MAGE-3目的基因原核表达载体的构建和表达

目的构建原核表达载体pGEX-4T-1-MAGE-3并检测其在大肠杆菌(E.coli)BL21中的表达,为制备以黑色素瘤抗原-3(MAGE-3)基因片段为基础的肽疫苗及特异诊断试剂提供抗原打下基础。方法通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法制备MAGE-3目的基因,以pGEM-TEasy为克隆载体,pGEX-4T-1为原核表达载体,将MAGE-3目的基因克隆至pGEM-TEasy载体和亚克隆至pGEX-4T-1载体上。筛选、鉴定阳性克隆并将其转化E.coliBL21.经IPTG诱导,12%SDS-PAGE电泳分离和WesternBlot表达鉴定。结果正确构建了原核重组表达质粒pGEX-4T-1-MAGE-3;在E.coliBL21中检测到含该重组表达质粒的转化菌表达出分子量35kD的融合蛋白;基因测序结果表明,阳性克隆中的MAGE-3目的基因序列与GenBank公布的已知序列完全一致。结论成功构建的原核重组表达载体pGEX-4T-1-MAGE-3及其所表达的融合蛋白,为以MAGE-3目的基因为基础的肽疫苗及特异诊断试剂的研制提供抗原打下了基础;为后续实验提供了依据。

人骨髓间充质干细胞诱导分化为内皮细胞的实验研究

目的探讨将人骨髓间充质干细胞(HBMCs)诱导为内皮细胞(ECs)的可行性。方法将HBMCs分离、培养后,加入诱导因子定向诱导为ECs,并对细胞进行鉴定。结果经鉴定,HBMCs在特定环境下分化为了ECs。结论以HBMCs诱导的ECs作为种子细胞,具有可行性。

3819名消毒供应专科护士职业满意度调查

目的了解医院消毒供应专科护士对从事职业的满意度。方法采用问卷调查的方法对河南省18个省辖市3 819名医院消毒供应专科护士进行调查。结果满意度超过50%者包括:对从事消毒供应职业的满意度为87.01%;是否支持"消毒供应人员在医院地位明显提高"观点者占59.00%;对消毒供应工作环境的满意度为70.00%;是否满意院领导对医院消毒供应工作的态度为86.00%;临床科室对消毒供应工作支持度82.00%;配偶对本人从事职业是否支持为91.00%。满意度低于50%者包括:对工资的满意度为42.00%;是否支持子女从事医院消毒供应职业为38.00%。结论河南省消毒供应专科护士对自己从事职业的满意度总体良好,对工作环境、福利待遇满意度较低,对子女将来从事消毒供应工作的支持率相对较低。卫生行政管理部门应重视消毒供应在医疗服务体系中的作用,逐步建立培养消毒供应专业人才的教育体系。

1例血流感染两种形态大肠埃希菌病例报道

血流感染是一种严重的全身感染性疾病,病原微生物在循环血液中呈一过性、间歇性、持续性存在,对机体造成损害。血培养阳性结果可提供病原学诊断的依据。在革兰阴性杆菌引起血流感染常见病原微生物中大肠埃希菌位居首位,但两种形态大肠埃希菌感染的病例并少见报道,尤其血流感染。

人骨肉瘤mta1 mRNA的siRNA载体构建及其对mta1沉默作用

目的 本实验拟构建针对mta1mRNA的siRNA重组载体,将siRNA对应的DNA发卡样双链序列克隆入载体内,位于H1启动子下游,转染人人骨肉瘤细胞内,在细胞内表达mta1靶向的siRNA分子,特异性沉默mta1的表达.方法 依据GenBank中mta1基因(NM-004689)的序列,用设计分析软件进行设计候选序列,确定针对mta1的siRNA序列.合成mta1发卡样siRNA寡核苷酸,退火成双链DNA,克隆入T载体,利用α互补和T7/SP6 PCR扩增筛选鉴定重组子pGEM-T-mta1;用BglⅡ和HindⅢ双酶切重组子pGEM-T-mta1和siRNA表达载体pSuperneo;将双粘mta1发卡样siRNA片段亚克隆入siRNA表达载体pSuperneo中;利用Bg1Ⅱ和HindⅢ双酶切筛选鉴定重组子pSuperneo-mta1;对插入序列进行DNA序列分析.将siRNA表达载体pSuperneo-mtal转入人骨肉瘤细胞系MG-63中,用RT-PCR方法检测细胞mta1mRNA表达水平.结果 转染pSuperneo-mta1的实验组骨肉瘤细胞中mta1mRNA表达几乎完全被抑制,而2个对照组(无关siRNA对照组和空载体对照组)和未转染的骨肉瘤细胞系MG-63细胞中都存在较高水平的mta1mRNA表达.结论 设计出针对mta1的发卡样siRNA寡核苷酸片段,成功构建出针对mta1的siRNA表达载体pSuperneo-mta1,pSuperneo-mta1转染骨肉瘤细胞后能显著降低细胞mta1mRNA表达.