PARP抑制剂调节肿瘤免疫的研究进展

多聚ADP核糖聚合酶[poly(ADP-ribose) polymerase,PARP]超家族由17种具有不同功能的蛋白质组成,负责将ADP-核糖基团转移到靶蛋白以启动ADP-核糖基化,这是所有生物体中高度保守的翻译后修饰。PARP家族参与多种细胞功能的调节,包括染色质结构、转录、复制、重组和DNA修复。依据结构和功能的不同,PARP家族成员包括DNA依赖型、端锚聚合酶型、Cys-Cys-Cys-His型和macroPARP型等4种类型[1]。

丹参多酚酸盐对肾间质纤维化模型大鼠的改善作用及机制研究

目的:研究丹参多酚酸盐对肾间质纤维化(RIF)模型大鼠的改善作用及可能机制。方法:将50只雄性SD大鼠按体质量随机分为正常组、模型组、氯沙坦组(阳性对照组,9 mg/kg)和丹参多酚酸盐低、高剂量组(18、36 mg/kg),每组10只。除正常组外,其余各组大鼠均灌胃腺嘌呤250 mg/kg建立RIF模型。造模结束后,各给药组大鼠灌胃相应药物,正常组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水,灌胃体积均为10 mL/kg,每天1次,连续30天。末次给药后,采用酶联免疫吸附测定法检测大鼠血清中肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)和尿液中24 h尿蛋白(24 h UPro)水平;采用苏木精-伊红染色法和Masson染色法分别观察大鼠肾组织病理学特点和纤维化情况,对肾小管损伤、肾小球硬化程度进行评分并计算肾组织阳性染色面积百分比;采用免疫组化法和Western blot法分别测定大鼠肾组织中Wnt蛋白(Wnt5a、Wnt5b)、β-联蛋白(β-catenin)的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠Scr、BUN、24 h UPro水平和肾小管损伤评分、肾小球硬化评分、肾组织阳性染色面积百分比以及Wnt5a、β-catenin蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05),Wnt5b蛋白的表达水平显著降低(P<0.05);显微镜下可见大鼠肾组织出现系膜增生、纤维组织增多、炎性细胞浸润等病理学变化。与模型组比较,氯沙坦组和丹参多酚酸盐低、高剂量组大鼠的上述指标均显著改善(P<0.05),且丹参多酚酸盐的作用具有一定的剂量依赖性趋势。结论:丹参多酚酸盐对腺嘌呤致RIF模型大鼠具有改善作用,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

Transgelin-2对牙龈卟啉单胞菌感染的食管鳞状细胞癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨沉默Transgelin-2对牙龈卟啉单胞菌(PG)感染的食管鳞状细胞癌细胞(ESCC)恶性生物学行为的影响及可能的机制。方法:将NE6-C或KYSE140细胞分为4组处理,分别转染siControl、感染PG(感染复数10)、转染siTAGLN-2、转染siTAGLN-2+感染PG。CCK-8法检测细胞增殖,BrdU标记法检测细胞周期,Transwell小室实验检测细胞的迁移及侵袭能力,免疫荧光法检测细胞中Transgelin-2、F-actin、E-cadherin和Vimentin蛋白的分布,Western blot法检测Transgelin-2、E-cadherin和Vimentin蛋白的表达。结果:PG感染单独作用可以增加NE6-C和KYSE140细胞的增殖速率,增加S期细胞比例、侵袭细胞数和迁移细胞数(P<0.05);上调Transgelin-2表达(P<0.05),减少F-actin;下调E-cadherin表达,上调Vimentin表达(P<0.05)。转染siTAGLN-2可以显著拮抗PG感染的上述效应(P<0.05)。结论:Transgelin-2可能通过介导改变ESCC细胞骨架,从而抑制了PG感染诱导的ESCC恶性进展。

