在病理生理学教学中培养医学生的创新素质

培养医学生的创新素质,是现代医学教育的重要目标。在病理生理学教学过程中,通过提高教师创新意识、实施以问题为中心的教学法、改革传统实验教学等途径,启发了学生的创新思维,增强了学生的创新素质。

病理生理学实验教学与临床结合的探讨

病理生理学实验教学与临床结合有利于培养学生的动手能力和临床思维能力,加深对疾病发生机制的理解。病理生理实验教学通过开展实验设计、巧妙设立问题、典型病例分析与临床结合,激发学生兴趣,为临床教学打下基础。

Tiam1和Rac1在食管鳞癌组织中蛋白表达的相关性及临床病理意义

目的:探讨T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)及Rac GTP酶激活蛋白1(Rac1)的表达与食管鳞癌发生发展、浸润转移的关系.方法:62例食管癌手术切除标本于2006-02-26/03-16取自食管癌高发区河南省安阳市肿瘤医院.应用免疫组织化学SP法检测62例食管鳞癌组织、20例癌旁不典型增生组织及20例正常食管黏膜组织中Tiam1及Rac1蛋白表达.结果:食管鳞癌组织中Tiam1蛋白表达与癌的组织学分级、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期均密切相关(χ2=8.779,7.680,4.502,4.987;均P<0.05);在食管鳞癌癌变过程中Tiam1蛋白表达在正常黏膜组织、癌旁不典型增生组织及癌组织中的表达率依次增高,分别为5.0%(3/20)、55.0%(11/20)、72.6%(45/62),组间比较有明显差异(χ2=20.643,P<0.05);Rac1蛋白表达也与癌的组织学分级、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期均密切相关(χ2=8.652,6.884,8.276,6.371;均P<0.05);Rac1蛋白在正常黏膜组织、癌旁不典型增生组织及癌组织中的表达率依次增高,分别为25.0%(5/20)、70.0%(14/20)、70.0%(44/62),组间比较有明显差异(χ2=14.245,P<0.05).Tiam1及Rac1的表达呈正相关关系(γp=0.642,P<0.05).结论:Tiam1及Rac1可作为食管鳞癌早期诊断和判断预后的辅助指标.

七年制医学生肝胆外科临床实习带教探索

通过总结七年制医学生肝胆外科临床实习带教工作经验,包括制定合理、系统的临床实习计划;加强"三基"训练,强化专业知识培训;利用多种教学手段和教学方法,注重示范带教和学生动手能力训练,培养专业操作兴趣;多学科知识的掌握和新技术、新项目的开展;创新能力和科研意识的培训;培养学生良好的职业道德,树立正确的世界观等,以提高七年制医学生肝胆外科实习教学效果。

肺癌的分子病理学评估进展

肺癌的分子病理学评估是指采用免疫组化、原位杂交和基因测序等多种手段,以明确肺癌分类,确定肿瘤侵袭范围和外科手术切缘的受累程度(如阳性或阴性切缘),区分原发肺癌及转移性肿瘤,还可用于分子诊断性研究,确定是否存在特定基因表达异常或突变,对肺癌预后及疗效进行预测,并据此进行个体化治疗。本文就这方面的进展作一综述。

EGF和bFGF对脐血单个核细胞τ蛋白及微管相关蛋白-2 mRNA表达的影响

目的探讨脐血单个核细胞在细胞因子诱导作用下τ蛋白及微管相关蛋白-2(MAP2)mRNA的表达。方法用密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,接种于含20%胎牛血清H-DMEM培养瓶内。以不加任何生长因子的培养为对照组,其余3组分别加入细胞因子EGF+bFGF、bFGF、EGF,终浓度均为20μg/L。倒置显微镜下观察细胞形态变化,RT-PCR方法检测脐血单个核细胞培养前后τ蛋白及MAP2mRNA,免疫细胞化学方法检测τ蛋白及MAP2阳性细胞。结果培养前,脐血单个核细胞胞体小呈圆形;培养后EGF+bFGF组细胞胞体较大,突起粗而长,EGF组细胞胞体呈梭形,有1-2个长突触,bFGF组细胞胞体较小、有多个细长突起,形似星形细胞,对照组细胞形态类似于bFGF组,但数量较少。RT-PCR检测未培养脐血单个核细胞MAP2mRNA表达阳性而τ蛋白mRNA呈阴性,培养后MAP2mRNA表达增强,τ蛋白mRNA亦呈阳性;免疫细胞化学方法可检测MAP2及τ蛋白阳性细胞在EGF+bFGF组、EGF组、bFGF组、对照组分别为335%、256%、196%、144%和298%、214%、153%、135%。结论脐血单个核细胞中存在的神经元特异性分子,经培养和生长因子调控后表达增强,联合使用bFGF、EGF具有协同作用。

