浅谈在创新驱动发展背景下预防医学的人才培养

随着人们对健康提出新的理解,预防医学在维护人类健康上发挥着越来越大的作用。鉴于我国预防医学的发展相对落后,结合我国创新驱动发展的新战略,针对如何在工作中应用创新思想,本文对在创新驱动发展的背景下预防医学的发展进行了分析讨论,并从制度和人才培养内容两个层面上提出了建议,为预防医学人才培养的发展提供了参考。

杜氏盐藻光系统Ⅱ反应中心蛋白D2基因的克隆及序列分析

根据莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)、Oryza sativa、Chlorella vulgaris以及Me-sostigma viride等真核生物的psbD基因的氨基酸高度保守序列,设计一对简并引物,利用TRIzol试剂提取杜氏盐藻(Dunaliella salina)细胞的总RNA,通过RT-PCR,得到杜氏盐藻cDNA片段的长度大约为1 000bp.该序列的PCR产物经T-A克隆并测序分析以及测序结果推导成氨基酸序列,Blast同源性分析表明所克隆的基因为杜氏盐藻psbD基因,编码杜氏盐藻光系统Ⅱ反应中心D2蛋白,该序列已递交GenBank(GenBank登录号为:DQ074450).编码的氨基酸序列,同源性依次为:Chlamydomonas reinhardtii92%,Nephroselmis olivacea88%,Pinus thunbergii88%,Am-borella trichopoda88%,Chlorella vulgaris88%.通过密码子偏爱性分析表明,psbD基因存在明显的密码子偏爱性,其(A+T)含量明显高于(G+C)含量.

郑州市B19病毒分离株全基因的克隆及序列测定

目的:克隆和测定在郑州市得到的B19病毒分离株全基因序列。方法:采用聚合酶链反应(PCR)技术从1例B19阳性的流产患者血清中分段扩增B19病毒全基因,获得7个互相重叠的片段,分别长814bp(1～814),849bp(753～1601),663bp(1523～2185),738bp(2124～2861),1011bp(2790～3800),1014bp(3747～4760),914bp(4681～5594)。将其分别克隆入T载体,进行测序分析。结果:郑州市B19病毒分离株全基因长5594个核苷酸,有3个开放读码框架(ORF)。第1个ORF位于615～2630位核苷酸,编码672个氨基酸,第2个ORF位于2623～4968位核苷酸,编码782个氨基酸,第3个ORF位于3304～4968位核苷酸,编码555个氨基酸。在该基因中4种碱基在基因组中所占比例为:A,29.58%(1655/5594),T,26.52%(1484/5594),G,22.88%(1280/5594),C,21.02%(1175/5594)。郑州B19病毒分离株基因序列与GenBank中NC_000883高度同源;存在10个碱基改变,只有1个引起氨基酸改变(3752位C→G导致Ser→Cys)。结论:郑州B19病毒分离株和NC_000883属同一基因型。

RNA干扰抑制裸鼠移植瘤中淋巴管生成实验研究

目的研究pSilencer3.1-VEGF-C-siRNA对胃癌移植瘤模型中淋巴管生成的影响及其机制。方法裸鼠皮下接种肿瘤细胞成瘤,不同时间点测定肿瘤体积,肿瘤组织切片免疫组织化学染色、免疫组织化学染色计数淋巴管的密度。结果体内实验结果表明干扰组对肿瘤生长没有明显抑制(P>0.05)。干扰组VEGF-C表达和肿瘤微淋巴管密度明显低于对照组(P<0.05)。结论通过RNA干扰技术抑制VEGF-C基因表达,在裸鼠体内减少肿瘤淋巴管的生成,淋巴管的密度降低。

河南食管癌高发区95对单卵双胞胎疾病谱和2323例食管癌患者家族史调查

目的:通过分析该地区单卵双胞胎食管癌发生特征及食管癌患者家族史调查,加深对食管癌变中遗传和环境因素作用影响的理解。方法:采用流行病学问卷调查和分析食管癌高发区30岁以上95对单卵双胞胎的疾病谱和体质量指数(bodymassindex,BMI),以及食管鳞癌患者家族史。结果:体质量和身高资料完整的21对双胞胎中,12对BMI值一致(BMI值±1)(57%),男女之间无差异。95对双胞胎中,7人发生恶性肿瘤,包括3例食管癌,1例肝癌,2例胆囊癌和1例淋巴瘤。除1对双胞胎同时发生胆囊癌外,其余均为单发。食管癌家族史调查发现9对双胞胎食管癌家族史阳性,3例食管癌患者均为食管癌家族史阳性。在2323例食管癌患者中,林州居民共1172例,食管癌阳性家族史352例(30%);林州以外河南地区共351例,家族史阳性63例(18%);河南省以外800例中,家族史阳性共136例(17%),林州居民食管癌阳性家族史的比例与其他地区间差异有统计学意义,P<0·05。结论:河南林州地区食管癌家族聚集现象明显高于河南其他地区及河南以外地区,河南林州1/3的食管癌患者有明显遗传倾向;环境因素可能仍是食管癌发生的重要因素。

