提高留学生医学微生物学教学质量的几点思考

探讨提高留学生医学微生物学教学质量和效果的方法:根据留学生特点,结合多种教学方法,探索总结出适合留学生医学微生物学教学特点的方法;采用英文原版教材和USMLE试题,帮助提高留学生应对执业医师资格考试的能力;结合留学生当地疾病特点,理论联系实际选择授课内容,激发留学生的学习兴趣;正确认识文化差异,利用中国文化引导并加强留学生的教育管理等综合措施,提高了留学生医学微生物学课程的教学质量,实践中取得了良好的教学效果。

多媒体辅助医学微生物学教学的探讨

目的 探讨多媒体辅助医学微生物学教学的必要性、影响因素及注意事项。方法 在五年制本科班学生、成人数育学生医学微生物学课程中实施多媒体教学。结果 多媒体教学以其特有的声、形、色的信息刺激方式 ,丰富多彩的信息传输和交换优化了课堂教学。结论 在医学微生物学中开展多媒体教学势在必行。

中医药专业微生物学教学浅谈

目的探讨中医药专业微生物教学效果。方法在美豫国际中医学院教学中注重绪论章节的提出,注意中西医理论知识的结合,适当改进实验课教学,运用多种教学模式。结果提高了中医药院校学生学习西医基础课的积极性和主动性。结论中医院校微生物教学质量得到了有效提高。

人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP的建立及其生物学特征

目的:建立人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,探讨其生物学特征.方法:采用顺铂(cDDP)中等浓度、间歇作用方法历时9mo建立耐药细胞系Ec9706/cDDP,采用MTT法测定其对cDDP的耐药指数,观察冻存、撤药对耐药性的影响,比较耐药与亲本细胞生长曲线、群体倍增时间及贴壁率的不同,流式细胞仪测细胞周期,软琼脂实验测细胞的恶性增殖能力,罗丹明实验测其对药物的摄入、排出能力.结果:人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP的耐药指数为15.7,冻存对耐药性影响不大,撤药培养可使耐药性降低,耐药细胞群体倍增时间延长(29.79±0.48hvs25.79±0.45h,P<0.05),生长缓慢,G0/G1、S期细胞比例增加(63.18%±5.21%vs52.81%±4.36%,P<0.05;36.49%±3.93%vs26.70%±2.62%,P<0.05),G2期细胞减少(0.33%±0.02%vs20.49%±3.71%,P<0.05),克隆形成率明显高于亲本细胞(69%vs24%,P<0.05),对罗丹明的摄入减少,排出增多.结论:成功建立了人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,且耐药性较稳定.

稳定高表达人野生型DNApolβ食管癌细胞Ec9706的生物学特征

目的:建立稳定高表达人野生型DNA聚合酶beta(polβ)的食管癌细胞系Ec9706,并对该细胞系的生物学特征进行分析。方法:脂质体转染法将人野生型polβ重组绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-AC3转染入Ec9706细胞,荧光显微镜观察转染效果,经G418筛选得到稳定转染细胞系。RT-PCR方法检测转染细胞polβmRNA的表达水平,绘制生长曲线,软琼脂实验测细胞克隆形成率,MTT法测转染前后细胞对顺铂的敏感性。结果:荧光显微镜下转染细胞荧光强,转染效率高,RT-PCR结果表明转染细胞的polβ表达较空载体转染细胞、对照细胞增加。转染前后细胞生长速度接近,转染细胞周期分布发生改变,多被阻滞在S期,在软琼脂实验中克隆形成率增加,对顺铂的敏感性降低。结论:成功建立了稳定高表达人野生型polβ的Ec9706细胞系,polβ的高表达与细胞的细胞周期分布、恶性增殖能力及耐药性有一定关系。

对免疫学实验课教学的一些探索

目的提高免疫学实验课教学质量。方法 采取更加灵活的授课形式,并加强实验课同理论知识的联 系,以提高学生动手、动脑能力。结果 有效的提高免疫学实验课教学质量。结论 通过以上形式可以有效的提 高免疫学实验课教学质量。