RNAi干扰食管癌EC9706细胞MTA1基因表达对侵袭和迁移的影响

目的采用RNAi抑制食管癌EC9706细胞株MTA1基因的表达,观察对食管癌细胞侵袭和迁移的影响。方法用脂质体包裹转染沉默MTA1表达的siRNA表达载体入食管癌细胞EC9706。定量RT-PCR和免疫印迹分别检测MTA1 mRNA和蛋白表达情况;划痕损伤实验和细胞体外侵袭实验分别测定迁移和侵袭的影响。结果定量RT-PCR检测显示,MTA1基因的表达水平明显降低;转染沉默MTA1的siRNA表达载体组的食管癌细胞划痕未愈合,穿透Matrigel的细胞数量明显减少,与未转染组、转染空载体组和转染无关序列siRNA载体组比较差异有显著性(P<0·05)。结论RNA干扰介导的MTA1基因表达沉寂可有效降低食管癌细胞侵袭和迁移;MTA1基因可能成为肿瘤治疗上有前途的分子靶点。

RASSF1A在食管鳞癌组织中的表达、甲基化状态及其与预后之间的关系

目的:探讨RASSF1A基因的异常表达与食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)发生发展的关系.方法:应用实时RT-PCR方法及实时荧光甲基化特异性聚合酶链反应技术,分别检测49例ESCC患者癌组织及癌旁正常组织中RASSF1A基因的转录表达情况和启动子区域5'-CpG岛的甲基化状态.分析RASSF1A基因在ESCC中的转录表达情况、甲基化状态及与临床病理因素、预后之间的关系.结果:在49例ESCC标本中,有26(53.06%)例RASSF1A mRNA表达下调,RASSF1A mRNA在食管鳞癌组织及相应的癌旁正常组织中的表达存在显著统计学差异(P<0.05),RASSF1A mRNA的表达缺失与ESCC患者的淋巴结转移、临床TNM分期及不良预后均存在显著相关性(均P<0.05);有38(77.60%)例RASSF1A基因启动子区域5'-CpG岛高甲基化,与之相对应的癌旁正常组织中仅有3(6.10%)例,两者差异有统计学意义(P<0.05),RASSF1A基因的高甲基化状态与淋巴结转移、临床TNM分期及不良预后均存在显著相关性(均P<0.05);在26例RASSF1A基因转录表达缺失的ESCC组织中有24例发生了启动子区域5'-CpG岛的高甲基化,RASSF1A基因在ESCC中的转录表达缺失与其启动子5'-CpG岛高甲基化显著相关(P<0.05).结论:RASSF1A基因启动子5'-CpG岛高甲基化在ESCC是一高频分子事件,与该基因的转录表达缺失显著相关,是其转录表达缺失的主要机制之一.

细胞色素C和Survivin在结肠腺癌中的表达及临床意义

目的:研究细胞色素C(Cyt-C)和Survivin在结肠腺癌中的表达及其与临床病理特征的关系,并探讨Cyt-C和Survivin在结肠腺癌中的表达的相关性。方法:采用手工组织芯片技术及免疫组织化学技术(S-P法)检测59例结肠腺癌和10例正常结肠组织中Cyt-C和Survivin的表达水平。结果:Survivin和Cyt-C在正常结肠中的表达率分别为20.0%和30.0%,在结肠腺癌中的表达率分别为69.5%和78.0%,Survivin蛋白和Cyt-C在结肠腺癌中的表达增加(P<0.05);Cyt-C在结肠癌中的表达和肿瘤细胞的分化程度成正相关(P<0.05);Survivin蛋白在结肠癌中的表达和肿瘤细胞的分化程度成负相关(P<0.05);两者与浸润深度,肿瘤的大小,患者的年龄,淋巴结有无转移均无相关性(P>0.05)。结论:Survivin和Cyt-C在结肠癌中表达增加提示Survivin和Cyt-C对结肠癌的发生发展起着重要作用。

