shRNAs对胃癌细胞系BGC-823胃泌素表达的抑制效应

目的研究shRNAs对胃癌细胞系BGC-823胃泌素表达的抑制效应。方法设计4条针对胃泌素基因不同位点的寡核苷酸序列,通过体外转录法合成相应的shRNAs。以10nmol/L、20nmol/L、40nmol/L和80nmol/L的终浓度,将4条shRNAs分别转染胃癌细胞BGC-823。应用原位杂交及免疫细胞化学方法检测胃泌素表达的抑制效果,筛选最有效的shRNA。应用RT-PCR进一步验证其对胃泌素mRNA的抑制效应。应用MTT法检测4条shRNAs在不同浓度下对BGC-823细胞的增殖抑制效应。结果转染后24h、48h及72h,胃泌素表达均被明显地抑制,并呈现浓度及时间依赖的趋势。shRNA3转染后72h,mRNA及蛋白水平表现出最佳的抑制效率,分别为(54.27±0.042)%和(41.69±0.038)%。RT-PCR结果显示,shRNA3对BGC-823细胞胃泌素mRNA的抑制率为48.1%。MTT结果显示,除shRNA4处理组外,其余3组处理细胞均表现出浓度依赖性的增殖抑制趋势。结论4条shRNAs在mRNA及蛋白水平均明显地抑制了胃癌细胞BGC-823胃泌素的表达,shRNA3可能为最有效的胃泌素-shRNA。shRNA对胃泌素表达的抑制,显著降低了BGC-823细胞增殖能力。