SV40T胃壁细胞定位表达转基因小鼠的建立

目的构建胃壁细胞定位表达SV40T的真核表达载体并制备转基因小鼠动物模型,为研究胃癌发病机制提供动物模型。方法从构建的胃壁细胞特异性表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV中酶切回收3.8kb的基因片段H+-K+ATPaseβpromoter/SV40T,通过显微注射的方法制备转基因小鼠,PCR和Southern blotting检测阳性转基因小鼠并建系繁殖,RT-PCR检测基因的表达情况。结果将422枚注射过的受精卵移植给16只假孕雌鼠,共生出77只仔鼠,移植成功率为18.2%。在出生的77只仔鼠中,2#、4#、8#、16#、24#、51#、57#、61#、68#、73#经PCR检测为阳性首建鼠。除68#不育外,其他9个品系首建鼠共生出99只F1代鼠。8#品系23只F1代尚未发现阳性鼠,另8个品系F1代经PCR和Southern blotting检测发现31只阳性鼠,阳性率为40.8%(31/76)。RT-PCR检测F1代阳性鼠均仅在胃组织中有SV40T基因的表达,而在心、肝、肾、肺、食道、肠、骨骼肌等组织中均不表达。不育首建鼠处死解剖发现胃组织有肿瘤存在。结论建立了胃壁细胞定位表达SV40T基因的转基因小鼠动物模型。

河南汉族14个Y-STR基因位点单倍型的遗传多态性

目的:检测河南汉族群体14个Y-STR位点单倍型的遗传多样性,探讨其在法医物证学中的应用价值。方法:应用PCR、聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染显带技术,分析DYS713、DYS720、DYS635、DYS456、DYS389Ⅰ、DYS390、DYS389Ⅱ、H4、DYS460(A7.1)、DYS391、DYS448、DYS393、DYS439及DYS392等14个Y-STR位点单倍型在203名河南汉族无关个体中的分布,并用于2例法医物证检案的判定。结果:203例样本中共检出203种单倍型,单倍型多样性高达1,个体识别率为0.999976。应用于2例法医物证检案,得到准确判断。结论:构建的Y-STR复合体系具有较高单倍型遗传多态性和个体识别力。

河南汉族人群6个STR基因座遗传多态性分析

目的对河南省汉族群体的6个短串联重复序列(short tandem repeat,STR)基因座等位基因频率进行研究,获得河南汉族群体D19S253、D14S306、D18S535、D11S2368、D12S391、D4S2639基因座的群体遗传学数据。方法对133名无血缘关系河南汉族个体的EDTA抗凝血样用酚-氯仿法提取DNA,应用多重PCR扩增技术结合聚丙烯酰胺凝胶电泳对D19S253、D14S306、D18S535、D11S2368、D12S391、D4S2639 6个基因座在河南地区汉族人群中的基因型分布进行分析。结果6个基因座的基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡,各基因座的观察杂合度分别为0.764、0.854、0.844、0.921、0.813、0.807,6个位点的累积个体识别率为0.999 999 88,累计非父排除率为0.999 31,累计个体匹配率为1.16×10-7。结论6个基因座在河南汉族群体中具有较高的非父排除率和个体识别率,在法医学和群体遗传学研究中有一定的应用价值。

近交系豫医无毛小鼠STR位点的遗传检测

目的 :探讨近交系豫医无毛小鼠 (YYHL)短串联重复序列 (STR)位点的遗传多态性。方法 :随机选择位于小鼠 3、4、7、1 6号染色体上的 5个STR位点 ,用PCR技术对近交系YYHL、DBA近交系小鼠及昆明小鼠进行多态性分析。结果 :5对引物在近交系YYHL各基因座上均出现一条带 ,其中D7Nds1、D3Mit2 2、D1 6Mit4三基因座表现为多态性 ,D3Mit2 1、D4Mit2二基因座表现为单态性。结论 :D7Nds1、D3Mit2 2、D1 6Mit4三基因座可用于检测近交系小鼠遗传特异性 ,结合近交系豫医无毛小鼠皮肤移植实验 ,近交系豫医无毛小鼠符合近交要求。

