促红细胞生成素对输尿管梗阻解除后幼鼠肾脏水通道蛋白2表达及功能的影响

目的探讨促红细胞生成素（EPO）对输尿管梗阻-解除梗阻后（BUO—R）幼鼠肾脏水通道蛋白2（AQP2）表达及功能的影响。方法幼年SD大鼠32只，按随机数字表法随机均分为BUO组、BUO．R组、BUO-R＋EPO组和假手术（Sham）组，每组8只。实验组大鼠均行双侧输尿管结扎，BUO组梗阻24h后处死；BUO—R组和BUO-R＋EPO组梗阻24h后解除梗阻，BUO-R＋EPO组分别于解除梗阻后2h、6h、12h、24h和36h腹腔注射EPO（每次剂量500U／kg），48h后处死；BUO—R组在相同时间点腹腔注射等量9g／L盐水，48h后处死；Sham组只分离输尿管，不结扎，72h后处死。幼鼠处死前，代谢笼内收集尿液进行渗透压检测。留取双侧肾脏标本，采用Real—timePCR、免疫组织化学及Westernblot检测各组肾脏组织中AQP2mRNA及蛋白表达水平。结果Sham组尿液渗透压最高，BUO—R＋EPO组次之，BUO—R组最低（P〈0．05）。免疫组织化学结果显示BUO组、BUO—R组和BUO—R＋EPO组集合管管壁变薄、管腔增大，经Image—ProPlus图像分析软件统计分析，BUO组内髓集合管AQP2阳性染色弱于其他3组，Sham组表达最强，BUO—R＋EPO组和BUO—R组次之（P〈0．05）。经Westernblot进一步验证，BUO组AQP2蛋白表达水平低于BUO—R＋EPO组、BUO—R组和Sham组（P〈0．05）。经Real—timePCR检测，4组幼鼠肾脏组织中AQP2mRNA表达水平差异有统计学意义（P〈0．05），Sham组表达最多，是BUO组的（24．30±1．03）倍、BUO—R组的（10．60±1．05）倍、BUO—R＋EPO组的（5．70±1．01）倍。结论EPO可促进BUO—R幼鼠肾脏AQP2mRNA、蛋白表达及功能恢复。

促红细胞生成素对双侧输尿管梗阻解除后幼鼠肾脏水通道蛋白-1表达及功能的影响

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对双侧输尿管梗阻-梗阻解除(BUO-R)后幼鼠肾脏水通道蛋白-1(AQP-1)表达及功能的影响。方法幼年雄性SD大鼠48只,随机号码表法分为双侧输尿管完全梗阻(BUO)组(n=6)、双侧输尿管梗阻-梗阻解除(BUO-R)组(n=12)、BUO-R+EPO组(n=12)及假手术组(Sham组)(n=18)。实验组采用输尿管结扎法建立双侧输尿管完全梗阻模型,BUO组梗阻24 h后处死;BUO-R组和BUO-R+EPO组梗阻24 h后解除梗阻,BUO-R+EPO组于解除梗阻后1 h、1 d、3 d、5 d给予EPO腹腔注射(500 IU/kg),BUO-R组相同时间点给予同等剂量的9 g/L盐水,分别在解除梗阻后3 d、7 d处死幼鼠;Sham组仅分离输尿管,不予结扎,分别于梗阻术后24 h、解除梗阻后3 d、7 d处死幼鼠,各组幼鼠处死前取双肾标本并采集血液标本。解除梗阻后将幼鼠放置于代谢笼中,记录24 h饮水量和尿液量,并收集尿液用于检测尿液渗透压的变化。检测各组幼鼠血浆渗透压、血肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平,采用免疫组织化学、Western blot检测各组肾脏组织中AQP-1蛋白表达水平。结果BUO-R后3 d,24 h饮水量和尿液量BUO-R组最多,BUO-R+EPO组次之,Sham组最少(P<0.05);尿液渗透压Sham组最高,BUO-R+EPO组次之,BUO-R组最低(P<0.05);血浆渗透压、Cr、BUN BUO-R组最高,BUO-R+EPO组次之,Sham组最低,但均低于BUO组(P<0.05)。梗阻解除后7 d,Sham组无明显变化,BUO-R组和BUO-R+EPO组以上各项指标逐渐恢复,但仍未达到正常水平(P<0.05),BUO-R组与BUO-R+EPO组比较差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学结果显示Sham组染色强度最强,BUO-R+EPO组次之,BUO-R组再次,BUO组最弱;解除梗阻后7 d与解除梗阻后3 d相比,BUO-R+EPO组和BUO-R组染色强度均增强,仍低于Sham组。经Western blot进一步验证,各组幼鼠肾脏AQP-1表达量Sham组最高,BUO-R+EPO组次之,BUO-R组再次,BUO组最低(P<0.05);解除梗阻后7 d与解除梗阻后3 d相比,BUO-R+EPO组、BUO-R组表达量均增高,但仍低于Sham组(P<0.05)。结论EPO能够促进BUO-R幼鼠肾脏AQP-1蛋白表达及功能恢复。