食管和贲门癌及癌前病变患者血清中多个自身抗体的检测及其临床意义

目的:探讨食管和贲门癌及癌前病变患者血清中多个肿瘤相关自身抗体的变化特征及其在食管和贲门癌高危人群筛查和早期诊断中的意义。方法:应用间接酶联免疫反应法和肿瘤相关抗原微阵列(包含8个重组的癌抗原蛋白:C-myc、p53、cyclinB1、p16、p62、Koc、IMP1和Survivin)检测376例食管和贲门各级病变患者(正常、癌前病变和癌)血清中的自身抗体。结果:在所检测的八种抗原中,p53、C-myc、cyclinB1、IMP1和p62从正常食管到癌前病变及癌患者血清中和p53、C-myc、p16、p62在正常贲门到癌前病变及癌患者血清中阳性百分率均具有线性升高趋势。单一抗体对食管和贲门癌检出率较低,p53在癌血清中的表达阳性率在所有抗原中最高,在食管癌和贲门癌患者中分别为23%(13/57)和21%(9/43)。但是,当应用8个抗原分析时,至少有1个反应为阳性时,其检出阳性率明显增高,食管和贲门癌的阳性检出率分别提高到63%(36/57)和61%(26/43),上述检测指标在正常食管和贲门与相应各级癌前病变和癌患者阳性表达率差异有统计学意义,P<0·05。结论:联合应用多个肿瘤相关抗原比应用单个肿瘤相关抗原分析食管和贲门癌及癌前病变患者血清中的自身抗体变化能够提高癌和癌前病变患者的检出率。食管和贲门癌多个相关抗原微阵列的进一步优化有可能成为临床上食管和贲门癌和高危人群检测和早期诊断的非侵袭性方法。

人食管鳞癌及正常食管组织中Notch1基因的mRNA及蛋白的表达

采用RT-PCR方法,分别从人食管鳞癌及正常食管组织中扩增Notch1基因,结果表明Notch1基因在人食管鳞癌及正常食管组织中均有表达.此外,通过免疫组织化学方法检测不同病理特征的35例食管鳞癌、16例原位癌及35例癌周正常食管粘膜上皮组织Notch1蛋白表达的变化,结果显示:Notch1蛋白在正常食管粘膜上皮组织和原位癌中的阳性率分别为82.9%、68.7%,二者无显著性差异(P>0.05),但均显著高于食管鳞癌组织37.1%(P<0.05);食管鳞癌Notch1蛋白的低表达与肿瘤的直径、分期和发生部位无关(P>0.05),但与淋巴结转移有关(P<0.05).这表明在正常食管粘膜上皮组织中Notch1蛋白高表达,而在食管癌鳞中Notch1蛋白呈现低表达或不表达.该研究为进一步探明Notch1基因的表达对食管癌细胞的发生、发展的影响奠定了良好的基础.

Notch1信号途径在食管鳞癌细胞株EC9706的作用研究

目的:研究Notch1基因在食管癌细胞株中的表达及其对食管鳞癌细胞EC9706凋亡的影响。方法:通过免疫细胞化学检测Notch1基因在EC9706细胞中的表达。通过RT-PCR扩增Notch1基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-Notch1,转染EC9706细胞,利用Western blotting检测转染pcDNA3.1-Notch1载体12h,24h,48h,72h的食管癌细胞株与转染空载体食管癌细胞株中Notch1的表达,并观察每一时期食管癌细胞株的凋亡情况。结果:在食管癌细胞株中Notch1基因低表达,此外,转染Notch1后的细胞株Notch1表达量与转染空载体相比有明显差异(F=80.442,P<0.05)。经组间两两比较,实验组食管癌细胞株的Notch1的表达量在12h时比对照组食管癌细胞株的表达量显著增高(P<0.01),前者约为后者的4.6倍。但48h至72h时Notch1表达量实验组与对照组食管癌细胞株无显著性差异(P>0.05)。进一步通过倒置显微镜发现48h至72h细胞出现大量凋亡的现象。上述结果说明12hNotch1表达量的增加,使食管癌细胞EC9706中的Notch1信号途径得以激活,该途径激活后导致48h到72h时的细胞大量凋亡。结论:Notch1在食管癌细胞中的激活引起细胞大量凋亡,提示Notch1基因有可能成为治疗食管癌的新靶点。

