大鼠VR1基因siRNA表达载体的构建及体内研究

目的探讨辣椒素受体(vanilloid receptor subtype1,VR1)在慢性疼痛发生机制中的作用,构建携带VR1siRNA的慢病毒载体并检测其对大鼠DRG神经元VR1基因的干扰作用。方法设计靶向大鼠VR1基因的发夹状siRNA,合成两对互补的寡核苷酸序列,退火后克隆到酶切的pRNAT-U6.2/Lenti siRNA载体,通过PCR和DNA测序鉴定重组质粒。空载体及重组质粒分别与慢病毒包装质粒共转染293T细胞生成慢病毒载体。通过蛛网膜下腔将慢病毒载体注射到大鼠体内,采用RT-PCR方法检测L4-L6DRG神经元内VR1的沉默效果。结果测序鉴定证实目的寡核苷酸片段被克隆到pRNAT-U6.2/Lenti载体中;经蛛网膜下腔注射后,pRNAT-U6.2/Lenti-siVR1可下调正常大鼠L4-L6DRG神经元内VR1mRNA的表达。结论成功构建了靶向VR1基因的siRNA载体,可有效抑制VR1mRNA的表达,为深入研究和治疗慢性痛提供了有力的工具。