不同肺动脉阻断时间对肺缺血性损伤程度的影响

目的探讨不同肺动脉阻断时间对肺缺血性损伤程度的影响,试图寻找一个相对安全的阻断时间。方法选用Wistar大鼠18只,随机分为空白对照组、30min阻断组及60min阻断组。制作大鼠原位肺动脉阻断模型,分别在气管插管后行常规肺门游离,空白对照组行持续灌注及通气,余下两组分别行30min及60min肺动脉及支气管阻断。检测缺血前、再灌注5min后动脉血氧分压(PaO2)、肺组织湿干比重(W/D)、肺水肿情况及肺组织中丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)的含量。结果(1)30min阻断组的PaO2、湿干比重、MDA含量和SOD含量与对照组之间无显著差异(P>0.05);(2)60min阻断组的PaO2及SOD含量明显低于对照组(P<0.05),湿干比重及MDA含量则明显高于对照组(P<0.05);(3)病理学结果提示60min阻断组肺水肿表现最为明显;(4)术后PaO2与湿干比重之间存在着负相关关系(r=-0.887,P<0.05)。结论在不抗凝、不通气的情况下,暂时阻断大鼠肺动脉30min不会对肺功能有明显的损害。

VEGF-C、VEGFR-3在老年肺鳞状细胞癌组织中的表达及意义

目的探讨血管内皮生长因子C(VEGF-C)、血管内皮生长因子受体3(VEGFR-3)蛋白表达与老年肺鳞状细胞癌(简称肺鳞癌)淋巴管生成以及淋巴结转移的相互关系及老年肺鳞癌淋巴结转移的分子机制。方法应用免疫组化检测53例老年人肺鳞癌组织、26例癌旁肺组织、20例正常肺组织中VEGF-C蛋白表达情况和VEGFR-3阳性微淋巴管数。结果VEGF-C蛋白在老年肺鳞癌组织细胞浆中高表达(表达率62.3%),其表达率比癌旁肺组织和正常肺组织高(P<0.05);老年肺鳞癌组织VEGFR-3阳性微淋巴管数(11.08±4.39)个,比癌旁肺组织和正常肺组织高(P<0.05);VEGF-C蛋白表达与老年肺鳞癌淋巴结转移情况(P<0.05)及TNM分期(P<0.05)密切相关;VEGFR-3阳性微淋巴管数与老年肺鳞癌淋巴结转移情况(P<0.05)及TNM分期(P<0.05)密切相关;老年肺鳞癌组织中VEGF-C阳性表达与VEGFR-3阳性微淋巴管数呈明显正相关(P<0.05,r=0.530)。结论VEGF-C和VEGFR-3在老年肺鳞癌的淋巴结转移过程中发挥重要作用;VEGF-C蛋白表达协同VEGFR-3阳性微淋巴管数可用于指导老年肺鳞癌的早发现、早诊断和早治疗。

人肝癌细胞株与正常肝细胞株MicroRNA差异表达谱研究

目的建立SMMC-7721人肝癌细胞株与CCC-HEL-1人正常肝细胞株MicroRNA（miRNA）差异的表达谱，确定差异的miRNA，为进一步研究miRNA在肝细胞癌变机制中的作用和肝癌的治疗提供新的线索。方法体外培养SMMC-7721人肝癌细胞株和CCC-HEL-1人正常肝细胞株。用TRIzol法提取细胞的总RNA。用紫外吸收测定法和变性琼脂糖凝胶电泳对RNA进行质量检测。用miRNA芯片技术检测细胞株中miRNA表达。用实时PCR对感兴趣的miRNA进行验证。结果芯片筛选结果显示肝癌细胞株中上调2倍以上的miRNA有154个，4倍以上的miRNA有64个，10倍以上的miRNA有26个；下调2倍以上的84个，下调的4倍以上的22个，下调5倍以上的有10个，下调10倍以上的一个。实时PCR验证结果提示hsa—miR205和hsa-let-7f在肝癌中上调2．7和2．3倍。结论SMMC-7721和CCC-HEL-1细胞株之间存在差异性表达的miRNA分子。在建立的两株细胞miRNA差异表达谱中，发现hsa-miR-205和has-let-7f在肝癌中明显上调。

乳头状甲状腺癌患者血清中特异性标志物的检测与鉴定

目的 探讨并鉴定乳头状甲状腺癌患者血清中肿瘤相关蛋白作为特异性标志物的可能性。方法 应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术检测35例乳头状甲状腺癌、40例甲状腺良性结节和34例健康对照者的血清标本，应用生物信息学方法筛选差异蛋白峰，经高效液相色谱（HPLC）分离出差异蛋白，酶解后进行液质联用串联质谱（LC-MS／MS）分析，用SEQUEST检索程序查询Bioworks数据库蛋白序列进行鉴定。结果筛选出6个最显著的差异蛋白质，质荷比（M／Z）分别位于6651、6452、7653、7932、15106和15848。M／Z位于6651、6452处的蛋白质在乳头状甲状腺癌组表达低于甲状腺良性结节和健康对照组；M／Z位于7653、7932、15106、15848处的蛋白质在乳头状甲状腺癌组表达高于甲状腺良性结节和健康对照组，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。联合6种潜在蛋白质标志物，区别乳头状甲状腺癌和非乳头状甲状腺癌的特异度为88．0％，敏感度为92．5％。M／Z位于6651、6452、7653和15106、7932和15848处的蛋白标志物分别为载脂蛋白C—Ⅰ、载脂蛋白C-Ⅲ、α-珠蛋白、β-珠蛋白。结论鉴定出的载脂蛋白C—Ⅰ、载脂蛋白C-Ⅲ、α-珠蛋白和β-珠蛋白在乳头状甲状腺癌的诊断中具有一定的价值和广泛的应用前景，值得进一步研究和探讨。