河南林州食管癌高发区食管癌和癌前病变患者血清蛋白质质谱

背景与目的:食管癌和癌前病变组织中部分分子改变可在血液中反映出来,但这些指标的灵敏度和特异性较低,临床应用受到限制。血清蛋白质质谱分析技术有助于筛选癌变密切相关蛋白。本研究通过探讨食管癌高发区人群食管正常粘膜(normal,NOR)、食管上皮基底细胞过度增生(basalcellhyperplasia,BCH)、不典型增生(dysplasia,DYS)和食管癌(esophagealcarcinomc,EC)患者的血清蛋白质质谱的变化特征,为筛选和建立早期诊断和高危人群检测的血清学指标提供理论依据。方法:采用弱阳离子结合芯片(WCX2)及表面增强激光解吸电离飞行时间质谱仪(SELDI-TOF-MS)检测EC高发区无症状普查人群130人(NOR63人、BCH40人、DYS27人)和高发区EC30人的血清蛋白质质谱进行分析。应用BiomarkerPattern软件建立决策树分类模型,经10倍交叉验证得到该分类模型进行验证,测试组病变人群的诊断率和特异性(排除率)。结果:BCH组质荷比(M/Z)为M9306.61u的一种、DYS组M/Z为M13765.90u的一种及EC组M/Z为M2942.15u和M15953.40u的两种蛋白质分别建立决策树分类模型,训练组BCH、DYS和EC的敏感性(检出率)分别为57.5%(23/40)、88.8%(24/27)和96.6%(29/30),特异性分别为96.8%(61/63)、63.4%(40/63)和92.0%(58/63);测试组BCH、DYS和EC敏感性分别为57.5%(23/40)、66.6%(18/27)和60.0%(18/30),特异性为95.2%(60/63)、71.4%(45/63)和84.1%(53/63)。结论:M/Z为M9233.09u、M13657.15u、M2918.91u和M15827.37u的4种蛋白质可能包含有可用于食管癌高发区人群筛查的血清标记物,血清蛋白质质谱检测为食管癌和癌前病变的诊断和筛查提供了新的手段。

原子吸收光谱法测定红细胞锌

目的 :建立一种测定红细胞锌的方法。方法 :取一定体积的红细胞 ,低渗破膜 ,原子吸收光谱法测定锌。结果 :相对标准偏差为 0 .86 %～ 1 .86 %。回收率为 94 .6 7%～ 97.6 0 %。结论 :方法简便 ,精密度好 ,准确度高 。

雷帕霉素对食管鳞癌细胞系EC9706的mTOR/p70S6K信号通路的影响

目的:观察雷帕霉素(rapamycin,rapa)对食管鳞癌细胞系EC9706的m TOR/p70S6K信号通路的影响。方法:采用免疫细胞化学证实mTOR/p70S6K信号通路的存在,然后通过DNA Ladder、RT-PCR、Western blot及流式细胞术分别从DNA、RNA、蛋白及细胞水平研究rapa对细胞凋亡和信号通路的影响。结果:免疫细胞化学结果显示,在细胞核及细胞质中mTOR均呈阳性;rapa处理后有明显DNA Ladder产生,且mTOR的mRNA水平及蛋白水平下调。但是,mTOR下游的直接靶点p70S6K的mRNA水平及蛋白水平则升高,二者的变化程度均与rapa剂量的相关;流式细胞术检测结果表明,rapa可使细胞停滞于G_1期。结论:食管鳞癌细胞系EC9706中存在mTOR/p70S6K信号通路并且处于激活状态,rapa能明显促进细胞凋亡并抑制该通路激活,从而间接抑制翻译的进行。

食管癌及癌前病变中NF-κB p65/p50蛋白的表达

目的探讨核转录因子NF-κB p65/p50蛋白在食管癌与癌前病变组织的变化特征及其生物学意义。方法采用免疫组化ABC法检测食管癌手术标本的NF-κB p65/p50蛋白表达状况并分析其特征。结果NF-κB p65/p50在正常食管鳞状上皮组织无表达,而在基底细胞增生(38%/32%)、间变(54%/46%)、原位癌(53%/47%)和鳞状细胞癌(69%/62%)均出现不同程度的阳性表达,并随病变进展,阳性表达率明显升高。而基底细胞增生与鳞癌之间表达率差异有显著性(P<0·05)。NF-κB p65/p50在食管鳞癌中表达有异质性。结论NF-κB p65/p50蛋白表达变化是食管癌和癌前病变组织常见的分子事件,可能在食管鳞癌癌变过程中起一定作用。