小议免疫学教学语言

目的 探讨在免疫学的教学过程中怎样提高教学语言水平。方法 分析教学语言的重要性 ,并结合作者的教学经验 ,探讨提高免疫学教学语言的方法途径。结果 总结出提高免疫学教学语言的几条方法途径。结论 免疫学教学语言要清晰流畅、形象生动、轻松活泼、有启发性并善于总结。

人胚脑源性神经干细胞特性及免疫原性研究

目的:探讨人胚脑源性神经干细胞特性及免疫原性,为神经干细胞(neuralstemcells,NSCs)移植治疗神经系统损伤奠定基础。方法:取孕14周流产胚胎,无菌分离制备大脑神经细胞悬液,用CD133标记的免疫磁珠分选NSC,提取NSCRNA,进行RT-PCR探测MHC-I,MHC-II类分子mRNA转录;用流式细胞术检测细胞表面MHC-I,MHC-II类分子的表达;用正常成人外周血单个核细胞与培养NSC共培养和MTT比色分析法观察淋巴细胞增殖反应;将NSC小鼠脑内接种,进行组织染色观察细胞移植部位的组织学变化。结果:新分离和传代的NSC均发生MHC-I,MHC-II类分子mRNA转录,MHC-I类分子在NSC表面的表达百分率为(5.66±0.37)%,NSC在体外能诱发淋巴细胞增殖反应,A值为1.09±0.48和1.15±0.29,与阴性对照比差异有显著性意义(P<0.05)。NSC小鼠脑内移植具有修复神经损伤作用,局部无淋巴细胞浸润和炎症。结论:人胚脑源性神经干细胞具有免疫原性,但直接脑内接种未发现引起明显的移植排斥反应。

高效抗逆转录病毒疗法(HAART)对HIV／AIDS患者免疫功能的影响

目的评价高效抗逆转录病毒疗法(highly active antiretroviral therapy,HAART)对HIV/AIDS患者的疗效。方法采用HAART治疗73例HIV/AIDS患者,流式细胞仪测定治疗前后HIV/AIDS患者体内CD4+,CD8+T淋巴细胞数量,定量ELISA法检测血浆细胞因子IL-2,IL-10和TGF-β1水平。结果经HAART治疗后,CD4+T细胞数量显著回升(P(0.01),但CD8+T细胞变化不大(P(0.05)。血浆IL-10水平较治疗前明显下降(P(0.05),IL-2水平较治疗前升高(P(0.05),TGF-β1的水平显著降低(P(0.01)。结论HAART治疗HIV/AIDS患者疗效显著,对于重建免疫功能、改善体内细胞因子失调有明显效果。

免疫磁珠法分离和纯化人胚胎神经干细胞

目的:建立有效的人类神经干细胞分离纯化系统和方法。方法:无菌取孕24周流产胎儿的室下区脑组织,制备细胞悬液,用磁性微珠标记的CD133单克隆抗体与细胞孵育,通过磁分选器分离出CD133(+)和CD133(-)细胞,通过体外培养并诱导分化,观察CD133阳性细胞和阴性细胞的增殖情况及分化能力。结果:经免疫磁珠分选的室下区脑组织中,CD133(+)细胞占胚胎脑组织细胞的2％左右,该细胞体外扩增能力强,细胞呈球形生长,并易聚集成团,培养5 d、10 d、15 d、20 d进行活细胞计数,细胞增长率分别为1.79％、4.82％、7.21％、14.66％,诱导分化后的细胞经染色鉴定可分化为神经元、神经胶质等多种神经细胞;阴性细胞扩增能力弱,活细胞计数以死细胞数量居多,大约70％,另外一些细胞贴壁分化。结论:免疫磁珠法简便、有效,经免疫磁珠分离的神经干细胞在体外能进一步培养扩增并分化。

