MMP与妊高征胎盘血管重铸

滋养细胞重铸障碍足妊娠高血压综合征(PIH)发病的重要环节,基质金属蛋白酶(MMP)是滋养细胞在重铸过程中分泌的重要酶类,其分泌的改变可能是PIH滋养细胞分化异常的外在表现。

用TCRβ链可变区谱型图分析疾病中T淋巴细胞克隆的变化

T细胞是通过T细胞受体(Tcellreceptor,TCR)识别抗原,根据基因重排所产生的TCRβ链可变区(BV)基因可以将T细胞克隆分为24个基因家族。利用T细胞表面的TCRBV片段的不同可以建立TCRBV基因谱型图,分析并识别具有不同功能的T细胞克隆,了解各种T细胞克隆在恶性疾病及自身免疫性疾病中的功能和增殖情况。体外扩增具有特异性抗肿瘤活性的T细胞,再将其输给患者,有可能发展为肿瘤免疫治疗的新方法。通过对TCRBV的基因特征分析,可以发展抗TCR的单克隆抗体或者DNA疫苗抑制自身免疫病相关性或者肿瘤性T细胞生长,以治疗这些难治性疾病。TCR转基因技术还能使普通T细胞修饰成抗肿瘤T细胞。本文就T细胞受体特征、TCRBV基因谱型分析方法、TCRBV片段与自身免疫性疾病、血液病中增殖的T细胞克隆,识别肿瘤抗原肽的T细胞的寡克隆增生和TCRBV谱型分析与骨髓移植作一概述。

子宫腺肌病中细胞凋亡和增殖状况及其相关基因表达研究

目的:探讨子宫腺肌病组织中细胞凋亡和增殖状况,及其相关调控基因survivin和PCNA在其中表达的意义。方法:应用免疫组化SP法,检测了30例子宫腺肌病患者的在位和异位子宫内膜及25例正常子宫内膜组织中survivin和PCNA的表达。结果:survivin蛋白在正常子宫内膜及腺肌病在位内膜分泌晚期的腺上皮细胞内有表达,而在增殖期无表达。在子宫腺肌病月经各期的异位内膜中,survivin蛋白持续表达,无周期性变化,其表达高于在位内膜及对照组内膜差异有显著性(P<0.05)。PCNA组织学评分在子宫腺肌病异位内膜,在位内膜以及对照组内膜,三组腺上皮细胞间有显著差异(P<0.05)。结论:腺肌病子宫内膜细胞凋亡减弱的同时增殖能力增强,可能是子宫腺肌病的发病机理之一。

丹参注射液治疗骨内高压症的实验研究

将30个骨内高压症兔模型随机分为治疗组和对照组各15只,分别肌注等量丹参注射液2 m l(含丹参3 g)和等量生理盐水。结果治疗组双侧骨内压比较,P>0.05,病变侧骨髓超微结构近似正常;对照组病变侧骨内压明显高于正常侧,P<0.001,骨髓超微结构明显处于病理状态。提示丹参治疗骨内高压症作用确切。

血管内皮生长因子和血小板衍生生长因子在子宫内膜癌中的表达及其与血管生成的关系

目的探讨子宫内膜癌中原癌基因血管内皮生长因子（VEGF）、血小板衍生生长因子（PDGF）的表达与临床病理参数和血管生成的关系。方法采用免疫组织化学的方法检测50例子宫内膜癌中VEGF、PDGF的表达,利用Ⅷ因子相关抗原标记血管内皮细胞,选择能代表肌层浸润深度的切片进行染色。结果子宫内膜癌中VEGF、PDGF的表达显著高于正常子宫内膜,VEGF的表达与临床分期、组织分化程度、肌层浸润深度显著相关。结论VEGF、PDGF可能通过诱导血管生成而促进子宫内膜癌的发生发展。

脊髓栓系综合征诊断及显微手术治疗

目的 探讨小儿脊髓栓系综合征(TCS)的诊断及治疗。方法 对收治的TCS患儿52例,从临床表现、手术方法及疗效方面进行分析。结果 圆锥位置与B型超声、MRI一致,椎管内脂肪瘤皮样囊肿等与MRI一致。采用显微手术脊髓栓系松解治疗并不断改进手术方法,可提高疗效,减少并发症。结论 B超、MRI是检查诊断TCS的最好方法。显微外科手术松解脊髓及神经能使大部分TCS患儿症状减轻或治愈。改进手术方法可提高疗效,减少并发症。