RNA干扰靶向沉默polβ基因对人卵巢癌细胞增殖活性及对化疗药物敏感性的影响

目的:探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)沉默DNA聚合酶β(polβ)基因的表达后,人卵巢癌细胞HO-8910的增殖活性变化及对化疗药物顺铂敏感性的改变。方法:利用已构建成功的针对polβ基因的siRNA(small interfering RNA,siRNA)重组质粒,转染人卵巢癌细胞HO-8910,通过荧光倒置显微镜观察转染效率;荧光定量PCR检测转染后HO-8910细胞中polβmRNA的表达水平;用MTT法观察检测基因沉默后HO-8910细胞增殖能力变化;台盼蓝染色细胞计数法了解细胞对顺铂敏感性的变化。结果:已构建的靶向polβ基因的siRNA转染人卵巢癌细胞HO-8910后,荧光倒置显微镜下可见大量绿色荧光颗粒表达;荧光定量PCR检测发现,转染后细胞中polβ的mRNA水平表达显著降低(P<0.01);转染后的HO-8910细胞生长速度减慢、增殖活性下降;对顺铂的敏感性提高(P<0.05)。结论:RNAi有效沉默细胞中polβ基因表达,提高了肿瘤细胞对化疗药物顺铂的敏感性、降低了细胞的增殖活性。从而改善卵巢癌患者的预后,为肿瘤的有效干预和治疗开拓新的领域。

人B7-2瘤苗与DC瘤苗体外联合诱导抗食管癌的作用

目的:研究人B7-2瘤苗和负载了肿瘤细胞冻融抗原的DC瘤苗体外联合诱导抗食管癌的免疫作用.方法:应用脂质体转染技术,将融合基因表达载体pEGFP-N3-B7—2转染人食管癌细胞株EC9706.采用密度梯度离心法从脐血中分离单个核细胞(MNC)后,获得单核细胞(Mo).在细胞因子作用下诱导分化,第3d加入EC9706的冻融抗原,共培养4d后获得负载肿瘤抗原的成熟树突状细胞(MDC).将致敏DC与从脐血中分离的T淋巴细胞共培养3d,获得细胞毒T淋巴细胞(CTL);四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CTL对转染和未转染的EC9706的细胞毒作用.结果:融合基因在食管癌细胞株EC9706的胞膜上定位表达.脐血来源的DC可负载并递呈肿瘤抗原,激活自体T淋巴细胞,诱导肿瘤特异性CTL产生,对转染pEGFP—N3-B7—2的EC9706细胞有显著杀伤作用(F=21.672,P=0.000).结论:人B7—2瘤苗和DC瘤苗体外联合应用,诱导出明显的杀伤食管癌细胞的免疫效应.

K562细胞外泌体诱导特异性CTL生成的研究

为了研究人白血病细胞株K562细胞分泌的外泌体(exosomes)及K562细胞总RNA刺激人树突状细胞(DC)分泌的外泌体能否诱导出K562细胞特异性CTL,采用四步离心法提取K562细胞及K562细胞总RNA刺激人树突状细胞的培养上清液中的外泌体,并诱导CTL生成,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CTL对K562细胞的杀伤作用。结果显示K562细胞外泌体和K562细胞RNA刺激的DC和外泌体均能明显促进对K562细胞的杀伤活性,与未经外泌体作用的对照组相比有显著性差异(P<0.05)。外泌体作用后对K562细胞的杀伤作用明显比对HL-60细胞的杀伤作用强,其差异有显著性(P<0.05)。结论K562细胞外泌体能够诱导出特异性抗白血病细胞的免疫反应。

