Notch1信号途径在食管鳞癌细胞株EC9706的作用研究

目的:研究Notch1基因在食管癌细胞株中的表达及其对食管鳞癌细胞EC9706凋亡的影响。方法:通过免疫细胞化学检测Notch1基因在EC9706细胞中的表达。通过RT-PCR扩增Notch1基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-Notch1,转染EC9706细胞,利用Western blotting检测转染pcDNA3.1-Notch1载体12h,24h,48h,72h的食管癌细胞株与转染空载体食管癌细胞株中Notch1的表达,并观察每一时期食管癌细胞株的凋亡情况。结果:在食管癌细胞株中Notch1基因低表达,此外,转染Notch1后的细胞株Notch1表达量与转染空载体相比有明显差异(F=80.442,P<0.05)。经组间两两比较,实验组食管癌细胞株的Notch1的表达量在12h时比对照组食管癌细胞株的表达量显著增高(P<0.01),前者约为后者的4.6倍。但48h至72h时Notch1表达量实验组与对照组食管癌细胞株无显著性差异(P>0.05)。进一步通过倒置显微镜发现48h至72h细胞出现大量凋亡的现象。上述结果说明12hNotch1表达量的增加,使食管癌细胞EC9706中的Notch1信号途径得以激活,该途径激活后导致48h到72h时的细胞大量凋亡。结论:Notch1在食管癌细胞中的激活引起细胞大量凋亡,提示Notch1基因有可能成为治疗食管癌的新靶点。

雷帕霉素对食管鳞癌细胞系EC9706的mTOR/p70S6K信号通路的影响

目的:观察雷帕霉素(rapamycin,rapa)对食管鳞癌细胞系EC9706的m TOR/p70S6K信号通路的影响。方法:采用免疫细胞化学证实mTOR/p70S6K信号通路的存在,然后通过DNA Ladder、RT-PCR、Western blot及流式细胞术分别从DNA、RNA、蛋白及细胞水平研究rapa对细胞凋亡和信号通路的影响。结果:免疫细胞化学结果显示,在细胞核及细胞质中mTOR均呈阳性;rapa处理后有明显DNA Ladder产生,且mTOR的mRNA水平及蛋白水平下调。但是,mTOR下游的直接靶点p70S6K的mRNA水平及蛋白水平则升高,二者的变化程度均与rapa剂量的相关;流式细胞术检测结果表明,rapa可使细胞停滞于G_1期。结论:食管鳞癌细胞系EC9706中存在mTOR/p70S6K信号通路并且处于激活状态,rapa能明显促进细胞凋亡并抑制该通路激活,从而间接抑制翻译的进行。

杜氏盐藻分子生物学最新进展及展望

杜氏盐藻是一种无细胞壁的单细胞双鞭毛真核藻类,是一种十分重要的藻类资源。过去对杜氏盐藻的研究多集中在形态学、耐盐机理及β-胡萝卜素等方面,近年来,随着藻类基因工程的快速发展,国内外在杜氏盐藻分子生物学方面做了大量工作,现就杜氏盐藻在这一领域的研究进展进行综述,主要是重要功能基因的克隆与分析、杜氏盐藻调控序列的研究以及杜氏盐藻作为宿主表达外源基因等。

Kringle5的真核植物细胞穿梭表达载体的构建

目的 :构建含有目的基因kringle5的真核植物细胞穿梭表达载体。方法 :应用RT PCR方法 ,从正常人肝脏组织中获得kringle 5基因 ,测序后 ,再通过DNA重组技术 ,将kringle 5基因片段克隆到真核植物细胞表达载体pBI12 1和pCAMBIA330 1上。结果 :得到的kringle 5基因序列测定结果与文献相符 ,重组载体pB1k5和pC33k5经酶切鉴定正确 ,含有植物高效表达CaMV35S启动子。结论 :重组载体pB1k5和pC33k5不仅可以在大肠杆菌中稳定复制 。

人尿血管抑素测定方法的建立及在肿瘤患者中的应用

目的:建立一种测定人尿液中血管抑素的方法,并探讨其在肿瘤患者中测定的意义。方法:依据ELISA的原理和技术要求,以赖氨酸作固相包被物,血管抑素为标准品,抗入K1～3的单抗为特异性的一抗,制备测定血管抑素的ELISA试剂盒。用此方法测定40例健康人(正常对照组)、92例恶性肿瘤(31例肺癌、31例食管癌、30例乳癌)患者治疗前尿中血管抑素含量。结果:该ELISA方法检测人尿中血管抑素的检出范围为1～200μg/L。正常对照组中尿血管抑素含量为0～27.4μg/L,x±s(16.15±6.82)μg/L。3种肿瘤患者尿中血管抑素平均水平均高于正常对照组(P<0.05),肺癌、食管癌、乳癌的诊断符合率分别为77.4％、71.0％和70.0％,其间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:该方法操作方便,敏感性、特异性高;人尿中血管抑素含量检测可用于某些肿瘤的检出。

微藻异养产生二十碳五烯酸的新进展

二十碳五烯酸 (Eicosapentaenoicacid简写EPA)是一种长链多不饱和脂肪酸 ,在营养强化、防治心血管疾病、减轻炎症等方面起着十分重要的作用。目前EPA主要来源于鱼油 ,很难满足市场对EPA日益增长的需求 ,必须寻求替代生产EPA的资源。一些微藻可在不需要光的条件下以廉价的有机物为原料异养生长 ,在异养条件下 ,可以很好地控制培养模式 ,有可能大规模地生产EPA。工业上用微藻生产EPA研究包括 :筛选高EPA产量的微藻株 ,通过基因工程改善藻株 ,优化培养条件以及建立有效的培养体系。本文综述了近几年微藻在异养条件下生产EPA的最新进展 。