母源性抗旋毛虫抗体对子鼠肠道虫荷的影响

目的探讨母源性抗旋毛虫抗体的传递途径及其对子鼠感染旋毛虫后肠道排虫的作用。方法98只昆明小鼠子鼠分为4组,感染母鼠所产子鼠感染母鼠哺乳组(A组)、正常母鼠所产子鼠感染母鼠哺乳组(B组)、感染母鼠所产子鼠正常母鼠哺乳组(C组)及正常母鼠所产子鼠正常母鼠哺乳组(D组)。4组子鼠分别在14、21、42日龄时尾静脉采血,用旋毛虫肌幼虫ES抗原ELISA检测血清抗体水平,然后分别经口感染200条肌幼虫,18h后剖杀子鼠,计数肠道虫荷。结果A、B、C和D等4组14日龄子鼠的肠道平均虫荷分别为5、5、19及18条,21日龄子鼠分别为18、19、75及73条。14日与21日龄的A、B两组子鼠肠道虫荷均显著低于C、D两组子鼠(F14=10.056,F21=35.062,P<0.01)。14日和21日龄子鼠血清吸光度(A492),A组(0.177、0.235)与B组(0.183、0.250)均显著高于C组(0.108、0.105)与D组(0.067、0.065)(F14=75.326,F21=60.867,P<0.01);14日和21日龄4组子鼠肠道虫荷与其血清抗体水平均呈负相关(r14=-0.621,r21=-0.756,P<0.01)。42日龄4组子鼠肠道虫荷差异无统计学意义(F42=0.916,P>0.05),血清抗旋毛虫抗体均为阴性,肠道虫荷与其血清抗体水平无相关性(r42=-0.291,P>0.05)。结论母源性抗旋毛虫抗体主要经乳汁传递,可明显促进14日和21日龄子鼠感染旋毛虫后的肠道排虫反应。

原癌基因c—Met在子宫内膜癌中表达的研究

目的 研究原癌基因c—Met在子宫内膜癌中的表达及其意义。方法 采用免疫组织化学SP的方法，研究50例子宫内膜癌组织及20例正常子宫内膜组织中原癌基因c—Met的表达。结果 子宫内膜癌中c—Met阳性表达率高于正常子宫内膜（P〈0．05），且与组织分级、肌层浸润深度、临床分期显著相关（P〈0．05）。结论c—Met的过表达在子宫内膜癌变中起重要作用，促进了子宫内膜癌的发生和发展，对判断子宫内膜癌的恶性程度有较重要价值。

血管生成在子宫内膜癌中的临床研究

目的研究血管生成在子宫内膜癌发生发展中的作用。方法采用免疫组织化学SP的方法,研究50例子宫内膜癌组织及20例正常子宫内膜组织中微血管密度(MVD)。结果子宫内膜癌中MVD(19.21±8.15)显著高于正常子宫内膜(8.12±2.93),P<0.05,且与临床分期、组织分化程度和肌层侵润深度显著相关(P<0.05)。结论子宫内膜癌的发生发展中,血管生成起到非常重要的作用,MVD对子宫内膜癌的预后判断有重要价值。

妊娠对小鼠旋毛虫感染免疫应答的影响

目的研究妊娠对小鼠旋毛虫感染免疫应答的影响。方法6只孕鼠分别经口感染300条旋毛虫肌幼虫,ELISA检测感染后不同时间血清抗体水平。感染后6周剖杀,消化全身肌肉计算每克肌肉虫荷(lpg)。测定孕鼠感染后1～4周血清介导的抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用(ADCC)对成囊前期幼虫(PEL)的杀伤作用。观察孕鼠感染旋毛虫后第6、8和12天的肠道虫荷及雌虫体外生殖力指数。对6只处女鼠肌肉注射孕酮,观察其感染旋毛虫后6周的血清抗体水平与肌肉虫荷。结果孕鼠感染旋毛虫后2周的血清抗体水平(A492=0.113)显著高于未孕鼠(A492=0.078)(F=21.390,P<0.05)。孕鼠感染后6周的每克肌肉虫荷(1251±450)明显低于未孕鼠(2310±1123)(t=2.419,P<0.05)。孕鼠感染后2周血清介导的ADCC导致成囊前期幼虫的死亡率(42.6%)显著高于未孕鼠(26.9%)(F=1.195,P<0.05)。孕鼠感染后第6、8和12天的肠道虫荷与未孕鼠相比差异均无统计学意义(Z6=-1.185,Z8=-0.149,Z12=-0.0289,P>0.05),感染后第6和8天孕鼠与未孕鼠的雌虫生殖力指数间的差异亦无统计学意义(Z6=-0.149,Z8=-1.043,P>0.05)。孕酮注射处女鼠感染旋毛虫后6周的血清抗体水平(A492=0.299)显著高于对照组(A492=0.191)(t=2.955,P<0.05),但其每克肌肉虫荷(1457±551)与对照组(1235±439)相比差异无统计学意义(t=0.726,P>0.05)。结论妊娠在小鼠抗旋毛虫感染的免疫应答中具有协同作用,其机制可能与孕鼠感染旋毛虫后早期血清抗体水平升高及其介导的ADCC对成囊前期幼虫的杀伤作用增强等有关。