曲古菌素A对食管癌EC1细胞增殖和细胞周期的影响及其分子机制

目的:探讨不同浓度曲古菌素A对食管癌细胞系EC1细胞增殖、细胞周期的影响及其对细胞周期调控基因p21WAF1/CIP1表达的影响.方法:用0.3,0.5,1.0μmol/L的TSA处理EC1细胞,MTT检测TSA作用24、48h对EC1细胞的抑制作用,流式细胞仪检测0.3,0.5,1.0μmol/L的TSA作用24h后EC1细胞周期的改变,Western blot法检测p21WAF1/CIP1变化.结果:TSA在0.5μmol/L以上时对EC1细胞有抑制作用;0.3μmol/LTSA处理细胞后细胞周期与对照组相比,无明显变化;0.5μmol/LTSA处理EC1细胞后,G0/G1期细胞较对照组明显增加,S期细胞较对照组明显减少(74.56%±1.34%vs62.12%±0.52%;14.52%±1.81%vs27.50%±0.66%,均P<0.05);0.5,1.0μmol/LTSA处理细胞后p21WAF1/CIP1表达明显增加(均P<0.05).结论:一定浓度的TSA对人食管癌细胞EC具有的增殖抑制作用,引起EC1细胞发生G0/G1期阻滞,其部分机制与p21WAF1/CIP1上调有关.

互隔交链孢酚通过PKA-CREB信号通路激活NIH3T3细胞中DNA聚合酶β表达

目的:探讨互隔交链孢酚(AOH)诱导小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3中DNA聚合酶β(DNA polβ)表达增高的分子信号通路。方法:①15μmol/L AOH作用NIH3T3细胞16 h,利用Western blotting方法检测细胞中DNA polβ的表达,并利用磷酸化CREB抗体检测AOH作用后NIH3T3细胞中CREB信号分子是否被激活。②利用PKA-CREB信号通路特异性抑制剂H89预处理NIH3T3细胞1 h,再加入AOH作用,分别检测磷酸化CREB和DNA polβ表达的变化。结果:①与溶剂对照组相比,AOH诱导NIH3T3细胞中DNA polβ表达明显增高,而且磷酸化CREB蛋白含量也明显增加,差异均显著。②用PKA特异性抑制剂H89预处理,可部分抑制NIH3T3细胞中CREB蛋白的磷酸化,并且降低了AOH引起的NIH3T3细胞中DNA polβ的表达增加。结论:PKA-CREB信号通路在AOH诱导的NIH3T3细胞中DNA polβ表达起重要作用。

互隔交链孢霉素对NIH/3T3细胞毒性的作用

目的研究互隔交链孢霉素(altenuene,ALT)对NIH/3T3细胞的毒性作用,为互隔交链孢霉的致癌机制提供理论依据。方法以互隔交链孢酚(alternariol,AOH)为阳性对照,采用形态学观察,噻唑蓝法,生长曲线,流式细胞术(FCM)等方法检测不同浓度的ALT对NIH/3T3细胞生长的影响及细胞周期的改变。结果ALT对NIH/3T3细胞的半数抑制率为76.4、50和100μmol/L的ALT染毒24 h可使NIH/3T3细胞生长曲线明显下降,并有明显的形态学改变;以10.0、20.0和50.0μmol/L的ALT染毒24 h后,与对照组比较,G2/M期细胞比例增加,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论ALT对NIH/3T3细胞有毒性作用,可抑制细胞增殖并诱导G2/M期细胞阻滞,其细胞抑制作用可能与细胞周期阻滞有关。

