮下可触及移植瘤,且随时间增加,肿瘤体积逐渐增大;第10、15、20和25天MG63+THP-1混合细胞组裸鼠移植瘤体积分别为(474.4±56.1)、(945.0±79.7)、(2 886.0±462.3)、(3 319.6±388.4)mm^3,均明显大于MG63细胞组的移植瘤体积(233.3±28.2)、(669.6±75.9)、(1 464.0±135.2)、(2 068.0±223.2)mm^3,差异均有统计学意义(t=3.536、2.504、2.952、2.794,P值均<0.05)。在种植细胞后第25天处死裸鼠,MG63+THP-1混合细胞组移植瘤质量(0.920±0.134)g,明显大于MG63细胞组(0.544±0.079)g,差异有统计学意义(t=2.404,P<0.05)。移植瘤HE染色显示,MG63细胞组和MG63+THP-1混合细胞组移植瘤均可见明显的肿瘤特征改变。免疫组织化学SP染色显示,NF-κB蛋白在MG63细胞组和MG63+THP-1混合细胞组移植瘤组织和组织间隙均呈高表达状态;检测NF-κB蛋白表达水平,MG63+THP-1混合细胞组NF-κB蛋白吸光度值(0.362±0.006),明显大于MG63细胞组NF-κB蛋白吸光度值(0.326±0.006),差异有统计学意义(t=9.895,P<0.05)。结论TAMs可以促进骨肉瘤的增长,其作用机制可能与NF-κB蛋白高表达有关。