体外诱导儿童骨髓间质干细胞分化为神经细胞

目的 探讨儿童骨髓间质干细胞诱导分化为神经干细胞及神经细胞的方法及生物学特征 ,为将来进一步研究及利用其实验治疗小儿脊髓栓系综合征及其他神经系统疾病动物模型奠定基础。方法 取健康儿童骨髓离心初步分离骨髓间质干细胞 ,在α MEM培养基中进行无分化培养 12代进一步纯化扩增 ,加入预诱导液、诱导液进行定向诱导分化 ,逐日观察细胞形态变化 ,采用免疫组织化学技术对诱导后的细胞进行神经干细胞特异性抗原nestin、神经丝蛋白 β tublinШ和胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)表达的定性检测 ,观察其表达情况 ;并采用RT PCR技术对不同时段神经干细胞特异性抗原nestin和神经生长因子受体TrkB (neurotrophicreceptortyrosinekinaseB ,TrkB)mRNA的表达进行检测 ,用上述两种技术手段 ,从不同角度和层面验证和初步探索BSMCs定向诱导分化为神经组织样细胞的细胞生物学和分子生物学特征。结果 骨髓间质干细胞经过 7d体外诱导 ,大约有 35 %的细胞发生形态学变化。免疫组化结果显示 ,细胞形态逐步发生变化并最终形成神经样的细胞 ,在诱导后30min表达神经干细胞特异性标志nestin抗原、7d时分别表达神经元特异性标志 β tublinⅢ抗原和星形胶质细胞特异性标志GFAP抗原。RT PCR检测结果也表明 ,被诱导后 5 .5h在mRNA水?

应用免疫球蛋白重链可变区上框架区来源的抗原九肽获得的细胞毒T细胞功能分析

目的明确在B淋巴细胞肿瘤表面的免疫球蛋白重链可变区(IgHV)的框架区(FR)上是否存在可以激发细胞毒T淋巴细胞(CTL)的抗原表位,这些来源于FR的抗原肽是否能够激发家族特异性的免疫反应,探讨按照B淋巴细胞肿瘤的IgHV基因分型进行家族性的免疫治疗的可能性。方法利用生物信息学系统预测了40例B淋巴细胞肿瘤表面的免疫球蛋白序列的抗原表位,人工合成不同基因家族的抗原九肽,利用T2细胞结合实验检测预测的抗原肽和HLA分子的亲合力。利用体外CTL刺激扩增体系,诱导特异性的CTL细胞增殖,用肽/HLA四聚体检测特异性CTL的数目,应用LDH释放实验检测CTL的细胞毒活性并验证其家族特异性。结果在B淋巴细胞肿瘤的7个IgHV基因家族中找到了12个高亲和力的抗原九肽,其中10个(83%)位于FR,以HLA-A*0201正常供者的外周血单个核细胞(PBMNC)负荷该九肽作为抗原呈递细胞去刺激自身PBMNC,经过4轮刺激,CD8和肽/HLA四聚体双阳性细胞从0.38%上升到49.38%。LDH释放实验证明对HLA-A*0201(+)、IgHV1(+)靶细胞有明显的杀伤作用,并且被IgHV1肽刺激出的CTL不能识别负荷IgHV3肽的靶细胞。结论IgHV基因FR抗原九肽可以刺激产生具有HLA限制性的并且肽特异性的CTL,同时这样的杀伤作用具有家族特异性,以此为靶位有望对B淋巴细胞肿瘤进行家族特异性的免疫治疗。

镜检法与贝氏法对肉类中旋毛虫成囊前幼虫的检验效果

目的观察镜检法(trichinelloscopy)与贝氏法(Baermann’s technique)对肉类中旋毛虫成囊前幼虫(pre-encap-sulated larvae,PEL)检验的效果。方法将80只昆明小鼠随机分为8组(每组10只),每只感染旋毛虫肌幼虫300条,感染后14～21d每天剖杀1组,应用贝氏法检查小鼠肌肉中的PEL(9～16日龄),用镜检法检查膈肌中的PEL,用ELISA检测鼠血清抗旋毛虫抗体。另取12只小鼠,用于观察消化法对旋毛虫感染后17～19d(12～14日龄)PEL存活率的影响。结果小鼠感染旋毛虫后14和15d镜检法幼虫检出率分别为50.0%和89.0%,感染后16～21d检出率均为100%。感染后14～21d贝氏法的检出率均为100%;ELISA检测血清抗体阳性率为11.1%～40.0%。感染后14d贝氏法的PEL检出率与镜检法比较差异有统计学意义(χ2=5.333,P<0.05);观察期间ELISA检测的抗体阳性率均显著低于镜检法和贝氏法的幼虫检出率(χ2=18.9,P<0.05)。感染后17～19d,小鼠肌肉消化4h的幼虫存活率均明显低于消化1h的存活率(χ127=117.56,χ128=37.48,χ219=96.73,P均<0.05)。结论旋毛虫感染后17～19d的成囊前幼虫不能完全抵抗胃蛋白酶的消化作用;对肉类中旋毛虫成囊前幼虫的检疫效果,贝氏法优于镜检法。