转染pcDNA3-hCEA的人树突状细胞抑制MGC803裸鼠移植瘤的生长

目的:探讨转染癌胚抗原基因pcDNA3-hCEA的人树突状细胞(DC)对胃癌细胞MGC803裸鼠移植瘤生长的影响.方法:采用细胞因子rhIL-4和rhGM-CSF诱导培养法制备人外周血DC,并用L ipofectine向人DC转染pcDNA3-hCEA.RT-PCR检测转染人CEA真核表达质粒的表达.使用DC(pcDNA3-hCEA)疫苗体外诱导人T淋巴细胞靶向性杀伤反应,并在体内实验中观察DC(pcDNA3-hCEA)对MGC803在裸鼠上致瘤性的影响.结果:针对特定引物DC(pcDNA3-hCEA)在588 bp处有CEA片段的表达;DC(pcDNA3-hCEA)能够诱导的人T淋巴细胞靶向性杀伤活性(%),在效靶比分别为10∶1,20∶1,40∶1时的结果为19.4±3.8,24.7±3.7,38.1±5.4;DC(pcDNA3-hCEA)能显著抑制MGC803的生长,其肿瘤生成日期较对照组延长(中位数10 dvs6 d,n=5),瘤体生长速度较对照组缓慢,d 23瘤体体积明显小于对照组[(0.24±0.10)cm3vs(0.65±0.17)cm3,(1.36±0.42)cm3,n=5,P<0.05].结论:转染pcDNA3-hCEA的人DC能有效抑制MGC803在裸鼠体内的生长.

简便高效的原代HUVECs培养

目的建立简便高效的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）体外分离、培养、冻存方法,以获得大量HUVECs为相关医学基础研究及组织工程学提供良好细胞来源。方法新鲜脐静脉内灌注0.25%胰蛋白酶消化,获得HUVECs,内皮细胞培养基（ECM）进行培养。倒置显微镜观察细胞形态,免疫细胞化学、RT-PCR检测VWF、CD144的表达。HUVECs加入10%甘油的冻存液,置于液氮保存4周,冻存复苏后Western blot检测VWF、CD144蛋白水平的表达。结果HUVECs体外生长2-3 d可铺满单层,细胞呈梭形,漩涡状排列生长,传代后可见管腔样结构;高表达VWF和CD144;冻存后复苏的细胞分裂增殖旺盛,蛋白水平高表达VWF、CD144。结论脐静脉灌注胰蛋白酶消化法配合ECM培养可获取大量高纯度的内皮细胞,可作为相关研究良好的细胞来源。

靛玉红甲肟对人食管癌细胞株EC-1和Kyse70体外增殖和细胞周期的影响

目的:探讨靛玉红甲肟(indirubin-3'-monoxime)对体外培养的人食管癌细胞株EC-1和Kyse70细胞增殖和细胞周期的影响。方法:不同浓度靛玉红甲肟处理食管癌EC-1和Kyse70细胞后,采用MTT法检测细胞的增殖活性,FCM法和RT-PCR法检测细胞周期分布及bcl-2和bax mRNA表达的变化。结果:靛玉红甲肟对人食管癌细胞EC-1和Kyse70的生长具有明显的抑制作用,且表现为剂量依赖性和时间依赖性(P<0.05)。FCM法检测发现,以5μmol/L的靛玉红甲肟对EC-1细胞处理24、48和72h后,G0/G1期细胞比例逐渐下降(P<0.05),S期细胞比例未见明显改变,G2/M期细胞比例逐渐上升(P<0.05),呈时间依赖性。RT-PCR法检测发现人食管癌细胞bcl-2和bax mRNA比例呈时间依赖性下调。结论:靛玉红甲肟对人食管癌细胞EC-1和Kyse70具有明显的增殖抑制作用。

Pinl抑制剂Juglone对食管癌EC1细胞增殖的抑制作用

目的:测定Pinl抑制剂(Juglone)对食管癌细胞EC1生长增殖的影响,探讨Juglone的抗肿瘤作用.方法:体外培养人食管癌细胞系EC1,用MTT试验观察细胞生长增殖状况,流式细胞仪检测细胞周期以及细胞凋亡.结果:MTT试验表明,Juglone对EC1细胞生长有明显的抑制作用,且抑制作用随作用浓度和作用时间增加而增强.流式细胞仪检测表明,加入Juglone培养48h后,EC1细胞出现G2期阻滞.Juglone药物(10、20、30μmol/L)培养48h后,EC1细胞的凋亡率明显增加,与对照组相比有统计学意义(9.06%,32.88%,53.18%vs8.77%,均P<0.05).结论:Pinl抑制剂Juglone可以通过抑制Pinl表达从而抑制食管癌细胞的增殖,Pinl抑制剂有望成为新型的抗肿瘤治疗靶点.