煤工尘肺患者血清CuZn-SOD和铜蓝蛋白活性研究

[目的]探讨煤工尘肺发生发展过程中血清含Cu抗氧化酶CuZn-SOD和铜蓝蛋白(CP)的活性及Cu含量的变化。[方法]分别采用亚硝酸盐形成法、对苯二胺盐酸盐法及原子吸收分光光度法,测定70例不同期别煤工尘肺患者(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期)及30例健康对照者的血清CuZn-SOD活性、铜蓝蛋白(CP)活性及Cu的含量。[结果]对照组、Ⅰ期尘肺组、Ⅱ期尘肺组及Ⅲ期尘肺组的血清CuZn-SOD活性分别为(15.96±2.26)、(17.24±2.28)、(19.81±3.01)、(21.63±3.52) NU/ml;血清CP活性分别为(2.26±0.52)、(2.68±0.67)、(2.97±0.79)、(3.36±0.88)U/ml;血清Cu含量分别为(12.68 ±3.87)、(14.96±4.42)、(17.84±5.12)、(19.38±5.89)μmol/L。与对照组相比,各期别尘肺患者血清与CuZn-SOD和CP 活性及其Cu的含量均显著升高。[结论]煤工尘肺的发生发展涉及含Cu抗氧化酶活性的上调,且其活性的改变与Cu含量变化有平行关系。

人骨肉瘤mta1 mRNA的siRNA载体构建及其对mta1沉默作用

目的 本实验拟构建针对mta1mRNA的siRNA重组载体,将siRNA对应的DNA发卡样双链序列克隆入载体内,位于H1启动子下游,转染人人骨肉瘤细胞内,在细胞内表达mta1靶向的siRNA分子,特异性沉默mta1的表达.方法 依据GenBank中mta1基因(NM-004689)的序列,用设计分析软件进行设计候选序列,确定针对mta1的siRNA序列.合成mta1发卡样siRNA寡核苷酸,退火成双链DNA,克隆入T载体,利用α互补和T7/SP6 PCR扩增筛选鉴定重组子pGEM-T-mta1;用BglⅡ和HindⅢ双酶切重组子pGEM-T-mta1和siRNA表达载体pSuperneo;将双粘mta1发卡样siRNA片段亚克隆入siRNA表达载体pSuperneo中;利用Bg1Ⅱ和HindⅢ双酶切筛选鉴定重组子pSuperneo-mta1;对插入序列进行DNA序列分析.将siRNA表达载体pSuperneo-mtal转入人骨肉瘤细胞系MG-63中,用RT-PCR方法检测细胞mta1mRNA表达水平.结果 转染pSuperneo-mta1的实验组骨肉瘤细胞中mta1mRNA表达几乎完全被抑制,而2个对照组(无关siRNA对照组和空载体对照组)和未转染的骨肉瘤细胞系MG-63细胞中都存在较高水平的mta1mRNA表达.结论 设计出针对mta1的发卡样siRNA寡核苷酸片段,成功构建出针对mta1的siRNA表达载体pSuperneo-mta1,pSuperneo-mta1转染骨肉瘤细胞后能显著降低细胞mta1mRNA表达.