非小细胞肺癌患者血清中HDAC1和DNMT1蛋白的表达及意义

目的 观察非小细胞肺癌患者血清中组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）和DNA甲基转移酶1（DNMT1）蛋白的表达,探讨其临床意义.方法 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法对2012年9月至2013年6月郑州大学第一附属医院呼吸内科136例原发性肺癌患者（肺癌组）和同期郑州市第六人民医院进行健康体检的147名健康人群（对照组）血清中HDAC1和DNMT1蛋白浓度进行测定,分析其与临床病理特征的关系.结果 肺癌组血清中HDAC1和DNMT1蛋白浓度分别为（145±53）ng/L和（50±11）μg/L,显著高于对照组的（78±56）ng/L和（27±6）μg/L（t=596.16、152.64,均P=0.000）;HDAC1和DNMT1蛋白浓度与性别、年龄、吸烟史均有显著相关性（均P＜0.05）;HDAC1与DNMT1蛋白浓度呈正相关（r=0.525,P=0.000）;不同组织学类型和不同临床分期肺癌患者血清HDAC1和DNMT1蛋白浓度差异均有统计学意义（均P＜0.01）.结论 血清中HDAC1和DNMT1蛋白高表达可能增加患非小细胞肺癌的危险性,可能在肺癌发展早期过程中起重要作用.

纳米SiO_2对HaCaT细胞基因组DNA总体甲基化水平的影响

目的检测纳米SiO2(nano-SiO2)暴露的体外培养的人皮肤表皮细胞(HaCaT)基因组DNA总体甲基化水平及DNA甲基转移酶DNMT1的表达改变。方法应用5-甲基胞嘧啶免疫荧光法和流式细胞定量分析法检测nano-SiO2(0、2.5、5和10μg/ml)和10μg/ml微米级二氧化硅(micro-SiO2)以及DAC组(10μg/ml nano-SiO2+3μm DAC)暴露后细胞基因组DNA整体甲基化变化趋势,以Real-time Q-PCR和Western blot方法检测DNMT1的mRNA和蛋白的表达变化。结果与对照细胞组相比,5-甲基胞嘧啶免疫荧光强度逐渐降低,在nano-SiO2致HaCaT细胞损伤的过程中,DNA的总体甲基化程度有随nano-SiO2浓度升高而降低的趋势,同剂量的纳米暴露组与溶剂对照组及微米级对照组相比具有更低的基因组DNA甲基化水平。流式细胞定量分析实验结果显示,溶剂对照组的平均荧光荧光强度为153.43,不同浓度的nano-SiO2处理细胞24 h(2.5,5和10μg/ml)后,其平均荧光强度分别为76.32,53.26和55.16,溶剂对照组和微米对照组(Micro-SiO2)的甲基化程度差异没有统计学意义。DNMT1的mRNA和蛋白表达水平一致,在细胞暴露于nano-SiO2过程中,DNMT1表达呈下降趋势。结论本试验条件下,基因组DNA甲基化水平的降低可能与DNMT1水平降低有关。

核因子-κB介导肿瘤相关巨噬细胞对骨肉瘤增长的影响及其作用机制的实验研究

目的探讨核因子-κB(NF-κB)介导肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)对骨肉瘤增长的影响及其作用机制。方法选取4~6周无特定病原体级Balb/c雄性裸鼠15只,数字表法随机分为人骨肉瘤MG63细胞组、人单核巨噬细胞系THP-1细胞组、MG63+THP-1混合细胞组3组,每组5只。于裸鼠右侧腋窝皮下注射浓度为1.0×10^8/mL的不同细胞悬液制备裸鼠成瘤模型:MG63细胞组裸鼠每只注射MG63细胞悬液0.2 mL,THP-1细胞组裸鼠每只注射THP-1细胞悬液0.2 mL,MG63+THP-1混合细胞组裸鼠每只注射MG63+THP-1混合细胞悬液(9∶1)0.2 mL。注射细胞后每天观察各组裸鼠是否出现移植瘤,从MG63组和MG63+THP-1混合细胞组均出现移植瘤当天开始,用游标卡尺测量移植瘤的长径和短径,并计算移植瘤体积,此后每5天测量1次,对比不同时间各组移植瘤生长情况;注射细胞后第25天处死裸鼠,剥离移植瘤,对比各组移植瘤质量。将移植瘤置于10%甲醛中固定,制备石蜡切片,采用HE染色,观察各组移植瘤的肿瘤特征改变;采用免疫组织化学SP染色,观察各组移植瘤中核转录因子NF-κB蛋白的表达情况;采用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件定量分析比较各组移植瘤中NF-κB蛋白的表达水平。结果THP-1细胞组裸鼠没有形成移植瘤。MG63+THP-1混合细胞组和MG63细胞组的裸鼠分别从注射细胞后第7天、第10天开始腋窝皮下可触及移植瘤,且随时间增加,肿瘤体积逐渐增大;第10、15、20和25天MG63+THP-1混合细胞组裸鼠移植瘤体积分别为(474.4±56.1)、(945.0±79.7)、(2 886.0±462.3)、(3 319.6±388.4)mm^3,均明显大于MG63细胞组的移植瘤体积(233.3±28.2)、(669.6±75.9)、(1 464.0±135.2)、(2 068.0±223.2)mm^3,差异均有统计学意义(t=3.536、2.504、2.952、2.794,P值均<0.05)。在种植细胞后第25天处死裸鼠,MG63+THP-1混合细胞组移植瘤质量(0.920±0.134)g,明显大于MG63细胞组(0.544±0.079)g,差异有统计学意义(t=2.404,P<0.05)。移植瘤HE染色显示,MG63细胞组和MG63+THP-1混合细胞组移植瘤均可见明显的肿瘤特征改变。免疫组织化学SP染色显示,NF-κB蛋白在MG63细胞组和MG63+THP-1混合细胞组移植瘤组织和组织间隙均呈高表达状态;检测NF-κB蛋白表达水平,MG63+THP-1混合细胞组NF-κB蛋白吸光度值(0.362±0.006),明显大于MG63细胞组NF-κB蛋白吸光度值(0.326±0.006),差异有统计学意义(t=9.895,P<0.05)。结论TAMs可以促进骨肉瘤的增长,其作用机制可能与NF-κB蛋白高表达有关。