METTL3 N6-甲基腺嘌呤修饰circSAFB2调控骨肉瘤细胞侵袭和凋亡

目的观察甲基转移酶(METTL3)介导N6-甲基腺嘌呤(m6A)修饰修饰circSAFB2对骨肉瘤细胞侵袭和凋亡的影响。方法选取经病理确诊的骨肉瘤标本16例及骨肉瘤细胞株MG63, qRT-PCR检测骨肉瘤组织与MG63细胞中METTL3 mRNA和circSAFB2的表达水平。使用SRAMP prediction server在线预测软件对circSAFB2中m6A甲基化位点进行预测, 并通过m6A MeRIP-qPCR对骨肉瘤组织和MG63细胞中circSAFB2存在m6A甲基化修饰进行验证。应用MeRIP-qPCR检测骨肉瘤组织和MG63细胞中circSAFB2 m6A甲基化修饰水平。分别将METTL3 siRNA重组慢病毒、METTL3 NC重组慢病毒感染骨肉瘤细胞后, 通过放线菌素D、Transwell和流式细胞仪分别检测各组细胞RNA稳定性、侵袭和凋亡, 两样本两组间比较用t检验;多组间比较采用单因素方差分析、组间比较采用LSD法。结果 METTL3 mRNA(2.354±0.224)和circSAFB2(2.072±0.264)在骨肉瘤组织中的表达量高于癌旁组织(1.000±0.089、1.000±0.104, P<0.05)。骨肉瘤细胞系MG63中METTL3(2.429±0.211)和circSAFB2 mRNA(2.271±0.214)表达量高于正常人成骨细胞(1.000±0.100、1.000±0.136, P<0.05)。SRAMP在线m6A甲基化位点预测结果显示, circSAFB2的115和234位存在m6A甲基化修饰位点;骨肉瘤组织和MG63细胞中, m6A抗体免疫共沉淀的circSAFB2丰度(18.397±1.627、23.338±2.225)均显著高于IgG抗体(1.000±0.130、1.000±0.060, P<0.01), 证实circSAFB2上存在m6A甲基化修饰。MeRIP-qPCR检测结果显示, 骨肉瘤组织circSAFB2 m6A RNA甲基化修饰水平(3.264±0.217)高于癌旁组织(1.000±0.070, P<0.05);MG63细胞中circSAFB2 m6A RNA甲基化修饰水平(3.379±0.205)高于正常人成骨细胞(1.000±0.064, P<0.05)。转染METTL3 siRNA重组慢病毒的MG63细胞(si-METTL3组), 放线菌素D处理6 h和12 h, circSAFB2表达水平(72.570±4.809、52.195±3.081)低于转染METTL3 NC重组慢病毒组(si-NC组)(87.540±5.539、71.131±4.320, P<0.05)。si-METTL3组侵袭数量(54.333±6.429)低于si-NC组(124.667±13.577, P<0.05);凋亡率[(25.105±1.638)%]高于si-NC组[(7.241±0.533)%, P<0.05]。结论骨肉瘤组织细胞中METTL3可通过m6A修饰circSAFB2调控骨肉瘤细胞的侵袭和凋亡。