VPS4B调控Notch通路对促进牙髓干细胞成牙本质分化的机制研究

目的探讨细胞液泡分选蛋白4B(VPS4B)对人牙髓干细胞(hDPSCs)成牙本质分化及Notch通路的影响。方法hDPSCs分正常组、矿化组、阴性对照组、VPS4B-siRNA组,除正常组(正常培养,不做任何处理)外,其余各组添加矿化液(0.785 g/L地塞米松、0.05 g/L维生素、2.16 g/Lβ-甘油磷酸钠),同时阴性对照组和VPS4BsiRNA组均用脂质体Lipofectamine 2000分别和阴性对照siRNA、VPS4B-siRNA共转染。CCK8检测细胞增殖情况;蛋白免疫印迹检测细胞中VPS4B、Notch受体释放其胞内结构域(NICD)、hairy相关转录因子1(Hey1)蛋白水平;茜素红染色观察细胞矿化情况;钙浓度检测试剂盒检测细胞钙浓度;实时荧光定量PCR检测细胞Runx2、骨桥蛋白(OPN)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)mRNA水平。结果正常组茜素红染色较浅,面积较小;矿化组、阴性对照组染色较深,且面积较大;VPS4B-siRNA组染色颜色有所减轻,面积减少。与正常组相比,矿化组、阴性对照组OD450水平,NICD、Hey1蛋白水平降低(P<0.05),矿化结节相对数量,VPS4B蛋白水平,钙浓度,Runx2、OPN、DSPP mRNA水平升高(P<0.05);VPS4B-siRNA组矿化结节相对数量,OPN、DSPP mRNA水平升高(P<0.05);OD450水平,NICD、Hey1蛋白水平降低(P<0.05)。分别与矿化组、阴性对照组相比,VPS4B-siRNA组NICD、Hey1蛋白水平升高(P<0.05);OD450水平,VPS4B蛋白水平,矿化结节相对数量,钙浓度,Runx2、OPN、DSPP mRNA水平降低(P<0.05)。结论干扰VPS4B后可抑制hDPSCs牙本质分化,并初步探究可能是通过激活Notch通路实现的。