脑源性神经营养因子介导卒中后抑郁的病理机制研究

目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)在卒中后抑郁(PSD)中的神经保护作用。方法采用目前公认的大脑中动脉闭塞法(MCAO),建立C57BL/6J小鼠脑卒中模型,磁共振成像(MRI)在活体状态下检测小鼠脑区呈像。以糖水偏爱试验(SPT)和旷场试验(OFT)行为学评定,筛选出抑郁状态的小鼠作为PSD模型。在对照组、MCAO组和PSD组进行原位缺口末端标记法(TUNEL)染色和FJ-C染色观察3组小鼠在不同脑区发生凋亡或变性的神经元。蛋白质印迹法(Western blot)检测对照组、MCAO组、抑郁组和PSD组BDNF蛋白表达情况。结果MRI检查MCAO术后7 d小鼠脑区成像,显示在皮层、海马和纹状体均有不同程度的脑水肿,FJ-C染色显示在不同脑区均有绿色标记阳性的变性细胞。对照组小鼠无阳性标记的细胞,MCAO术后3周和PSD组均有TUNEL红色标记阳性的凋亡细胞和FJ-C标记阳性的变性细胞,PSD组小鼠发生凋亡和变性的神经元细胞数量较MCAO组小鼠显著增多,以海马区最为显著。PSD组小鼠BDNF蛋白表达水平显著低于MCAO组(t=2.898,P<0.01)。结论BDNF在卒中后抑郁表达减少,进而影响海马神经发育和突触可塑性。

应用随机寡核苷酸文库修饰磁性颗粒提高血浆蛋白质的鉴定覆盖度

基于随机寡核苷酸与蛋白质之间的离子、亲和、疏水、氢键等相互作用力及多种空间结构作用,发展了一种基于随机寡核苷酸文库作为配基的新型血浆样品处理方法。采用寡核苷酸文库修饰的磁性颗粒(MNP@ssDNA)材料,在生理缓冲体系条件下捕获血浆样品中的蛋白质。比较了两种洗脱体系的洗脱效果,并利用nano-RPLC-ESIMS/MS对获得的蛋白质酶解液组分进行分析。结果表明,MNP@ssDNA材料处理后的血浆蛋白质鉴定数量提升了约29.5%,两种洗脱体系呈现良好的互补性(26.7%)。血浆中前10种高丰度蛋白质的谱图占有率从处理前的31.82%降低到21.31%(洗脱体系1)和26.20%(洗脱体系2)。在鉴定到的蛋白质中,丰度最低的蛋白质在血浆中的质量浓度约为0.29 ng/mL,该蛋白质仅在MNP@ssDNA材料处理后被鉴定到。结果证明MNP@ssDNA策略不仅能有效降低血浆中高丰度蛋白质的丰度,也为低丰度蛋白质的深度挖掘提供了新的思路。

固定化β-葡萄糖醛酸酶反应器的制备及其在4-甲基亚硝胺基-1-(3-吡啶)-1-丁醇的O-糖苷化合物分析中的应用

采用溶胶-凝胶法,以丙烯酰胺作为单体,制备了基于有机-硅胶杂化整体柱的β-葡萄糖醛酸酶反应器。优化了硅酸甲酯和γ-(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅的物质的量的比、丙烯酰胺和聚乙二醇的用量,以及水浴温度等制备条件,获得了孔隙均匀、通透性良好、机械强度高的有机-硅胶杂化整体柱。采用光学显微镜和扫描电镜表征杂化整体柱。进一步将β-葡萄糖醛酸酶共价键合在整体柱上,以4-甲基亚硝胺基-1-(3-吡啶)-1-丁醇(NNAL)的O-糖苷化合物(NNAL-O-Gluc)为底物研究酶反应器的水解效果,实验结果证明酶反应器在室温条件下的水解效率大大提高,实现了NNAL-O-Gluc高效水解与分析,解决了目前NNAL-O-Gluc分析中前处理水解效率低的问题。