Leber遗传性视神经病变家系线粒体DNA突变检测

目的:探讨Leber遗传性视神经病变(LHON)患者的线粒体DNA(mtDNA)突变。方法:运用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)和DNA序列测定方法,设计4对引物,扩增出含11778、14484、3460三个已知原发突变位点和3394、4136、4160、4216、11696、14459、14482、14498八个已知继发突变位点的4对mtDNA片段,对3个LHON家系30位母系成员的血样进行检测。32份无视力障碍的正常人血样作对照。参照mtDNA序列为剑桥标准mtDNA序列。结果:30位母系成员均含11778位点突变,其中1人合并4164位点突变(A→G)。与剑桥标准mtDNA序列对比,30位LHON母系成员和32位正常对照均含有11719位点突变。结论:11778是LHON患者常见的突变位点,4164位点突变可能是新的继发突变或正常人单核苷酸位点多态性。11719位点突变可能是中国人存在的单核苷酸位点多态性。

PCR短串联重复序列在异基因外周血干细胞移植监测中的应用

目的:评价PCR短串联重复序列(PCR-STR)在异基因外周血干细胞移植(Allo-PBSCT)后监测中的应用价值。方法:采集13例造血干细胞移植(HSCT)患者首次术后10、20和30d的口腔颊黏膜上皮细胞及外周静脉血,提取基因组DNA,采用PCR-STR法比较其外周血与口腔黏膜细胞中D7S3048、D4S2639、D14S306、D18S535、F13A01、FESFPS、vWA、CSF1PO、TPOX和THO1等STR位点联合基因型改变。结果:13例HSCT患者的外周血中均发现外源STR基因型。10、20和30d13例患者口腔黏膜细胞与外周血检测的10个STR基因位点均至少有5个不同。结论:对受者外周血与口腔黏膜多个STR基因位点的基因型进行对比,可随时监测HSCT患者植入效果。

河南汉族部分人群vWA和FESFPS基因座遗传多态性观察

目的 :研究河南地区部分汉族人群中vWA和FESFPS基因座遗传多态性 ,获得vWA和FESFPS基因座的群体遗传学数据。方法 :应用聚合酶链反应 (PCR)结合聚丙烯酰胺凝胶电泳分型方法 ,分别观察河南地区 2 2 8例无血缘关系汉族人的vWA和FESFPS基因座的基因型分布。结果 :河南地区汉族群体中vWA基因座存在 8个等位基因 ,杂合度为 0 .76 6 6 ,个人识别能力为 0 .8913,非父排除率为 0 .5 4 3。FESFPS基因座存在 7个等位基因 ,杂合度为0 .7777,个人识别能力为 0 .70 0 8,非父排除率为 0 .4 6 0 3,2个位点基因型分布均符合Hardy Weinberg平衡。结论 :vWA和FESFPS位点均是高杂合度 ,高鉴别能力的遗传标记系统 ,具有较高的法医学应用价值。

河南汉族人群D7S3048基因座遗传多态性分布

目的:了解河南汉族人群中STR基因座D7S3048的遗传多态性。方法:采用PCR扩增、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染技术分析河南地区119例无血缘关系汉族人群该STR位点的遗传多态性。结果:首次获得河南汉族人群中D7S3048的分布情况。D7S3048基因座检出10个等位基因,基因型为37个,基因型频率分布符合Har-dy-Weinberg平衡。汉族与蒙古族相比较,等位基因分布有差异。结论:河南地区汉族人群中D7S3048位点具有较高的多态性,在法医学和人类遗传学研究中是很好的遗传标记。

河南汉族布-加综合征患者内皮细胞型一氧化氮合酶基因4a/bVNTR多态性分布特征

目的探讨内皮细胞型一氧化氮合酶(eNOS)基因第4内含子数目可变性串联重复序列(4a/bVNTR)多态性与布加综合征(B-CS)的相关性。方法河南汉族正常人60例,B-CS患者40例,取2组外周血,PCR法扩增eNOS基因第4内含子的特异片段,对2组VNTR的基因型频率与等位基因频率进行统计分析。结果eNOS基因VNTR均存在a、b2种等位基因以及a/b、b/b和a/a3种基因型。与正常对照组相比,B-CS组eNOS基因等位基因频率与基因型频率差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论eNOS基因4a/bVNTR多态可能不是河南汉族人B-CS发病的遗传性危险因素。