反相高效液相色谱法测定野生四叶参中氨基酸

目的：建立测定野生四叶参中氨基酸含量的反相高效液相色谱法（RP-HPLC）。方法：用盐酸水解大别山区野生四叶参中的蛋白质。采用反相高效液相色谱法，色谱条件为：色谱柱：Hypersil ODS-BP C18柱（4．6mm×250mm，5μm）；流动相A：醋酸-醋酸钠缓冲液（pH=7．2）；流动相B：甲醇，流速1．0mL／min，流动相采用梯度洗脱方式，荧光检测波长为450nm。分析四叶参中各种氨基酸含量。采用外标法定量。结果：氨基酸在25．0～800.0μmol／L范围内浓度与色谱峰面积有良好的线性关系（r≥0．993），该方法的回收率在89．5％～109．2％，RSD在3．2％～9．0％，检测限在1，0～3．7μmol／L。野生四叶参中含有12种氨基酸，总氨基酸含量为51．49mg／g，必需氨基酸含量为6．95mg／g。结论：建立的分析方法精密度好、准确度高，适用于野生四叶参中氨基酸含量的分析。

杜氏盐藻分子生物学最新进展及展望

杜氏盐藻是一种无细胞壁的单细胞双鞭毛真核藻类,是一种十分重要的藻类资源。过去对杜氏盐藻的研究多集中在形态学、耐盐机理及β-胡萝卜素等方面,近年来,随着藻类基因工程的快速发展,国内外在杜氏盐藻分子生物学方面做了大量工作,现就杜氏盐藻在这一领域的研究进展进行综述,主要是重要功能基因的克隆与分析、杜氏盐藻调控序列的研究以及杜氏盐藻作为宿主表达外源基因等。

火焰原子吸收光谱法测定儿童微量全血锌

目的 :建立一种儿童微量全血锌的测定方法。方法 :对 2 4 6名郑州市 1～ 6岁正常儿童采指端末梢血 2 0μl,火焰原子吸收光谱法测定全血锌。 结果 :在最佳测定条件下锌回收率为 96 .0 0 %～ 98.33% ,相对标准偏差 (RSD)为 2 .6 1%～ 5 .76 %。 1～ 3岁微量全血锌为 (6 1.6 3± 5 .0 8) μmol/L ;3～ 6岁为 (71.4 7± 5 .18) μmol/L。 结论 :火焰原子吸收光谱法简便、快速、准确。采血样量少 ,儿童易接受 ,且能满足科研、临床对儿童血锌测定的需要。

人羊膜间充质干细胞移植对阿尔茨海默病转基因小鼠的行为学和β-淀粉样蛋白的影响

背景:研究发现APP基因与阿尔茨海默病发病密切相关。β-淀粉样蛋白是阿尔茨海默病患者脑内老年斑的主要成分,基因突变和外界环境的影响能破坏β-淀粉样蛋白的动态平衡,从而引发或加速阿尔茨海默病的产生和发展。目的:探讨人羊膜间充质干细胞尾静脉移植对阿尔茨海默病转基因小鼠学习记忆能力及脑组织β-淀粉样蛋白表达的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-05/10在郑州大学微生物学与免疫学教研室和河南省中医药治疗研究院完成。材料:健康剖宫产产妇志愿捐献的羊膜,由郑州大学第一附属医院产科提供。APP转基因鼠29只,PCR技术鉴定转APP-基因小鼠9只,作为正常组;转APP+基因小鼠20只,随机分为细胞移植组、对照组,10只/组。方法:无菌条件下体外分离培养人羊膜间充质干细胞,传至第3代将细胞浓度调整为1×109L-1,经尾静脉注入0.5mL至细胞移植组小鼠体内;对照组经尾静脉注入同体积的生理盐水;正常组小鼠不给予任何干预措施。主要观察指标:采用Morris水迷宫测定小鼠逃避潜伏期、穿越平台次数及在平台象限的时间,刚果红染色观察小鼠脑组织内β-淀粉蛋白的表达。结果:定位航行试验中,移植前与正常组比较,细胞移植组、对照组小鼠逃避潜伏期差异均有显著性意义(P<0.05);移植后2周细胞移植组小鼠逃避潜伏期与正常组基本相似(P>0.05),但明显短于对照组(P<0.05)。空间探索试验中,移植前后小鼠穿越平台次数及其在平台象限的时间3组间比较差异均无显著性意义(P>0.05)。移植后1个月,正常组未见或仅见极少量的β-淀粉样蛋白沉积,细胞移植组淀粉样蛋白的沉积明显少于对照组。结论:人羊膜间充质干细胞尾静脉移植能促进阿尔茨海默病转基因小鼠空间定位及学习记忆能力的提高,且减少小鼠脑内β-淀粉样蛋白的沉积。