人参皂苷Rb1通过调节TGF-β1/Smad3信号通路抑制肾小管上皮细胞-间质转化

目的研究人参皂苷Rb1(G-Rb1)对肾小管上皮细胞-间质转化(EMT)的影响及可能机制。方法采用10 ng/mL生长因子β_(1)(TGF-β_(1))诱导人肾小管上皮细胞HK-2发生EMT。观察10、20、30μmol/L G-Rb1作用48 h后HK-2细胞的形态学变化;测定1.0、2.5、5.0、10、20、30μmol/L G-Rb1作用24 h后人胚胎肾细胞HEK293中报告基因载体SBE转录活性,并测定上述浓度G-Rb1作用24 h后对HK-2细胞相对活力的影响。检测10、20、30μmol/L G-Rb1作用24 h后HK-2细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)、纤连蛋白(FN)mRNA的表达;检测10、20、30μmol/L G-Rb1作用24 h后HK-2细胞中α-SMA、Smad家族成员3(Smad3)、磷酸化Smad3(p-Smad3)、COL-Ⅰ、FN和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。结果10~30μmol/L G-Rb1能够抑制TGF-β_(1)诱导的HK-2细胞发生EMT,显著抑制因TGF-β_(1)刺激导致的SBE转录活性升高(P<0.05),并且对HK-2细胞的相对活力无明显影响(P>0.05)。在TGF-β_(1)诱导下,细胞中α-SMA、COL-Ⅰ、FN蛋白及其mRNA和Smad3、p-Smad3蛋白的表达均显著上调(P<0.05),E-cadherin蛋白的表达显著下调(P<0.05);而G-Rb1则可有效地逆转上述蛋白或mRNA的表达。结论G-Rb1可在一定程度上保护肾小管上皮细胞免受TGF-β_(1)诱导引起的EMT,这可能与其抑制了TGF-β_(1)/Smad3信号通路的激活有关。

TFEB通路的大豆苷抑制高糖诱导的肾小球系膜增殖作用机制

〔目的〕考察大豆苷在高糖条件下对肾小球系膜细胞增殖作用的影响,并探讨其可能作用机制。〔方法〕MTT法检测肾小球系膜细胞增殖水平;荧光素酶报告基因法评估大豆苷对PPAR⁃α、TFEB转录活性影响;Q⁃PCR法检测TGF⁃β1、collagenⅣ、TFEB、LIMP2的mRNA表达量;Docking分析大豆苷和PPAR⁃α⁃LBD的结合情况。〔结果〕10、20μmol/L大豆苷组显著抑制高糖刺激下肾小球系膜细胞增殖,同时5、10、20μmol/L大豆苷组显著降低高糖条件下TGF⁃β1、colla⁃genⅣ的mRNA表达量;相比空白对照组,大豆苷能够促进PPAR⁃α、TFEB荧光素酶活力;PPAR⁃α的选择性抑制剂(GW6471)逆转了大豆苷TFEB转录活性的增加;大豆苷增加TFEB、LIMP2的mRNA的表达量,大豆苷在PPAR⁃α⁃LBD的THR279、CYS⁃278、GLU282三个氨基酸位点处与其形成稳定的氢键。〔结论〕大豆苷能够抑制高糖条件下肾小球系膜的增殖,其机制可能与结合PPAR⁃α⁃LBD调控TFEB有关。

靶向CCL21/CCR7轴治疗肿瘤转移的研究进展

转移是肿瘤患者死亡最常见的原因,而淋巴转移是大多数肿瘤转移的主要途径之一。近年来,CC趋化因子配体21(CC chemokine ligand 21,CCL21)及其受体CC趋化因子受体7型(CC chemokine receptor type 7,CCR7)在淋巴转移中的作用逐渐受到关注。CCL21主要由淋巴内皮细胞产生,其与树突状细胞(Dendritic cells,DCs)和T细胞等表面CCR7的相互作用是免疫细胞淋巴迁移及淋巴结归巢的主要决定因素。然而,表达CCR7的肿瘤细胞也可以利用类似的机制进入淋巴管进行淋巴转移。如何靶向CCL21/CCR7轴,既能抑制淋巴转移,又不影响抗肿瘤免疫反应已成为肿瘤免疫治疗研究的重要议题。文中将对CCL21/CCR7轴在淋巴转移中的作用及其作为靶点治疗肿瘤转移的临床前和临床试验研究进行综述,为靶向CCL21/CCR7信号轴治疗肿瘤转移的相关研究提供参考。