小檗胺对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨小檗胺(BBM)对K562细胞增殖及凋亡的影响及其可能机制。方法:K562细胞分为5组,前4组为实验组,分别加入终浓度为0.8、8.0、40.0、80.0 mg/L的BBM,对照组加入等量RPMI 1640,分别作用不同时间后,采用MTT法检测BBM对K562细胞增殖的抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫细胞化学检测各组Caspase-3蛋白和Survivin蛋白的表达。结果:BBM能呈时间剂量依赖性地抑制K562细胞增殖和诱导其凋亡;免疫细胞化学结果显示BBM作用24 h后K562细胞Caspase-3蛋白表达升高,Survivin蛋白表达降低(P均<0.05)。结论:BBM能抑制K562细胞增殖和诱导其凋亡,其机制可能与Caspase-3蛋白的表达增高及Survivin蛋白的表达降低有关。

HLC近交系小鼠骨髓嗜多染红细胞微核检测

目的 :了解HLC近交系小鼠骨髓微核自发率。方法 :将HLC小鼠、无毛小鼠及昆明种小鼠各分为 2组 ,一组取骨髓涂片观察 ,另一组腹腔注射 1 0 0mg/kg环磷酰胺 ,1 8h后取骨髓涂片观察 ,计算微核率。结果 :HLC近交系小鼠嗜多染红细胞微核自发率与无毛小鼠和昆明小鼠差异无统计学意义 (P >0 .0 5) ;腹腔注射环磷酰胺后 ,HLC近交系小鼠与无毛小鼠及昆明小鼠骨髓微核率均显著升高 (P <0 .0 1 ) ,但 3者之间差异无统计学意义 (P >0 .0 5)。结论 :HLC近交系与无毛小鼠及昆明小鼠微核自发率相似 。

中国汉族Leber遗传性视神经病线粒体DNA 11778位点突变与外显率分析

目的:分析Leber遗传性视神经病(LHON)中线粒体DNA(mtDNA)11778位点突变与外显率。方法:应用PCR-SSCP和DNA测序方法,对3个中国汉族LHON家系的31例母系成员进行mtDNA11778位点突变检测,其中男14例,女17例;31例中15例为患者。40例正常人作为对照。结果与结论:3个家系31例样本中全部存在mtDNA11778位G→A突变,说明LHON患者均存在mtDNA11778位点突变。平均外显率48.4%,男性外显率(11/15)高于女性(4/16)。男性外显率有逐代降低,患者发病年龄随传代数增加呈现遗传早发现象。

Leber遗传性视神经病遗传早发现象观察

目的了解Leber遗传性视神经病(LHON)家系遗传早发现象及其与突变位点的关系。方法调查5个LHON家系,采用DNA测序方法对其中3个家系的31位母系成员和40例健康人的原发突变位点11778和继发突变位点13730、13708、15257进行检测。结果5个被调查的家系中4个存在遗传早发现象,31位母系成员均存在11778位点,无继发位点突变;40例正常人4个位点均无突变。所有受试者中新发现11719和15326位点的突变。结论LHON存在遗传早发现象,但与各突变位点均无明显关系。

河南汉族人群脑梗死患者内皮细胞性一氧化氮合酶基因VN-TR多态性检测

目的:探讨河南汉族人群脑梗死患者(CI)内皮细胞性一氧化氮合酶(ecNOS)基因内含子4可变数目串联重复序列(VNTR)的多态性。方法:应用PCR技术,检测217例脑梗死患者的ecNOS基因内含子4VNTR,并与256例正常对照(对照组)比较。观察组中腔隙性脑梗死45例。结果:CI组VNTR基因型的频率为bb82.95%,ab15.67%,aa0.46%,bc0.92%;对照组中基因型的频率为bb82.81%,ab16.02%,aa0.39%,bc0.78%。2组各基因型频率间差异无统计学意义(P>0.05)。a等位基因的频率在患者组和对照组分别为8.29%,8.39%,差异无统计学意义(P>0.05)。腔隙性脑梗死组和对照组比较,基因型频率和a等位基因的频率差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论:ecNOS基因VNTR的多态性与脑梗死可能无相关性。