人胚神经干细胞体外免疫原性测定

目的探讨人胚神经干细胞体外免疫原性情况。方法取孕14周流产人胚侧脑室下区细胞,进行分离、培养、鉴定。提取人胚神经干细胞和正常人外周血单核细胞中的RNA,采用RT-PCR法反转录,扩增,电泳,观察目的条带。根据外周血单核细胞培养分4组阴性对照组以外周血单核细胞单独培养,实验组为B、C组分别以103ml-1、105ml-1神经干细胞加入外周血单核细胞中共培养,阳性对照组将植物血凝素以0.1mg/L加入外周血单核细胞中共培养。用MTT比色法测定刺激后外周血单核细胞增殖能力。结果RNA反转录后电泳条带显示神经干细胞表达HLA-A、HLA-DRA,MTT比色法细胞活力测定显示B组、C组D(490nm)分别为0.4450±0.0265、0.5675±0.0781,C组与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),B组、C组与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论人胚侧脑室下区的神经干细胞在体外有一定的免疫原性,可促进外周血单核细胞增殖,移植时需注意免疫排斥问题。

人B7-2基因修饰的食管癌细胞瘤苗抗肿瘤的免疫效应

目的:研究人B7-2基因修饰的食管癌细胞作为瘤苗的抗肿瘤作用。方法:将真核荧光表达载体pEGFP-C3-B7-2,通过脂质体转染技术转染人食管癌细胞株EC9706。外周血来源的树突状细胞(DC)负载肿瘤抗原后,与自体T淋巴细胞共培养3d,获得细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CTL对转染和未转染pEGFP-C3-B7-2的人食管癌细胞EC9706的杀伤活性。结果:CTL对转染pEGFP-C3-B7-2的肿瘤细胞的杀伤活性大于转染pEGFP-C3和未转染细胞的杀伤活性(P<0.05)。结论:人B7-2基因修饰的EC9706肿瘤细胞瘤苗,可诱导出明显的抗EC9706细胞的免疫效应。

B19 VP2抗原真核表达载体的构建及免疫原性观察

目的:探讨以B19VP2基因为靶基因构建的真核表达载体作为基因疫苗的免疫原性。方法:用PCR方法以pGEM1B19为模板扩增出B19VP2目的基因;将其重组入真核表达载体pcDNA3;将重组子pcDNA3VP2及空质粒分别用脂质体包裹接种家兔;ELISA方法检测家兔血清中B19VP2抗体产生情况。结果:成功构建了真核表达载体pcDNA3-VP2;其作为基因疫苗接种家兔后可产生滴度较高,持续时间较长的抗体。结论:B19VP2基因可作为B19病毒基因疫苗构建的靶基因。

中国猕猴CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞抑制抗结核分枝杆菌特异性T淋巴细胞免疫反应

目的:体外观察中国猕猴CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)对T淋巴细胞产生的抗PPD抗原特异性扩增的影响。方法:分离6只3月内人工感染过结核分枝杆菌卡介苗的雄性中国猕猴外周血单个核细胞(PB-MCs),免疫磁珠法分选纯化出Tregs,并用PKH26红标记。将去除Tregs的剩余PBMCs标记上CFSE,然后单独或与纯化的Tregs混合,分别给予结核杆菌纯化蛋白衍生物(PPD)或CD3/CD28单克隆抗体刺激,体外培养7d,用流式细胞术分析含或不含Tregs的PBMCs中CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和Vγ2Vδ2T淋巴细胞对PPD抗原和CD3/CD28抗体刺激的反应。结果:PPD不仅能引起CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞扩增,而且引起Vγ2Vδ2T淋巴细胞也发生扩增。Tregs不仅能抑制CD3/CD28抗体诱导的CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和Vγ2Vδ2T淋巴细胞的抗原非特异性扩增,而且还可抑制PPD抗原刺激引起的CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和Vγ2Vδ2T淋巴细胞的抗原特异性扩增。结论:中国猕猴Tregs对T淋巴细胞产生的抗结核杆菌特异性免疫反应有负调节作用。

郑州市流产或死胎孕妇人微小病毒B19感染情况测定

目的:了解郑州市流产或死胎孕妇人微小病毒B19的感染情况。方法:采用ELISA和PCR方法分别检测郑州市237例正常孕妇及29例不明原因流产或死胎孕妇血清中B19IgG、B19IgM和B19DNA表达情况。结果:29例流产或死胎孕妇B19IgG、B19IgM和B19DNA阳性率分别为51.7%(15/29)、6.9%(2/29)和13.8%(4/29),237例正常孕妇B19IgG、B19IgM和B19DNA阳性率分别30.4%(72/237)、1.3%(3/237)和2.5%(6/237),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:郑州市孕妇中存在人微小病毒B19的感染,可能导致不明原因流产或死胎。

