磁共振波谱分析在儿童病毒性脑炎中的应用研究

目的通过氢质子波谱分析（^1H-proton magnetic resonance spectroscopy,^1H-MRS）研究病毒性脑炎患儿的颅脑异常生化代谢特点及其临床意义。方法对20例病毒性脑炎患儿进行回顾性分析,行头颅3.0T MRI检查,以病灶部位和对侧正常部位为感兴趣区（ROI）行^1H-MRS检查。分别测定病灶区和对照侧的NAA、NAA/Cr、NAA/Cho,并进行统计学分析。结果 MRI检查均发现病灶,多数病例为多部位受累。^1H-MRS检查结果均有异常,与对照侧比较,病灶区NAA下降,NAA/Cr、NAA/Cho均降低,且病情越重,比值下降越明显。结论Cr、Cho均可以作为脑组织代谢变化的参照指标。MRS与MRI相结合,对儿童病毒性脑炎的早期诊断有重要作用,对病情严重程度和评估预后有显著价值。

靶向人神经母细胞瘤MYCN基因慢病毒载体的构建及鉴定

目的 构建靶向人神经母细胞瘤MYCN基因慢病毒表达载体并检测其对目的基因MYCN的沉默效应.方法 根据MYCN基因信息设计并构建4个靶向MYCN基因的干扰质粒,鉴定后与pLenti6.3/V5 Dest载体重组,并包装成为慢病毒表达载体Lenti-EGFP-MYCN-1/2/3/4-miR,感染人神经母细胞瘤SK-N-BE（2）细胞株,并应用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）和Western blot检测4个慢病毒表达载体对MYCN mRNA和蛋白表达的沉默效应,筛选出最佳干扰靶序列慢病毒表达载体.结果 酶切和测序结果证实4个靶向MYCN基因的慢病毒载体构建成功,感染SK-N-BE（2）细胞后,应用FQ-PCR和Western blot检测MYCN mRNA和蛋白的表达水平分别为0.577±0.015、0.333 ±0.016、0.090±0.010、0.197 ±0.015和0.833±0.049、0.563±0.040、0.300±0.020、0.387±0.015,其中Lenti-EGFP-MYCN-3-miR对MYCN基因抑制作用最为显著,为最佳干扰靶序列慢病毒表达载体.结论 成功构建慢病毒表达载体可高效感染体外培养的人神经母细胞瘤SK-N-BE（2）细胞株,并可显著抑制靶基因MYCN mRNA和蛋白的表达.

肺炎链球菌溶血素致大鼠脑损伤模型髓样细胞触发受体1的动态变化及意义

目的 探讨髓样细胞触发受体1（TREM-1）在肺炎链球菌溶血素（PLY）致大鼠脑损伤中的动态变化及意义.方法 将64只SD大鼠按简单随机法均等分为PLY组和对照组,分别经左侧颈内动脉注射0.1mL PLY和等体积灭菌9g/L盐水;观察注射后4h、6h、12 h和24 h不同时间点脑组织大体和组织学变化,并应用免疫组织化学法检测脑组织中神经细胞损伤标志物胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和神经元特异性烯醇化酶（NSE）蛋白表达水平,同时应用酶联免疫吸附法检测TREM-1、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及白细胞介素6（IL-6）表达水平.结果 PLY组脑组织大体和组织学结果提示大鼠脑损伤存在,且脑组织中GFAP和NSE蛋白表达及TNF-α和IL-6表达在4h开始增加,随注射时间点推移,其表达水平动态增加,与相应时间点对照组相比,差异均有统计学意义（P均＜0.05）.PLY组脑组织TREM-1蛋白表达在4h明显增加,在6h有所下降,但仍高于对照组,差异均有统计学意义（P均＜0.05）,12 h与24 h TREM-1蛋白表达水平明显下降,与对照组相比差异无统计学意义（P均＞0.05）.结论 TREM-1蛋白表达在PLY诱发的大鼠脑损伤早期明显上调,可能通过促进炎性因子TNF-α和IL-6的表达而参与脑损伤的病理发展过程.

间变性淋巴瘤激酶抑制剂对人神经母细胞瘤细胞凋亡的影响

目的 观察间变性淋巴瘤激酶（ALK）抑制剂TAE684对人神经母细胞瘤SK-N-BE（2）细胞凋亡水平及凋亡蛋白表达的影响.方法 应用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测不同TAE684浓度滴度（1、5、25、125、625 nmol/L）对体外培养的SK-N-BE（2）细胞作用的合适终质量浓度,Western blot检测TAE684对ALK蛋白和凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白（bax）和cleaved半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3表达的影响,流式细胞术检测细胞凋亡水平.结果 TAE684对SK-N-BE（2）细胞的半数抑制浓度（IC50）值为115 nmol/L,TAE684组ALK和bcl-2蛋白表达下调,分别为0.036±0.003和0.190±0.015;而bax和cleaved Caspase-3蛋白表达明显上调,分别为0.161 ±0.003和0.949±0.003,凋亡水平明显升高,为22.593 ±0.075.TAE684组与对照组和二甲基亚砜（DMSO）组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 ALK抑制剂TAE684可能通过对凋亡分子的调控来实现对体外培养的SK-N-BE（2）细胞凋亡促进作用.