河南汉族人群9个Y染色体短串联重复序列单倍型遗传多态性

目的:检测河南汉族人群中DYS456、DYS389Ⅰ、DYS392、DYS389Ⅱ、H4、A7.1、DYS448、DYS393及DYS439等9个Y染色体短串联重复序列(Y-STR)位点构建的单倍型遗传多样性。方法:180名河南汉族健康无关男性个体、50名女性个体及经常染色体STR检测确定的20对真父子和20对非父子为测定对象,应用PCR-聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染显带技术分析上述9个Y-STR位点等位基因及单倍型分布情况。结果:180名河南汉族健康无关男性个体中上述9个位点的等位基因检出数目分别为5、5、8、7、5、5、7、5和5个,基因多样性分别为0.6501、0.6330、0.8147、0.7633、0.5858、0.6857、0.7521、0.7019和0.6472,共检测出180种由上述9个Y-STR位点构建的单倍型,单倍型多样性为1。50名女性样本中均未检测到任何扩增产物。在20对真父子样本中,各父子对的9个Y-STR位点检测结果均完全一致。在20组非父子样本中,各非父子对均有至少5个Y-STR位点的检测结果不一致。结论:上述9个Y-STR位点构建的Y-STR单倍型具有较高的遗传多态性。

河南汉族人群DYS713和DYS720基因位点遗传多态性检测

目的:分析DYS713和DYS720基因位点在河南汉族群体中的遗传多态性分布。方法:应用PCR-聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染显带技术,对203名河南汉族无血缘关系男性个体的Y染色体短串联重复序列基因DYS713和DYS720位点进行分型检测,计算其基因多样性(GD)和个体识别力(DP)。结果:DYS713和DYS720基因位点分别检出8个和10个等位基因,DP值分别为0.7298和0.7778;GD值分别为0.7334和0.7663。结论:DYS713和DYS720基因位点在河南汉族群体中具有较高的多态信息量和高鉴别力,满足法医学对STR位点的选择要求。

纯合子胃壁细胞特异性表达SV40T抗原转基因小鼠品系的建立

目的:建立稳定遗传的纯合子SV40T胃壁细胞定位表达转基因小鼠品系。方法:通过定量PCR法比较已知杂合子小鼠和未知阳性小鼠中外源基因的起始模板量来确定小鼠的基因型,并通过测交的方法来验证试验结果。结果:用定量PCR法选育出15只纯合子小鼠,经测交验证它们与野生型小鼠交配所生的后代均为阳性,证明了定量PCR的结果是正确的。通过纯合子之间的全同胞交配建立了6个独立的纯合子品系。结论:定量PCR具有省时、省力及高通量等优点,能够很好地应用于筛选纯合子转基因动物。

中国人群凝血酶原FⅡG20210A和FVLeiden的分布

目的:探讨FV Leiden(FVL)和FⅡG20210A在中国人群中的分布。方法:利用多重PCR和限制性片段长度多态性方法,检测了676例正常中国人和500例高加索正常人群的FVL和FⅡG20210A的分布情况。结果:中国人群中FVL和FⅡG20210A的分布频率和位点频率均为0.15%和0.07%,其中FVL分布频率与高加索人群比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:FVL和FⅡG20210A在中国人群中分布频率极低,在血栓形成过程中的作用可能很小。

布-加综合征患者FVLeiden、FⅡG20210A突变检测

中图分类号R654.3摘要目的:探讨凝血因子FVLeiden和FⅡG20210A基因多态性与布加综合征(BCS)发病的相关关系。方法:利用多重聚合酶链反应和限制性片段长度多态性(MultiplexPCR-RFLP)方法,检测了53例布加综合征患者与106例正常对照的FVLeiden和FⅡG20210A的突变情况,并加以对照分析。结果:53例B-CS患者与106例正常对照FVLeiden和FⅡG20210A基因多态,均为野生型,未发现纯合突变型与杂合突变型。结论:FVLeiden和FⅡG20210A的分布存在着地理差异与种族异质性,在中国人BCS形成过程中的作用极小。

冠心病和深静脉血栓患者蛋氨酸合成酶基因A2756G多态性检测

目的检测冠心病(CHD)及深静脉血栓(DVT)形成患者蛋氨酸合成酶(MS)基因A2756G的多态性。方法运用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)对103例DVT患者、208例CHD患者和250例健康对照进行MS基因A2756G多态性分析。结果DVT组A/G+G/G型频率为10.7%,低于对照组的19.6%(χ2=4.114,P<0.05),但2组等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论A/G+G/G型可能对静脉血栓的形成具有保护性作用,该型的分布存在种族和地域差异。MS基因A2756G多态可能不是河南汉族人群CHD发生的遗传危险因素。