蛋白质芯片技术对脐血浆生物活性成分的分析

目的通过高通量筛选、检测脐血中细胞因子的种类和含量,全面了解脐血浆生物活性成分及表达水平。方法取10位健康足月分娩产妇脐静脉血2 ml和健康成年女性志愿者捐献的外周静脉血2 ml,应用抗体芯片RayBio(?) Biotin Label-basedHuman Antibody ArrayⅠ一次性检测507种细胞因子表达水平,两样本中细胞因子比值大于或小于两倍以上者为有显著差异。结果在蛋白质芯片检测所包括的507种细胞因子中,脐血浆中有94种成分显著高于对照组,28种成分显著低于对照组。结论抗体芯片技术能高通量、平行性检测脐血浆生物活性成分及表达水平,为深入研究脐血细胞因子积累了数据。

超敏反应教学中引入PBL教学模式的课程设计

为探讨PBL教学模式在免疫学教学中的应用,在超敏反应教学章节引入PBL教学模式进行了初步尝试。课前对课程进行详细设计,将教学材料提前交给学生,课堂分学生自讲、教师解惑两个环节,并以笔试和提问的形式对课堂效果进行评估。PBL教学模式取得良好的教学效果,同时也暴露出PBL教学的缺点。

浅谈高校的双语教学

目的探讨促进高校双语教学的方法、策略。方法 分析双语教学的重要性,并结合我校具体情况分析推广双语教学的有效途径。结果总结出搞好双语教学的几条途径:课堂上汉语英语结合;合理使用英语原版教材;创造学英语的环境;培养一支高素质的双语教师队伍等等。结论双语教学的推广是一项长期工作,合理的双语教学方法可培养出高素质的双语人才。

酶联免疫吸附法和免疫印迹法检测抗核小体抗体的对比分析

目的比较酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫印迹法(WB)检测抗核小体抗体(Anu A)的差异,为临床工作寻找合适的检测方法。方法收集818例临床血标本,其中系统性红斑狼疮(SLE)360例,其他自身免疫性疾病458例,同时采用ELISA和WB两种方法检测样本血清中Anu A,计算每种方法的敏感度、特异度、ROC曲线,并运用SPSS 17.0进行统计学分析。结果 ELISA与WB检测Anu A的阳性率分别为35.1%和31.1%,两者差异有统计学意义(P<0.05)。准确度、敏感度和特异度无差异。结论 ELISA与WB检测Anu A的总一致率高,对SLE诊断的准确度较高,敏感度和特异度均较好。提示临床监测时,可应用WB进行Anu A检测的初筛,需要时应用ELISA进行复检,可以提高6.4%的Anu A检测阳性率,为临床提供更好的SLE诊断及疾病活动度的信息。

郑州市B19病毒分离株全基因的克隆及序列测定

目的:克隆和测定在郑州市得到的B19病毒分离株全基因序列。方法:采用聚合酶链反应(PCR)技术从1例B19阳性的流产患者血清中分段扩增B19病毒全基因,获得7个互相重叠的片段,分别长814bp(1～814),849bp(753～1601),663bp(1523～2185),738bp(2124～2861),1011bp(2790～3800),1014bp(3747～4760),914bp(4681～5594)。将其分别克隆入T载体,进行测序分析。结果:郑州市B19病毒分离株全基因长5594个核苷酸,有3个开放读码框架(ORF)。第1个ORF位于615～2630位核苷酸,编码672个氨基酸,第2个ORF位于2623～4968位核苷酸,编码782个氨基酸,第3个ORF位于3304～4968位核苷酸,编码555个氨基酸。在该基因中4种碱基在基因组中所占比例为:A,29.58%(1655/5594),T,26.52%(1484/5594),G,22.88%(1280/5594),C,21.02%(1175/5594)。郑州B19病毒分离株基因序列与GenBank中NC_000883高度同源;存在10个碱基改变,只有1个引起氨基酸改变(3752位C→G导致Ser→Cys)。结论:郑州B19病毒分离株和NC_000883属同一基因型。