人降钙素基因在大鼠成肌细胞中的表达与鉴定

目的建立稳定表达人降钙素(hCT)基因的细胞株(L6),观察人降钙素基因在大鼠成肌细胞中的表达和分泌情况。方法采用自行构建的5'端融合小鼠抗体轻链基因Igκ的信号肽序列的人降钙素基因分泌性真核表达载体pcDNA3.0-Igκ-hCT,采用脂质体介导方法将人降钙素基因导入大鼠成肌细胞;对照组用pcD-NA3.0空质粒转染。经G418筛选后,采用RT-PCR法和免疫细胞化学法检测人降钙素基因在大鼠成肌细胞中的表达,并用放免法检测细胞培养上清液降钙素的分泌。结果RT-PCR法和免疫细胞化学法均能检测到人降钙素基因在大鼠成肌细胞中的表达;并在连续传代的细胞培养上清液中检测到每106个细胞24h培养液中降钙素分泌量的平均值42.22ng。结论成功转染人降钙素基因真核表达载体pcDNA3.0-Igκ-hCT于大鼠成肌细胞中;该载体可在细胞中持续稳定表达,建立了稳定的人降钙素基因表达系统。