内镜套扎黏膜切除术治疗食管贲门早期浅表癌

目的评价内镜套扎黏膜切除术和单独内镜套扎术治疗食管、贲门早期浅表癌的疗效。方法在食管癌高发区人群普查确诊的14例食管、贲门早期浅表癌中,7例采用内镜圈套结扎后行黏膜切除术,另外7例接受了单独内镜圈套结扎治疗。根据切除标本和治疗1个月后内镜复查活检标本病理组织学检查结果评价其疗效。结果癌灶完全切除者13例(92.86%),部分切除者1例(7.14%)。无创面出血和穿孔并发症。完全切除的13例病人随访16个月未见复发。结论内镜套扎黏膜切除术和单独内镜套扎术均是治疗食管、贲门早期癌安全有效的方法,后者便于在基层医院推广应用。

食管癌前病变和癌组织中p15、p16、mdm2和p53蛋白的表达

目的:探讨食管癌高发区河南林州市食管癌患者p15、p16、mdm2和p53的表达变化特征及其与各级病变的关系。方法:取食管癌高发区河南林州市居民156例的食管内镜黏膜活检组织(包括正常食管上皮(NOR)21例,基底细胞过度增生(BCH)45例,不典型增生(DYS)23例,原位癌组织(CIS)45例和鳞状细胞癌(SCC)22例),采用免疫组化ABC法分析p15、p16、mdm2和p53蛋白的表达情况。结果:NOR和各级癌前病变组织及SCC组织中均出现不同程度的p15、p16、mdm2和p53表达。随着病变发展(从NOR→BCH→DYS→CIS→SCC),p15和p16的表达逐渐降低,mdm2和p53的表达逐渐增高(P<0.05)。结论:p15、p16的低表达和p53、mdm2的高表达可能是导致病变持续向癌方向发生发展的机制之一。

五味子酮对APP转基因鼠神经干细胞分化中Tau蛋白过磷酸化水平的影响

背景:华中五味子酮有强的抗氧化活性,可高效清除羟自由基和超氧阴离子,对处于活性氧应激状态下的细胞具有保护作用。神经元内神经原纤维缠结主要是由异常磷酸化的Tau蛋白组成,与阿尔茨海默病的严重程度呈正相关。目的:探讨五味子酮在APP转基因小鼠神经干细胞诱导分化成神经细胞的过程中对Tau蛋白磷酸化的作用。设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2006-07/2008-10在郑州大学医学实验中心完成。材料:自中国协和医科大学遗传动物中心购得APP基因突变小鼠30只,五味子酮由河南省中医研究院药物所提供。方法:剪取新生APP转基因小鼠尾尖,常规提取DNA,采用PCR法检测动物是否携带有APP基因,APP转基因阳性鼠记为"APP+",APP转基因阴性鼠记为"APP-"。分别取APP+鼠和APP-鼠海马部位脑组织,体外分离培养神经干细胞,并将纯化的神经干细胞向神经细胞方向诱导分化。将从APP+鼠来源的细胞分为五味子酮组、APP+细胞对照组,将APP-鼠来源的细胞设为APP-细胞对照组。五味子酮组向细胞培养液中加入终浓度为50μmol/L的五味子酮溶液,余2组加入相同容积的PBS,培养24h。主要观察指标:免疫荧光化学和免疫印迹分析测定APP+、APP-细胞Tau蛋白在262、396位点的磷酸化水平。结果:与APP+细胞对照组比较,五味子酮组细胞荧光强度减轻,Tau[Ps262]、Tau[Ps396]的磷酸化水平均降低,且Tau[Ps396]位点的磷酸化水平降低尤为明显。APP-细胞对照组Tau[Ps262]、Tau[Ps396]磷酸化水平均较低。结论:在APP转基因小鼠神经干细胞诱导分化过程中,五味子酮可以明显降低Tau蛋白在396、262位点的磷酸化水平,减轻神经元损伤,但其磷酸化程度并未达到阴性细胞水平。