肾母细胞瘤患儿血清蛋白质标记物的筛选及鉴定

目的筛选肾母细胞瘤患儿特异性血清蛋白质标记物并对其进行鉴定，以确定其作为肾母细胞瘤血清学诊断和预后监测的特异标志物。方法应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术检测肾母细胞瘤患儿手术前后及正常小儿的血清蛋白质组，筛选差异蛋白质峰，并对目标蛋白质进行分离纯化、酶解，采用液质联用串联质谱（LC—MS／MS）分析，用SEQUST检索程序查询美国Bioworks公司提供的蛋白质序列数据库。结果经SELDI—TOF—MS技术筛选出m／z位于6455．5和6984．4的蛋白质标志物在肾母细胞瘤组低表达（表达强度为1029±364、297±126），正常小儿组高表达（2108±837、753±226），差异均有统计学意义（均P〈0．01）；m／z位于9190．8的蛋白质标志物在肾母细胞瘤术前组低表达（283±154），术后组和正常小儿组高表达（5974±657、6231±519）差异均有统计学意义（均P〈0．01）。对m／z位于6455．5和9190．8的标志物进行鉴定，结果分别为载脂蛋白CⅢ和触珠蛋白。结论检测血清中载脂蛋白CⅢ和触珠蛋白含量可能成为肾母细胞瘤的血清学诊断、恶性度分级和预后监测指标，值得进一步研究与应用。

5-aza-CdR对肝癌SMMC7721细胞株PDCD4基因甲基化及表达的影响

目的研究5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-aza-CdR）在肝癌细胞株SMMC7721中对程序性细胞死亡因子4（PDCD4）表达的影响及可能机制。方法培养肝癌细胞株SMMC7721，用5-aza-CdR处理肝癌细胞株SMMC7721，Western-blotting检测DNMT3b、PDCD4蛋白在处理前后的变化，甲基化特异性PCR即MSP检测PDCD4基因启动子区域甲基化水平。结果1×10mol／L、5×10^-6 mol／L的5-azaCdR作用于SMMC7721细胞后，DNMT3b表达水平降低，而PDCD4表达水平升高，且浓度之间有差异；MSP示药物处理前PDCD4启动子区域处于高甲基化水平，在用5×10^-6mol／L药物处理后，其启动子发生了去甲基化。结论5-aza-CdR可以抑制DNMT3b在SMMC7721中的表达，且可能通过改变抑癌基因PDCD4启动子甲基化状态影响PDCD4表达。

TSA对人肝癌细胞株E-cadherin启动子区甲基化及表达的影响

目的探讨去乙酰化转移酶抑制剂TSA对人肝癌SMMC-7721细胞株E-cadherin基因（E-cad）启动子区甲基化及其表达的影响。方法TSA（300nm／L）处理人肝癌SMMC-7721细胞，MTT法、TUNEL染色法分别检测细胞生长抑制及凋亡情况，甲基化特异性的PCR（methylation-specific PCR，MSP）检测处理前后E-cad启动子区CpG岛甲基化状态；Western blot检测处理前后E-cad及DNMT3b表达水平的变化。结果TSA能抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长并诱导其发生凋亡，与对照组相比，实验组细胞生长抑制率为21.85％，对照组细胞凋亡率为（4.69±0.56）％，实验组凋亡率为（14.94±0.91）％，与对照组相比，凋亡细胞明显增多（P=0.000）。用药前E-cad启动子区CpG岛为甲基化状态，E-cad蛋白表达阴性。TSA处理后E-cad启动子区CpG岛发生脱甲基化，E-cad蛋白恢复表达。TSA亦导致DNMT3b的表达水平降低。结论去乙酰化转移酶抑制剂TSA能抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长，并可诱导其发生凋亡，逆转E-cad基因启动子区的甲基化状态，并恢复该基因表达。TSA有可能通过DNMT3b发挥脱甲基化作用。

DNMT3b对肝癌细胞株中DLC-1的表达及启动子区甲基化状况的影响

目的探讨DNA甲基化转移酶3b（DNMT3b）对人肝癌细胞株SMMC-7721中DLC-1基因的表达及其启动子区甲基化状况的影响。方法将sMMC-7721细胞株分为两组，试验组应用siRNA技术沉默DNMTab的表达，对照组仅转染对照siRNA；应用Western Blot技术分别检测两组细胞中DNMT3b和DLC-1的表达，并应用甲基化特异性PCR（MSP）技术分别检测两组细胞中DLC-1基因启动子区的甲基化状况。结果试验组中DNMT3b的表达明显低于对照组，而DLC-1的表达明显高于对照组；两组中DLC1启动子区甲基化状态无差异，均发生甲基化。结论siRNA技术抑制DNMT3b的表达可使DLC-1基因表达水平增高，但DLC-1启动子区甲基化状态无变化。此过程中DNMT3b并非作为甲基转移酶，而可能是作为转录调控因子影响DLC-1的表达。