黄芪诱导人脐带间充质干细胞分化为神经样细胞的实验研究

目的 研究原代人脐带间充质干细胞（UCMSCs）的生物学特性及其体外向神经细胞诱导分化的条件,为组织化人工神经的制备提供干细胞资源.方法 无菌条件下从人脐带华尔通胶（Wharton jelly）分离并贴壁培养人UCMSCs,免疫组化技术检测UCMSCs表面特异标志物表达;四组细胞分别加入单纯培养液空白对照组（A组）、单纯生长因子诱导组（B组）、单纯黄芪诱导组（C组）和黄芪联合生长因子诱导液（D组）,倒置显微镜下观察其形态并检测NSE、NF和GFAP的阳性表达,结果进行统计学分析.结果 人UCMSCs表面标记CD29、CD44、CD105强阳性,CD106弱阳性,CD34、CD45阴性,符合人UCMSCs的特征;人UCMSCs经黄芪诱导后细胞表面GFAP、NSE均为强阳性表达.结论 人UCMSCs可以在体外采用组织块贴壁培养法培养成功,黄芪可将人UCMSCs成功的诱导为神经样细胞,为组织化人工神经的制备和周围神经缺损的治疗提供了新的方法.

淫羊藿苷诱导入脐带间充质干细胞分化为成骨细胞的实验研究

目的 研究淫羊藿苷对脐带间充质干细胞的生物学作用,以及诱导其向成骨细胞分化.方法体外分离、培养及扩增人脐带间充质干细胞,免疫组化技术检测人脐带间充质干细胞（huCMSCs）表面特异标志物表达.取第3代细胞,设立2组,空白对照组加入基础培养基,实验组加入淫羊藿苷诱导.用倒置光学显微镜、碱性磷酸酶染色、碱性磷酸酶活性测定细胞.进行对比,研究人脐带间充质干细胞增殖和分化规律.结果 免疫组化结果显示huCMSCs表面标记CD44、CD34阴性,检测结果符合huCMSCs的特征.随着培养天数的增加,淫羊藿苷组诱导后细胞液中成骨细胞特征性碱性磷酸酶强阳性表达及钙沉积.淫羊藿苷组细胞内ALP含量与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 huCMSCs可以在体外采用组织块贴壁培养法培养成功,淫羊藿苷对人脐带间充质干细胞的增殖和成骨分化具有促进作用,可作为骨性诱导因子.

人脐带间充质干细胞复合去细胞神经基膜管修复火鼠坐骨神经缺损

目的探讨诱导后的脐带问充质干细胞作为组织工程种子细胞修复大鼠坐骨神经缺损的可行性一方法从正常足月新生儿脐带中分离培养问充质干细胞并诱导分化为神经样细胞，与去细胞神经基膜管共培养以构建组织工程神经：用30只健康成年雄性sD大鼠建立坐骨神经缺损（10mm）的动物模型并随机分成3组：A组为脐带间充质干细胞复合去细胞神经基膜管组，B组为单纯去细胞神经基膜管组．C组为自体神经桥接组，、术后10周通过神经电生理检测、组织学观察等评测效果。结果在局部观察和肌肉测量、神经电生理检测、组织学观察等方面，脐带问充质干细胞复合去细胞神经基膜管组（A组）神经再生及肢体功能情况良好，效果接近于自体神经桥接组（C组），明显优于单纯去细胞神经基膜管组（B组）。结论脐带问充质十细胞复合去细胞神经基膜管构建的组织工程神经可有效促进大鼠坐骨神经缺损（10tnm）的修复、

1，25（OH）2VD3对人脐带间充质干细胞增殖及成骨分化的影响

目的研究人脐带组织间充质干细胞（UCMSCs）体外分离、扩增的方法，探讨不同浓度的1，25（OH）2维生素D3[1，25（OH）2VD3]对人UCMSCs增殖及成骨分化的影响。方法利用组织块贴壁法分离并培养人UCMSCs，通过免疫组化技术对其鉴定：取生长状态良好的第3代人UCMSCs进行干预实验，设置10^-7、10^-9和10^-11mol／L3种浓度的1，25（OH）2VD3作为实验组，并设空白对照组（常规DMEM培养基）。动态观察干预前、后各组细胞的形态变化，四唑盐（MTT）比色法观察细胞增殖，免疫组化法检测碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原蛋白表达，茜素红染色观察矿化结节形成情况。结果组织块贴壁培养法可获得人UCMSCs，免疫细胞化学显示CD44、CD105强阳性，CD34、CD45阴性，符合人UCMSCs的特征；1，25（OH）2VD3对人UCMSCs增殖的影响表现为少于7d促进增殖，超过7d则抑制增殖，高剂量组（10^-7mol／L组）抑制干细胞增殖效应更明显，不同浓度效应与时间效应之间存在交互作用（P〈0．05）；1，25（OH）2VD3对人UCMSCs成骨分化影响表现为10^-11mol／L组促碱性磷酸酶和Ⅰ型胶原蛋白分泌作用高于10^-7和10^-9mol／L组，低剂量1，25（OH）2VD3促进成骨细胞分化作用更明显（P〈0．05）；1，25（OH）2VD3可促进人UCMSCs钙化结节的形成。结论采用组织块贴壁培养法可以成功获得人UCMSCs，1，25（OH）2VD3可有效调节人UCMSCs增殖并促进其向成骨细胞分化。

足底内侧皮瓣在修复足部软组织缺损中的应用

目的探讨足底内侧皮瓣在前足软组织缺损中的应用价值。方法对8例足部软组织缺损患者使用足底内侧皮瓣进行修复，标记内踝与足跟间胫后动脉走行投影线，标出内踝前缘延续线与足底内侧缘交点，此处定为皮瓣旋转点。从旋转点至第1、2跖骨头间划一直线，为皮瓣设计的轴心线。在轴心线两侧各5cm、跖骨头后面足底的非负重区，按照足部扩创后创面的大小和形状设计皮瓣。结果8例皮瓣全部成活，伤口愈合良好，随访6～13个月，受区不臃肿、外观满意；供区外形恢复良好，未有感觉异常。结论使用足底内侧皮瓣修复足部软纽织缺损简单灵活，治疗安全性高，功能外形恢复良好。